黑莓的组培快繁技术研究

焦 宏

（辽宁省森林经营研究所，辽宁 丹东 118002）

黑莓（Blackberries），属蔷薇科悬钩子属植物。浆果柔嫩多汁，色泽宜人，风味独特。其浆果含有20种氨基酸和多种维生素，总糖含量为3.98%，总酸为2.24%，VE 70～160μg／g，VC 22.1mg／100g，尤其特含有超氧化物歧化酶（SOD）含量1579～2151μg／g和硒（具防癌治癌作用）含量2.07μg／g均较高，在各种果类中罕见。由于黑莓的各种生理活性物含量高，所以具有促进代谢、降压降血脂、抗心率失常等作用。是目前风靡世界的“第三代水果”，在国际市场上被誉为黄金水果。其浆果中所含的水杨酸，可作为发汗剂，是治疗感冒、流感、咽喉炎的良好降热食品。根浸酒可作为舒筋活血、消炎退肿的药剂，茎叶煎水可洗痔疮等。果实还富含挥发性的具防腐作用的抗生素物质。黑树莓浆果除供鲜食外，主要用来加工制成各种食品，如果汁、果冻、微发酵饮料、清凉饮料、糖渍果实、果酱、果酒及果汁糖浆等。我们用组织培养技术加快繁殖，为该品种的推广提供一条有效、快捷的途径。

1 试验材料与方法

1.1 材料来源

试验材料取自辽宁省森林经营研究所苗圃基地，采集黑莓当年生枝条，以幼嫩茎段为外植体。

1.2 试验方法

试验程序：外植体处理→接种→增殖培养→生根培养→移栽

外植体处理：切取3cm带顶芽或腋芽的幼嫩茎段去叶片留叶柄，在流水状态下冲洗60min→在无菌的条件下用75%酒精浸泡15s→再用0.1%HgCl2溶液消毒7～8min→无菌水冲洗4～5次→用滤纸吸去水分→将茎段切成1～2腋芽的小段。

培养基的制作。以MS为基本培养基，按激素6-BA、NAA、IBA、IAA、GA3含量的不同，诱导增殖培养基设7种处理（培养基1～7），生根培养基设3种处理（培养基8～10），培养基配方见表1。

表1 培养基配方 mg·L-1

表1中培养基蔗糖含量：分化和继代培养基为30g／L，生根培养基为25g／L。琼脂5.5g／L，pH5.6～5.8，所有培养基都经过高压蒸汽灭菌20min（120～125℃，115MPa）。

培养条件。培养温度20～22℃，每天光照15h，光强度2000lx。

2 结果与分析

2.1 外植体诱导培养基

外植体培养15d左右，在1、2、3号培养基中均有腋芽萌动并逐渐伸长生长，20d左右4、5、6号培养基中腋芽基部开始逐渐膨大，形成愈伤组织，颜色深绿致密。50d左右在1、2号培养基中开始形成丛生芽，苗小但数量多，3号培养基苗数量比1、2号的数量要少，而4、5、、6培养基中苗最少。

综上所述，用1、2号培养基进行诱导培养较为理想，一般在2个周期40～50d即能诱导出丛生芽。

2.2 继代培养

将较高的试管苗切成1cm左右茎段、大块的丛生苗分成小块，继续转入1、2号培养基中进行继代培养，增殖系数在6倍以上。

2.3 壮苗培养

将丛生小苗转入7号培养基中，20～30d，小苗逐渐长高到2cm以上。

2.4 生根培养

在无菌状态下，选择2cm以上健壮小苗，转入不同的生根培养基中进行生根培养，结果见表2。

表2 试管苗在不同培养基生根情况

从表2中可以看出，在9号培养基中生根，所需天数最少，根条数最多，并且根系生长情况最好，所以9号培养基为最适生根培养基。

2.5 组培苗移栽

组培苗移栽是组培快繁的重要环节，从瓶里移到瓶外苗木生长情况发生了根本改变，因此要求精细作业。当苗根长到1.5cm左右时，打开瓶盖，取出小苗，洗净培养基，用多菌灵500～800倍液浸泡30min左右，然后栽入用0.1%高锰酸钾消毒过的苗床上。苗床基质分4个处理，分别为沙∶土＝1∶1、沙∶蛭石＝1∶1、纯沙、纯蛭石。苗木移栽后，每天浇水1次，每周喷一次百菌清和营养液，盖塑料拱棚，保温保湿，7天后逐渐增加通风量，并逐渐减少浇水，1个月后移植到营养钵或者直接移栽大田。试验结果表明，以纯沙为基质最好，成活率95%以上。

3 结论

3.1 茎段、茎尖培养在1号培养基（MS＋BA0.1＋GA30.1＋IBA0.5＋IAA0.5）、2号培养基（MS＋BA0.1＋GA30.1＋IBA1）上诱导培养（40～50）d形成丛生芽，继续转入1、2号培养基中继代培养，增殖系数在6倍以上。达到一定数量后转入7号培养基（MS＋BA0.6＋GA30.5＋IBA0.25＋IAA0.25）壮苗培养20～30的，苗高长到2cm以上。

3.2 生根培养以9号培养基（1／2MS＋IBA0.1）最好，生根率达到98%以上且每株可生5～10条根。

3.3 移栽基质以纯沙为最好，成活率95%以上，并且成本最低，资源丰富。

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［2］ 张慧琴，谢鸣，蒋桂华，等.树莓试管苗移栽适应性试验［J］.浙江农业科学，2002（3）：118-119.

［3］ 沈海龙，植物组织培养［M］.北京：中国林业出版社，79-80.

［4］ 王宏，于辉.树莓茎尖组织培养试验简报［J］.沈阳农业大学学报，2002，33（4）：319-320.