月经病虚寒证患者T细胞亚群与生殖激素的变化＊

刘艳芹，段彦苍，杜惠兰

(河北医科大学中西医结合学院，石家庄 050091)

虚寒证在人群中患病率为9.95%，而女性(13.21%)明显高于男性(5.56%)［1］。虚寒型月经病为女性常见病，故拟以月经病虚寒证患者为研究对象，研究正常人、虚寒型月经病患者T细胞亚群与生殖激素的相关关系，初步探讨月经病虚寒证的部分发病机制，现总结报告如下。

1 研究对象

1.1 一般资料

2006年10月至2007年9月在河北医科大学中医学院门诊部、河北医科大学第二医院生殖中心就诊，符合月经病虚寒证纳入与排除标准的患者30例，为月经病虚寒证组(简称“虚寒组”)，其中痛经10例，月经后期12例，月经过少8例;年龄最大44岁，最小22岁，平均年龄(29.77±5.75)岁。选取正常健康女性志愿者30例为正常组，年龄最大40岁，最小20岁，平均年龄(28.57±6.02)岁，2组之间年龄分布均衡差异无统计学意义。

1.2 月经病虚寒证诊断标准

参照《虚寒证辨证因子等级量化标准的研究》［2］、《典型虚寒证的辨证统计分析》［3］、《中医证候辨治规范》［4］和《中医妇科学》［5］制定。

1.2.1 虚寒证诊断标准 主证:四肢发冷、畏寒怕冷、身体蜷卧、喜温喜暖。次证:面色苍白、小便清长、大便稀溏、沉迟无力或沉细弱者、舌淡苔白而润或兼滑或舌体胖嫩者。具备虚寒证主证2项以上、次证1项以上可诊断为虚寒证。

1.2.2 月经病诊断标准 ①痛经:经期或行经前后，出现周期性小腹疼痛，或痛引腰骶;②月经后期:月经周期延后7d以上;③月经过少:月经周期基本正常，月经量较以往明显减少，甚或点滴即净，或小于30ml，或经期少于2d。具备以上1项以上、连续出现2个月经周期以上者。

1.2.3 纳入与排除标准 纳入标准:同时具备虚寒证和月经病的诊断标准，年龄为18～45周岁;排除标准:除外肾上腺、甲状腺、垂体等内分泌腺功能异常、心脑血管疾病、肝肾疾病、神经、精神系统疾病、血液病、卵巢肿瘤、生殖器官器质性病变患者，3个月内服用避孕药或服用过其他含有激素类药物的患者。

2 材料与方法

2.1 试剂

E2、P、T、FSH、LH 放射免疫分析试剂盒为天津九鼎医学生物有限公司产品，IgG1FITC、CD3-PC5、PerCP、CD4-PE、CD8-PE 均为 BeckMan-Coulter公司产品，CD30-FITC为Caltag公司产品。

2.2 方法

2.2.1 生殖激素检测 E2、P、T、FSH、LH采用放射免疫分析法，按试剂盒说明书同批检测。于经期第2天清晨空腹取坐位，肘静脉采血6ml离心，取血清置－20℃冰箱备检。

2.2.2 T细胞亚群检测 于经期第2天清晨空腹，肘静脉采血1ml，迅速将血标本移至无菌含抗凝剂的塑料试管中混匀，于24h内检测。取流式专用试管3支，分别标记为CD3/CD4/IgG1(为对照管)、CD3/CD4/CD30、CD3/CD8/CD30，然后加入相应荧光标记的单抗(IgG1FITC:10ul、CD3:5ul;CD4:10ul;CD8:10ul、CD30:10ul)。分别加入标本各50ul，涡旋混匀，室温避光反应20min;加入溶血素50ul，涡旋混匀，室温避光反应10min;加入纯水500ul，涡旋混匀，室温避光反应10min;观察溶血完全后加 PBS 3ml，1200r/min离心3～5min弃上清，留细胞沉淀，4℃保存，备上机。上机分析应用Cellquest软件，每个标本摄取10000个细胞。以FSC/SSC设门，圈定淋巴细胞群进行分析，结果由该软件自动统计。

2.3 统计学方法

应用SPSS 13.0统计软件进行分析处理，所有数据以均数±标准差(±s)表示，两变量采用独立样本比较 t检验，相关关系用直线相关分析，以Pearson相关系数表示，P＜0.05为有统计学意义。

3 结果

3.1 月经病虚寒证患者生殖激素水平的变化

表1显示，与正常组比较，虚寒组患者血清E2、LH降低(P＜0.05)，T、FSH 显著降低(P＜0.01)，差异有统计学意义;P有降低趋势，但无统计学意义(P ＞0.05)。

表1 虚寒组与正常组性激素含量比较(±s)

表1 虚寒组与正常组性激素含量比较(±s)

注:与正常组比较:▽P＜0.05，▽▽P＜0.01

组 别 例数 E2(pg/ml)T(ng/dl)P(ng/ml)FSH(mIU/ml)LH(mIU/ml)虚寒组 30 63.35±16.33▽ 42.60±16.35▽▽ 0.82±0.34 5.64±2.46▽▽ 5.25±1.84▽.88 6.76±2.28正常组 30 74.03±20.03 52.77±12.65 1.67±0.50 7.24±1

3.2 月经病虚寒证患者外周血T细胞亚群的变化

表2显示，与正常组比较，虚寒组病人外周血Th1细胞升高(P ＜0.01)，Th2、Tc2、Tc1细胞、Th2/Th1降低(P＜0.01)，Tc2/Tc1降低(P＜0.05)，均有统计学意义。

表2 虚寒组与正常组Th2、Th1、Tc2、Tc1含量比较(±s)

表2 虚寒组与正常组Th2、Th1、Tc2、Tc1含量比较(±s)

注:与正常组比较:▽P＜0.05，▽▽P＜0.01

组 别 例数Th2 Th1 Th2/Th1 Tc2 Tc1 Tc2/Tc1虚寒组 30 1.439±0.67▽▽ 41.44±5.30▽▽ 0.04±0.02▽▽ 4.11±1.68▽▽ 13.02±2.10▽▽ 0.33±0.17▽8 16.28±3.29 0.73±0.44正常组 30 2.28±1.25 38.08±4.32 0.06±0.04 10.63±2.5

3.3 月经病虚寒证患者外周血T细胞亚群与生殖激素的关系

研究结果表明，血清Th2细胞、Th2/Th1与E2呈显著正相关(r=0.545，P＜0.01;r=0.580，P＜0.01)，Th1细胞与 E2呈负相关(r=－0.456，P＜0.05)，Th2、Tc2细胞、Th2/Th1与 T呈正相关(r=0.549，P ＜0.01;r=0.509，P ＜0.01;r=0.399，P ＜0.05)，Th1细胞与FSH呈负相关(r=－0.399，P＜0.05)，均有统计学意义。

4 讨论

中医认为，寒为阴邪，易伤阳气，阳气受损则失去正常温煦气化之作用。寒性凝滞，性主收引，可使血脉运行不畅。《素问·举痛论》说:“寒气入经而稽迟，泣而不行，客于脉外则血少;客于脉中则气不通。”寒邪致病又分为外寒与内寒，由于内寒是阳微气虚、生化功能不足的一种表现，故又称为“虚寒”。在妇产科临床中则以虚寒证较多［6］，虚寒证在人群中患病率高达9.95%，且女性(13.21%)明显高于男性(5.56%)［1］。月经病虚寒证的主要病机是机体阳气不足、虚寒内生，使冲任胞宫失煦或阳虚运血迟滞引起冲任瘀阻。《史记·仓公传》云:“内寒，月事不下也。”《傅青主女科》曰:“后期而来少，血寒而不足。”《景岳全书·妇人规》云:“凡血寒者，经必后期而至。然血何以寒?亦惟阳气不足，则寒从内生，而生化失期，是即所谓寒也。”吴德汉《医理辑要》说:“易寒为病者，阳气素弱。”若妇女素体阳虚，再加以生活不节，如过度贪凉饮冷，冒雨涉水，或内伤久病阳气耗伤则寒从内生，阳气不运，影响冲任胞宫的功能，子宫失煦，胞脉失养，排经欠畅，溢而无源，经血凝滞，临床上表现为月经过少、月经后期、闭经、痛经等虚寒型月经病。

Tc1、Th1细胞为Ⅰ型 T淋巴细胞，Tc2、Th2细胞为Ⅱ型T淋巴细胞，Th0细胞按一定比例向Th1、Th2细胞分化，两者具有相互调节、相互制约的特点，处于相对平衡状态，维持机体正常的细胞免疫和体液免疫［7］。其中Tc1与Th1作用相似，Tc2与Th2作用相似［8～10］。Ⅰ/Ⅱ型T淋巴细胞极性漂移是许多疾病发生发展的病理基础，一方优势必然引起另一方弱势［11］，若Ⅰ/Ⅱ型细胞的数量和功能发生异常，机体就会出现免疫功能紊乱，并发生一系列病理变化。Ⅰ、Ⅱ型T淋巴细胞之间的比例失衡决定着免疫反应的方向，不同的病理过程可以特征化为向Ⅰ型或Ⅱ型免疫反应的极化［12］。

内分泌系统和免疫系统在各个系统的生理病理反应中起着重要的信息传递和调节作用［13］，二者相互调节。一方面，免疫细胞所分泌的细胞因子如白细胞介素(IL)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子(TGF)等不仅对HPO轴发挥自分泌、旁分泌调控作用，并有可能作为HPO轴反馈调节中的传递信号之一，在机体的生殖方面发挥重要作用。另一方面，性激素可能通过调节T细胞受体的信号系统、T淋巴细胞和抗原提呈细胞(APC)活化分子的表达、细胞因子基因的转录和翻译等影响免疫系统［14］。一般认为，E2是免疫刺激性激素，T是免疫保护性激素［15］，雄性激素可促进 Th0细胞向 Th1细胞分化［16］。

FSH主要功能是促进卵泡的生长发育，并激活卵泡颗粒细胞内的芳香化酶，使雄激素转化为雌激素。卵巢间质细胞及卵泡膜细胞上有LH受体，LH与之结合后启动细胞内系列酶合成雄激素。本研究中月经病虚寒证患者血清FSH、LH、E2、T减少，FSH分泌减少影响了卵泡发育，而LH水平降低，导致间质细胞膜及泡膜细胞膜合成T减少，二者导致E2合成分泌减少。亦可能是月经病虚寒证患者盆腔局部深部温度较低［17］，影响卵巢血供，造成E2、T合成分泌减少。总之，月经病虚寒证机体生殖内分泌系统处于抑制状态，从而表现为月经后期、月经量少和闭经等。

阳气对于人体具有温煦、推动、防御等功能，其部分作用与现代医学的免疫功能具有相通之处［18］。中医证型与TH细胞具有相关性，不同中医证型的TH细胞具有不同的特点［19，20］。本研究中，与正常人比较月经病虚寒证患者Th2、Tc2、Tc1细胞降低，Th1细胞升高，Th2/Th1、Tc2/Tc1降低。提示月经病虚寒证可能与机体Ⅰ/Ⅱ型T淋巴细胞有关，即Ⅰ/Ⅱ型T淋巴细胞的极性向Ⅰ型T淋巴细胞偏移，Ⅱ型T淋巴细胞处于弱势，机体防御功能下降导致阳虚生内寒、冲任胞宫失煦进而引起本病证。

本实验相关性研究显示，月经病虚寒证患者Th2、Tc2水平与血清生殖激素呈正相关，Th1水平与血清生殖激素呈负相关。推测虚寒型月经病的发生与生殖激素分泌受到抑制、免疫调节功能紊乱、体液免疫功能低下有关。

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