重组禽流感病毒灭活疫苗不同注射方法抗体效果的研究

潘传毅，邬立权，郑德富

（哈药集团生物疫苗有限公司，黑龙江哈尔滨150069）

最近几年，高致病性禽流感在世界一些地区流行，给养禽业造成了巨大的损失。疫苗免疫接种是有效防控禽流感的重要措施之一。重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型，Re-6株)在预防控制高致病性禽流感方面发挥了重要的作用。已有试验和很多应用实践证明，该疫苗对禽类均有良好的免疫效果。但是对于重组禽流感病毒灭活疫苗的接种部位，各生产厂家有不同的推荐方法。为此我们对重组禽流感病毒灭活疫苗分别采取了颈部皮下注射和胸部肌肉注射的免疫效果进行了对比试验，目的是为选择最佳的注射方法提供参考。

一、材料与方法

1.疫苗。重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型，Re-6株)3批，哈药集团生物疫苗有限公司生产，批号 201271，201272,201273 。

2.血凝抑制试验用抗原。批号201207，哈尔滨维科生物技术开发公司生产。

3.试验动物。SPF鸡，购自南京梅里亚公司。

4.主要仪器。血凝板、移液器、微量振荡器、低速离心机等。

5.主要试剂。0.1 mol/LPBS(PH 7.2)，1%鸡红细胞悬液。

6.试验方法。

（1）将70只SPF鸡随机分为7组，每组10只，分别饲养在负压隔离器中。1、2组用批号为201271的重组了禽流感病毒灭活疫苗；3、4组用批号为201272的重组禽流感病毒灭活疫苗；5、6组用批号为201273的重组禽流感病毒灭活疫苗；三批疫苗均采用颈部皮下注射和胸部肌肉注射方法接种28日龄的SPF鸡。注射剂量为0.3 ml/只。7组为空白对照。分别于注射后第14天、21天和28天翅静脉采血，检测HI抗体效价。

（2）HI抗体效价测定 按照《中华人民共和国兽药典》和《重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型，Re-6株)制造及检验试行规程》中HI试验操作方法进行。每次测定后计算各组的几何平均值。

二、实验结果

表1 颈部皮下注射和胸部肌肉注射14天HI抗体效价

表2 颈部皮下注射和胸部肌肉注射21天HI抗体效价

表3 颈部皮下注射和胸部肌肉注射28天HI抗体效价

1.颈部皮下注射和胸部肌肉注射对SPF鸡的免疫试验结果见表1、表2、表3。颈部皮下注射后14天HI抗体值在6.78～7.1log2之间，平均值7.0 log2；21天HI抗体值在8.7～9.2 log2之间，平均值8.9 log2；28天HI抗体值在9.4～9.6 log2之间，平均值9.5 log2；胸部肌肉注射后14天HI抗体值在5.9～6.3 log2之间，平均值6.01 log2；21天HI抗体值在7.90～8.6 log2之间，平均值8.24 log2；28天HI抗体值在9.0～9.1 log2之间，平均值9.07 log2；对比试验结果显示，颈部皮下注射比胸部肌肉注射诱导产生抗体速度快且水平高。

三、分析与结论

1.实验结果表明，不同批次的重组禽流感灭活疫苗颈部皮下注射比胸部肌肉注射诱导产生抗体速度快且水平高。

2.重组禽流感灭活疫苗是W/O乳型，乳剂具有分散度大，生物利用度高，靶向性强的特点。其靶向性在于它对淋巴的亲和性，易聚集于附近的淋巴器官。重组禽流感灭活疫苗，乳滴大小一般在1～100微米之间，疫苗经颈部皮下注射后聚集于鸡颈部的中枢免疫器官胸腺，小于3微米的微粒分散体系能很快被胸腺髓质中的巨噬细胞或树突细胞吞噬。而聚集于胸腺附近3～100微米之间的疫苗微粒经机体降解与吸收后逐渐缓慢地释放抗原。疫苗注射在免疫器官附近，能提高免疫效应的作用。因此重组禽流感灭活疫苗经颈部皮下注射为未成年鸡最佳注射方法。