阿胶补血软胶囊对小鼠失血性贫血的影响

朱路平 赵宜红 孙 曼 杨景华 周 甜 赵新年 张雁冰 李寅超

(1河南省疾病预防控制中心，郑州，450003;2郑州大学药学院，郑州，450001;3河南省新四方制药有限公司，周口，466000)

阿胶补血软胶囊是河南省新四方制药有限公司在已上市的阿胶补血膏原剂型基础上的改进制剂，由阿胶、熟地黄、黄芪、党参、枸杞子等6味药组成［1］，具有益气补血之功效，用于久病体弱，气虚血亏。为了明确新剂型的有效性和与阿胶补血膏的等效性，我们对阿胶补血软胶囊的小鼠急性毒性及耐缺氧作用进行了初步的实验研究［2］。本实验进一步观察阿胶补血软胶囊对小鼠失血性贫血的影响。

1 材料与方法

1.1 药品 阿胶补血软胶囊，红褐色粉末，由河南省新四方制药有限公司提供，批号20110318，规格:每1 g相当于生药4.26 g，拟临床剂量为0.061 3 g·kg－1，4℃冰箱密封保存;复方阿胶浆(阳性对照药);阿胶补血膏(原剂型对照药)，由河南省新四方制药有限公司提供，批号20110215;生理盐水(N.S)，河南太龙药业股份有限公司，批号11081021。

1.2 动物 昆明种小鼠(雌雄各半)SPF级，体质量(20±2)g，河南省动物实验中心提供，动物生产许可证号:SCXK(豫)2010－0002，动物质量合格证号:0000877;饲养于郑州大学药学院实验动物房IVC设备，使用许可证号:SYXK(豫)2007－0009。适应性饲养3d后供试验用。

1.3 试剂 EPO试剂盒(美国 R＆D公司，批号:201108);蒸馏水(自制);XFA6030型全自动动物血液细胞分析仪(南京普朗医用设备有限公司);TG16－W型微量高速离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司);DJ－5000C型电子天平(中外合资亚太电子天平厂);AR1140型分析天平(梅特勒－托利多仪器上海有限公司);CDG3022A型酶联免疫监测仪(国营华东电子管厂)［3］。

1.4 模型的制作 对照组及各给药组小鼠，自造模之日起隔日由眼底后静脉丛放血0.15 mL·10g－1;同时改变其正常饮食量，饲料控制在每日75 g·kg－1体重［4］，自由饮水，连续 7 d。

1.5 动物分组及给药 实验分为阴性对照组、模型对照组、复方阿胶浆组、阿胶补血膏组、阿胶补血软胶囊0.55、1.10、2.21 g·kg－1剂量组，12 只/组，雌雄各半。各给药组于造模前7d给相应药物，给药体积20 mL·kg－1，每日1次，连续灌胃至造模第8天(即给药第15天)。模型对照组和阴性对照组给予等体积生理盐水。

1.6 小鼠外周血象的测定 在造模第0、4、7 d每只小鼠尾静脉取血20 μL，检测外周血RBC数和Hb浓度。

1.7 小鼠负重游泳时间测定［5］采用50 cm×40 cm×60 cm塑料水槽，水深约25 cm，水温(20±0.5)℃。末次给药40 min后，置小鼠在水槽中游泳，鼠尾根部负荷约10%体质量［4］的铅丝团。实验时每个水槽每次放入阴性对照组、模型对照组、复方阿胶浆组、阿胶补血膏组、阿胶补血软胶囊 0.55、1.10、2.21 g·kg－1剂量组小鼠各1只，并做好标记，用秒表计时，记录小鼠头部没于水面下5 s不能上浮的时间，作为小鼠游泳时间(min)。

1.8 小鼠血清EPO的测定 于小鼠造模后第8天负重游泳后，置笼中擦干休息5 min后摘眼球取血，制备血清，按 ELISA 法测 EPO 含量［6－7］。

2 结果

2.1 对失血性贫血小鼠外周血RBC的影响 模型对照组小鼠外周血中RBC总数自造模之日起至造模结束，均显著低于阴性对照组(P＜0.01)。阿胶补血软胶囊各剂量组在给药14 d(造模第7天)时外周血RBC数与模型对照组比均有明显升高，其中0.55 g·kg－1剂量组显著升高(P＜0.05)，与阿胶补血膏效果接近。见表1。

表1 阿胶补血软胶囊对失血性贫血小鼠外周血RBC的影响(±s，n=12)

表1 阿胶补血软胶囊对失血性贫血小鼠外周血RBC的影响(±s，n=12)

注:与模型对照组比，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;表中数据下标为当日动物存活只数(以下同)。

0 d 4 d 7 d阴性对照 等体积N.S 7.60±0.43 7.35±0.67＊＊ 7.68±0.44组别 剂量/g·kg－1 造模开始各时间点RBC总数/×1012·L－1＊＊模型对照 等体积N.S 7.66±0.48 5.66±0.56 5.90±0.51(10)复方阿胶浆 18mL·kg－1 7.95±0.57 5.97±0.92 6.74±0.41(11)＊＊阿胶补血膏 12 7.95±0.39 6.06±0.42 6.63±0.62＊＊阿胶补血软胶囊 2.21 7.81±0.74 5.89±0.78 6.17±0.55(10)阿胶补血软胶囊 1.10 7.77±0.50 5.61±1.03 6.19±0.41(11)阿胶补血软胶囊 0.55 7.63±0.74 5.98±0.74 6.54±0.50(11)*

2.2 对失血性贫血小鼠外周血Hb的影响 与阴性对照组相比，模型对照组小鼠外周血中Hb含量自造模之日起至造模结束均显著降低(P＜0.01)。阿胶补血软胶囊给药11 d(造模第4天)时2.21，1.10，0.55 g·kg－1剂量组 Hb含量显著高于模型对照组(P＜0.05)，给药14 d 时1.10，0.55 g·kg－1剂量组显著高于模型对照组(P＜0.05，P＜0.01)，与阿胶补血膏效果相当。可见阿胶补血软胶囊可升高外周血中Hb含量，减轻放血法所致外周血象的下降趋势。见表2。

表2 阿胶补血软胶囊对失血性贫血小鼠外周血Hb的影响(±s，n=12)

表2 阿胶补血软胶囊对失血性贫血小鼠外周血Hb的影响(±s，n=12)

注:与4 d模型组比较，*P ＜0.05;与7 d模型组比较，△P ＜0.05，△△P ＜0.01;与4 d、7 d阴性对照组比较，▲▲P ＜0.01。

N.S 136.25±7.25 127.58±9.54 132.17±6.87模型对照 等体积N.S 137.00±8.56 90.33±10.69▲▲ 101.90±9.11▲▲(10)复方阿胶浆 18mL·kg－1 141.58±14.92 99.58±16.04* 118.82±9.12(11)阿胶补血膏 12 137.50±7.60 102.42±7.12* 118.58±9.62阿胶补血软胶囊 2.21 139.50±13.94 101.42±12.91* 108.60±7.98(10)阿胶补血软胶囊 1.10 137.92±7.22 100.00±13.44* 118.64±27.26(11)△△阿胶补血软胶囊 0.55 134.75±11.69 102.25±10.69* 114.73±10.56(11)0 d 4 d 7 d阴性对照 等体积组别 剂量/g·kg－1造模开始各时间点Hb含量/g·L－1△

2.3 对失血性贫血小鼠血清EPO含量的影响 模型对照组小鼠眼底后静脉丛放血合并限食造模8 d后，血清中EPO含量较阴性对照组明显增加(P＜0.01)，这可能与机体自身反馈调节有关。阿胶补血软胶囊各剂量组EPO含量和模型对照组相比进一步增加，且2.21 g·kg－1剂量组有统计学意义(P＜0.05)，提示这可能是其促进造血功能的一个重要方面。见表3。

2.4 对失血性贫血小鼠负重游泳时间的影响 与阴性对照组比较，模型对照组小鼠负重游泳持续时间显著缩短(P＜0.05)。与模型对照组比较，阿胶补血软胶囊能增加小鼠负重游泳时间，其中2.21和1.10 g·kg－1剂量呈现较显著的效果(P＜0.05)，表明阿胶补血软胶囊能明显增强失血性贫血小鼠肌力和耐力，提高其抗疲劳能力，其效果不弱于阿胶补血膏。

表3 阿胶补血软胶囊对失血性贫血小鼠血清EPO的影响(±s，n=6)

表3 阿胶补血软胶囊对失血性贫血小鼠血清EPO的影响(±s，n=6)

注:与模型对照组比较，＊＊P＜0.01;与模型对照组比较，△P＜0.05。

组别 剂量/g·kg－1 EPO/IU·L －1阴性对照 等体积N.S 31.40±8.96＊＊0.55 66.87±27.66模型对照 等体积N.S 65.16±17.66复方阿胶浆 18mL·kg－1 70.25±20.61阿胶补血膏 12 81.91±31.41阿胶补血软胶囊 2.21 90.41±21.06△阿胶补血软胶囊 1.10 82.59±8.95阿胶补血软胶囊

表4 阿胶补血软胶囊对失血性贫血小鼠负重游泳时间的影响(±s)

表4 阿胶补血软胶囊对失血性贫血小鼠负重游泳时间的影响(±s)

注:与模型对照组比较，*P＜0.05;与模型组比较，△P＜0.05。

组别 剂量(g·kg－1) 游泳时间(min)阴性对照 等体积N.S 5.90±3.40*模型对照 等体积N.S 2.05±1.11(10)复方阿胶浆 18mL·kg－1 5.83±2.07(11)*阿胶补血膏 12 5.84±2.46*阿胶补血软胶囊 2.21 5.08±2.37(10)△阿胶补血软胶囊 1.10 6.03±3.13(11)△阿胶补血软胶囊 0.55 3.65±1.61(11)

3 讨论

阿胶补血软胶囊处方由阿胶、熟地黄、黄芪、党参等为主要原料组成。其中，阿胶被历代医家称为补血“圣药”［8］。现代研究表明，阿胶作为一类明胶蛋白，对促进造血系统功能作用显著，有加速RBC和Hb生长，促进骨髓造血，故有抗贫血作用［9］。熟地黄主治一切阴血不足之虚证，被誉为“壮水之主，补血之君”;熟地黄水煎剂及其提取物均有不同程度提高正常小鼠外周血象的趋势，对血虚模型小鼠其补血作用更显著［10］。黄芪补气生血，用于气血不足诸证。现代研究证实［11－12］，黄芪能够明显提高动物体能，改善动物的疲劳状态，并能够减少血清和骨骼肌中乳酸的堆积，降低血清中乳酸脱氢酶和尿素氮的含量，以及降低血清和骨骼肌丙二醛的含量。党参补中益气，生津养血，用于气血不足之证。药理研究认为，党参具有抗疲劳和提高耐高温能力，同时使RBC及Hb增加的作用［13］。上述作用均与本研究发现阿胶补血软胶囊增加贫血小鼠RBC数和Hb含量功能密切相关。

EPO作用于骨髓红系祖细胞上的受体，促进骨髓造血干细胞分化为原RBC，加速幼RBC分裂并促进Hb的合成［14］。阿胶补血软胶囊能够增加血液中EPO含量，这可能是其促进造血功能的一个重要方面。

小鼠游泳实验反映小鼠肌力、耐力、应激能力等功能，也称Porsolt实验［15］。本实验围绕阿胶补血软胶囊增强失血小鼠耐力的功效进行了初步研究，结果显示，阿胶补血膏和阿胶补血软胶囊均能显著增加小鼠游泳时间，表明阿胶补血软胶囊能明显增强失血性贫血小鼠肌力和耐力，其效果与阿胶补血膏相当。

本模型为急性失血性贫血，动物恢复会较快，若实施造模后治疗性给药，其治疗效果势必无法正确判断，所以本实验为预防性给药。结果发现，小鼠造成失血性贫血模型以后体能明显下降，RBC数目和Hb含量明显降低，EPO等激素则反射性地合成增加。阿胶补血软胶囊在提高动物体能的同时，其RBC和Hb异常明显改善，刺激EPO的分泌，促进造血。这些结果为阿胶补血软胶囊的进一步研究提供了实验依据。

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