三酰甘油与总胆固醇试剂对总胆汁酸测定的干扰

黄江兵 黄明珠

广东省湛江中心人民医院，广东湛江 524037

目前，使用全自动生化分析仪进行总胆汁酸（TBA）测定已极为普遍，但在样品检测时发现，先进行三酰甘油（TG）和总胆固醇（TC）试剂检测，再进行总胆汁酸测定时所获结果升高，甚至出现假阳性结果[1]。为具体研究三酰甘油和总胆固醇试剂对总胆汁酸测定的干扰，以及试剂针、搅拌棒和比色杯清洗对结果的影响，本研究采用同一批血清，单独测量或在TC、TG测量后立刻进行TBA检测，并使用0.5%次氯酸钠、无水乙醇和盐酸对试剂针和比色杯进行清洗，以观察其对总胆汁酸的干扰作用。

1 资料与方法

1.1 仪器和试剂

美国MD2000型全自动生化分析仪；酶法循环TBA液体双试剂 （罗氏诊断上海有限公司生产，批号10063/901006/1）；TC、TG 单试剂（德国 Centronic公司生产，南京威特曼公司分装，批号0609010、0609020）；生理盐水；蒸馏水；样品为Randox质控血清。

1.2 实验方法

（1）对仪器全部清洗Wash All后，以TBA配套校准品定标，单独连续测定Randox2质控血清10次，以其均值作为实验对照；（2）先测量TC或TG后，再测量TBA，以评估TC、TG对TBA的污染；（3）设定特殊检测和清洗程序，按生化仪设计，在菜单上选择“干扰”，在第一、第二对话框下分别添加 TBA 和 TC、TG，测量 TC、TG 后，测量 TBA；（4）同（3）检测和清洗之外，增加试剂针的专门清洗；（5）同（3）外，增加比色杯的专门清洗；（6）同（3）外，同时增加比色杯和试剂针的专门清洗。以上方案均连续测量10次，以其平均值为最终测量值。同时进行TC、TG试剂中TBA含量的测定。

增加测定通道，在TC、TG测量完成后，连续10次测定TBA值，观察测定通道对干扰的消除。

测定TC、TG试剂中TBA含量，并与生理盐水比较。

1.3 统计分析

仪器检测全部完成后，双击桌面“康金实验室管理系统”将结果存入报告软件中。数据导入SPSS 19.0软件，进行分析。数据以±s进行描述，两两比较选择配对资料t检验进行。

2 结果

2.1 单独测量质控血清的结果

单独测量质控血清TBA为（20.34±4.66）μmol/L。

2.2 TG对TBA的影响

先测量TG后再测量TBA，其均值为（64.33±3.22）μmol/L，与对照相比差异有统计学意义。经过特殊清洗及增加比色杯和试剂针清洗后，TBA测量值与正常比较无区别 （P>0.05）（表 1）。

表1 TG测量后不同处理对TBA测量的影响

2.3 TC测量对TBA的影响

先测量TC后再测量TBA，其均值为（56.34±3.56）μmol/L，与对照相比差异有统计学意义。经过特殊清洗后，仍高于对照（P<0.05），但增加比色杯和试剂针清洗后，TBA测量值与正常比较无区别（P>0.05）（表 2）。

表2 TC测量后不同处理对TBA测量的影响

2.4 TC、TG测量后连续10次TBA含量

先进行TC、TG测量后连续10次TBA含量，可以看到前6次结果与对照之间差异有统计学意义 （P<0.05），从第7次开始，差异性消失（P>0.05），但测量值仍有轻微区别（表 3）。

2.4 TC、TG试剂中干扰物质TBA含量测定

对TC、TG试剂进行TBA检测，并以生理盐水为对照，结果发现，生理盐水中TBA为0.1μmol/L，TC中TBA含量为803μmol/L，TG中TBA为732μmol/L，均高于生理盐水（P<0.01）。

3 讨论

TBA是人体肝脏分解代谢产物，其测定对肝硬化、胆汁淤积等疾病诊断治疗和预后具有重要意义。由于目前生化测定仪采用第五代循环酶放大法，其灵敏度高，假阳性率也相应增加[2]。随着仪器使用时间的延长，样品、试剂甚至底物之间的交叉污染也日益严重[3]。交叉污染的来源又常以试剂针和比色杯多见。虽然生化仪自身设有清洗程序，但MD2000型全自动生化分析仪的清洗效果还有待验证，本实验即对此进行了探讨。

表 3 TC、TG 测量后连续 10 次 TBA 含量（μmol/L，±s）

表 3 TC、TG 测量后连续 10 次 TBA 含量（μmol/L，±s）

注：与对照相比，*P<0.05、**P<0.01

连续测定次数 TC处理后TBA值 TG处理后TBA值对照1234567891 0 20.34±4.66 55.65±1.34**43.56±4.55**34.32±2.45**27.15±7.66**26.43±5.44*24.32±3.98*23.25±1.43 21.34±4.65 20.53±3.53 20.42±1.32 20.34±4.66 62.36±3.27**54.26±3.98**45.28±1.54**32.76±2.76**28.13±4.23**25.35±3.78*23.27±3.87 22.18±3.62 20.99±4.37 20.51±1.58

研究发现，对MD2000产品来说，TC或TG对后续的TBA存在严重的干扰。曾有学者报道日立公司7170型全自动生化分析仪也存在同样问题[4]。与日立系列不同的是，MD生化分析仪经过系统自设的清洗程序就可以大大减少干扰的存在[5]。尤其是TG干扰，仅需设定自动清洗程序即可达到抗干扰效果。但对数据仔细分析仍可以看到，虽然固定清洗后TBA测量值已与对照之间无区别，但测量值仍略高于对照，即使单独增加试剂针清洗或比色杯清洗，该趋势仍然存在。而在固定清洗程序联合试剂针、比色杯清洗后，其测量值接近对照，说明使用MD2000对TBA、TG测量时，如选择联合清洗程序，其误差可以忽略不计。

TC测量对后续的TBA也有影响。使用固定清洗程序后，其干扰仍然存在。甚至在增加试剂针和比色杯清洗后，其显著性仍接近0.05。但在同时增加试剂针很比色杯清洗后，显著性消失，说明TC污染可能同时出现在这两个部位，单纯一个位置的清洗不能完全消除该影响[6]，应该进行全面处理。

对测量间隔的分析可以看到，TG、TC测量后经过6次测量，其干扰仍然存在[7]。从第7次开始，所获结果才与对照之间没有区别（P＞0.05），但数值上仍有轻微差异。因此若要通过TG、TC测量后增加通道来减少TBA测量误差，至少需要增加6通道[8]。对于某些患者血清TBA在临界值附近的可疑患者，更应该加以注意，最好在增加通道的同时加以仪器的清洗。

对TG、TC试剂的TBA测试可用看到，这两种因素对TBA的干扰是由于试剂本身的因素造成的，在目前的技术条件下，很难从根本上预防。只能通过优先测量TBA[9]或上述的仪器清洗和增加通道来尽量减少污染，若要完全消除，只能期待技术的进一步提高。

[1]丁双双，汪皓，沈霞.HDL-C试剂干扰血清总胆汁酸测定结果的原因分析及对策[J].检验医学，2011，26（3）：215-217

[2]王春雷，陆文英，张波.常规生化试剂对总胆汁酸测定的干扰分析[J].实用医技杂志，2007，14（22）：2974-2975.

[3]孟令章.总胆固醇三酰甘油试剂对总胆汁酸测定的交叉污染及对策[J].西部医学，2010，22（7）：1308-1310.

[4]邓正辉，张华，李龙平.生化试剂对胆汁酸测定的交叉污染及防范措施[J].中国实用医药，2008，3（10）：55-56.

[5]崔军.甘油三酯和总胆固醇试剂对总胆汁酸检测结果的影响[J].华西医学，2010，25（7）：1328-1310.

[6]马菊芬，李建忠.总胆固醇 甘油三酯试剂对总胆汁酸测定结果的影响[J].长冶医学院学报，2007，21（5）：383-384.

[7]梁耀荣，谢国强.生化试剂对循环酶法测定血清总胆汁酸的干扰因素分析及改进措施[J].现代医院，2012，12（2）：64-66.

[8]向学优，王新华，汤建华，等.尿酸试剂携带污染对总胆汁酸测定结果的影响[J].中华医护杂志，2006，3（2）：180-181.

[9]郁淼，张莉，秦兵.通过试验设计提高总胆汁酸检测试剂盒的抗干扰性[J].检验医学与临床，2012，9（6）：727-728.