景洪哥纳香醇提物对两株人肿瘤细胞体外细胞毒作用初探

摘要：目的：观察景洪哥纳香醇提物体外抗肿瘤活性。方法：通过改良MTT法，考察不同浓度的洪哥纳香醇提物体外对人胃癌细胞MKN-28及人肝癌细胞SMMC-7721的细胞毒作用。结果：100μg/mL景洪哥纳香醇提物对MKN-28、SMMC-7721的细胞增殖抑制率可达95%以上。在一定的剂量范围内，洪哥纳香醇提物对MKN-28的增殖抑制能力具有一定的剂量依赖性，而对SMMC-7721则不明显。其IC50分别为3102μg/mL、1888μg/mL。结论：景洪哥纳香醇提物体外对MKN-28、SMMC-7721具有显著的抗肿瘤活性。

关键词：醇提物、细胞毒、MKN-28、SMMC-7721

中图分类号：R9694文献标识码：A

文章编号：1007-2349（2013）02-0048-02

恶性肿瘤严重的威胁着人类生命和健康，其发病率和死亡率在世界许多国家和地区居首位。据WHO预测，到2020年全球肿瘤发病率将上升50%，癌症病人将增加的近1500万，恶性肿瘤将成为21世纪危害人类健康的头号杀手。目前已上市的抗肿瘤药物缺乏细胞毒性特异性，在杀伤肿瘤细胞的同时，往往无选择地杀伤正常细胞，特别是增生活跃的造血干细胞，正常细胞的损伤常导致严重的并发症，影响治疗效果和患者依从性。而近年来，从天然药物中寻找高效低毒的抗肿瘤药物成为研究热点[1]。

景洪哥纳香系蕃荔枝科哥纳香属植物，全世界约50种，分布于热带及亚热带地区[2]。我国产10种，分布于西南、华南、台湾等省区。在民间主要用于清热、杀虫、抗癌、抗疟等[3]。笔者通过体外观察景洪哥纳香醇提物对两株人肿瘤细胞株的抗增殖作用，初步判断其抗肿瘤活性。为将景洪哥纳香抗肿瘤活性的进一步研究提供必要的前期基础。

1材料与方法

11材料人胃癌细胞MKN-28、人肝癌细胞SMMC-7721购自于中国科学院上海细胞库；RMPI-1640培养基购自于GIBCO公司；新生牛血清购自于杭州四季青试剂公司；胰蛋白酶、二甲基亚砜（DMSO）、噻唑蓝（MTT）购自于Sigma公司；三联液（10mL SDS，5mL异丁醇，012mL HCL，定容至100mL）由实验室自己配置。注射用青霉素钠、注射用硫酸链霉素购自于大连美罗大药厂。

12细胞培养用RPMI-1640培养液含10%新生牛血清、100 kU/L青霉素、100 kU/L链霉素，在37 ℃、5 %的二氧化碳培养箱中常规培养，25 g/L胰酶+02 g/L EDTA消化传代，取对数生长期的细胞用于实验。

13体外抗增殖作用采用改良MTT法，取对数生长期的细胞，以4×104/mL、90 μL /孔接种于96孔板中，分别加入阴性对照组生理盐水（NS）、阳性对照组（终浓度为01、1、10 μg/mL的顺铂）及终浓度分别为1、3、10、30、100 μg/mL的各种景洪哥纳香醇提物，每个浓度均设4个平行孔，于37℃、5%CO2培养箱内培养48 h，每孔加入5 g/ L MTT 10 μL，振荡混匀，4h后，每孔加入100 μL三联液，12 h后，轻轻振荡15 min，在酶标仪上于490 nm/570 nm双波长下测定OD值，计算细胞增殖抑制率：

细胞抑制率=（1-实验组OD值/对照组OD值）×100%

并利用Gwbasic软件计算半数抑制浓度（IC50）。

2结果

21形态学观察不同浓度的景洪哥纳香醇提物用于两种人肿瘤细胞48h后，光学显微镜下观察可见细胞增殖被显著抑制（见图1、图2）。高浓度景洪哥纳香醇提物与正常组比较，细胞贴壁能力下降，由不规则形状逐渐变圆、皱缩、折光性降低，细胞数量显著减少，可见大量细胞碎片。且发现景洪哥纳香醇提物对两株人肿瘤细胞增殖抑制能力有一定的剂量依赖性。

22体外细胞增殖抑制作用改良MTT法观察景洪哥纳香醇提物对细胞的细胞毒作用，发现景洪哥纳香醇提物在一定的剂量范围内，可以显著的抑制MKN-28细胞的增殖能力，且具有显著的剂量依赖性，其IC50为3102μg/mL。而其对SMMC-7721同样具有显著的细胞毒作用，但是剂量依赖性不明显，其IC50为1888μg/mL。观察发现，100μg/mL景洪哥纳香醇提物对这两株人肿瘤细胞增殖抑制率可达95%以上。随着浓度的降低，其细胞毒作用也逐渐降低。（见图3）

3讨论

中医药在治疗癌症方面有其独到之处。近年来，从中药中筛选抗癌活性成分以及抗癌先导化合物已成为这一领域研究的热点。据不完全统计，来源于植物药的抗癌制剂，占总抗癌药的1/3左右[4]。紫杉醇、喜树碱、长春新碱等已作为许多肿瘤的首选药。我国的药用植物种质资源丰富，如果能将中药中抗肿瘤有效成分分离出来，明确其抗肿瘤作用及机理，对于抗肿瘤药物的研制开发以及肿瘤治疗具有非常重要的意义。[JP]

番荔枝科属植物抗肿瘤活性显著，在上世纪90年代就被多位国内外学者所关注[5]。景洪哥纳香是番荔枝科哥纳香属植物，其抗肿瘤活性近年也开始引起学者的关注[6]。笔者对景洪哥纳香的醇提物在体外进行了初步细胞毒活性测试，光学显微镜下观察发现景洪哥纳香醇提物高浓度时可以显著抑制细胞增殖，且发现大量细胞碎片，提示笔者其抗MKN-28增殖作用的机制可能是直接杀死细胞，而不仅仅是诱导细胞凋亡。改良MTT法研究发现其抗肿瘤活性显著，且具有一定的剂量依赖性。提示笔者可以进一步观察其对其它人肿瘤细胞株细胞毒作用如何、以及其细胞毒活性是否存在时间依赖性及其抗肿瘤机制。

笔者通过体外观察两株人肿瘤细胞体外实验，对景洪哥纳香醇提物抗肿瘤活性进行初探，以期为景洪哥纳香的抗肿瘤活性研究提供必要的前期基础。[KH*1D]

参考文献：

[1]范治军，崔英中草药抗肿瘤的研究进展[J].中国医学文摘（肿瘤学），2005 02：152-153

[2]中国科学院编辑委员会中国植物志[M].第30 卷北京：科学出版社，1978：64

[3]中国科学院昆明植物研究所云南植物志[M].北京：科学出版社，1991：51

[4]刘延泽，陈士林，马培，等中草药中发现新抗癌药物的途径[J].现代药物与临床，2012，04：323-337

[5]杨根金，顾正兵，梁华清，等用核磁共振研究和确定景洪哥纳香中一种新生物碱的化学结构[A].第十届全国波谱学学术会议论文摘要集[C].中国物理学会波谱学专业委员会：1998：2

[6]姜苗苗，冯毅凡，张雪，等景洪哥纳香根的化学成分研究（Ⅱ）[J].中草药，2011，12：2386-2388[JX*1]