MMP － 11 在胃癌组织的表达及其临床病理意义

董建华 李克军 姜文礼 王元宇

(1. 山东省日照市莒县人民医院 276500 ;2. 浙江省人民医院 310014 )

根据2002 年全球肿瘤发病率报告，胃癌是最常见的肿瘤之一，仅次于肺癌，居第二位［1］。尽管外科手术和放化疗技术不断发展，我国胃癌的死亡率居于各种肿瘤之首，5 年生存率仍低于40%，大多数患者确诊时已经是III 或IV 期，淋巴结转移率高达50% ～75%，转移是导致胃癌患者死亡的主要原因［2］。MMPs(基质金属蛋白酶)参与了许多生理和病理过程，比如基质降解、组织重塑、炎症反应以及肿瘤转移［3］。MMP － 11 属于基质溶解素亚族，MMP － 11 不能降低这些经典的MMP 基质，相反，它却能够催化丝氨酸蛋白酶抑制因子、α1 抗胰蛋白酶、胰岛素样生长因子结合蛋白质1 等的降解［4］。MMP － 11 最先在乳腺癌的间质细胞中被发现的［5］。研究表明在不同的恶性肿瘤的进展过程中MMP － 11 起重要作用，比如肺癌、头颈癌、乳腺癌［6－10］发现MMP－ 11 在结肠癌的表达与肿瘤的浸润深度、远处转移和分化程度相关，但与淋巴结转移无关。MMP － 11 在结肠、泌尿及卵巢癌中也高表达。MMP － 11 有望成为一个新的预后标记物。

本研究拟检测胃癌组织中的MMP － 11 的表达及其与临床病理参数和预后的关系，明确MMP － 11 作为胃癌预后标记物的临床应用价值。

资料与方法

1. 临床资料:收集浙江省人民医院1998 年1 月～2004 年12月期间胃癌患者436 例，所有病例均经病理证实，术前未经任何治疗。其中男311 例，女125 例，男女比例为2. 49:1;年龄17 ～91 岁，中位年龄为60 岁;随访起止日期为1998 年1 月～2008 年12 月，所有病例随访5 年以上，生存期的计算从手术日期到随访截止日期，或由于复发、转移而死亡的日期为止。肿瘤位于贲门55 例，胃体163 例，胃窦218 例;肿瘤小于5 厘米256 例，大于5厘米180 例;按Lauren 分型:肠型胃癌223 例，弥漫型胃癌213例;按WHO 2002 年胃癌分类标准分为乳头状腺癌16 例，管状腺癌326 例，粘液腺癌29 例，印戒细胞癌65 例;高分化腺癌13 例、中分化腺癌128 例，低分化腺癌293 例、未分化癌2 例;TNM 分期Ⅰ期胃癌90 例，Ⅱ期胃癌104 例，Ⅲ期胃癌173 例，Ⅳ期胃癌69例;胃癌淋巴分期PN0 期166 例，PN1 期136 例，PN2 期99 例，PN3 期35 例;有远处转移61 例，无远处转移375 例。并取同期距癌边缘5 厘米以上的临近无增生或不典型增生的非肿瘤胃粘膜92 例作对照。

2. 试剂:兔抗人MMP － 11 抗体购于ABCAM 公司，广谱二抗试剂盒及DAB 显色试剂盒均购于北京中杉金桥生物技术有限公司。

3. 组织芯片制备和免疫组织化学染色:按文献进行［11］。

1．1 对象 病例组：以北京市2011－2012年出生的，在三级以上医院确诊为单纯小型室间隔缺损且仅需医学观察的患病婴儿31例为研究对象，除外其他先天畸形、出生窒息、病理性黄疸及其它严重躯体及精神疾病。对照组：以1∶1匹配方式，采集与病例组相同出生孕周（差值＜1周）、同性别、相近出生体重（差值＜200g）、相近出生时间（差值＜2周）及相同居住地（同一地段保健）的正常儿童31名作为正常对照组研究对象，且无先天畸形、出生窒息、病理性黄疸及其它严重躯体及精神疾病。

（2）根据最可几动力学模型函数判定方法，求得其动力学三因子为：E = 129.38 kJ/mol，n = 2/5，A = 806 129 s-1，反应动力学模型函数为：f（α）=

5. 统计学处理:采用SPSS16. 0 软件进行处理，计量资料采用两样本t 检验，计数资料采用X2和Fisher 精确概率检验，对生存数据采用Kaplan － Meier 分析并绘制生存曲线，应用Log － rank检验差异性，用Cox 风险模型进行独立预后因素分析，P＜0. 05为具有统计学意义。

结 果

2. MMP － 11 蛋白表达与胃癌病理学指标间的关系:MMP －11 蛋白的表达强度与患者的年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、浸润深度、脉管侵犯、淋巴结转移、远处转移及TNM 分期有关(P＜0. 05)，而 与 患 者 性 别、分 化 程 度、组 织 学 类 型 无 关(P＞0. 05)。高龄患者、肿瘤大于5 cm、T3～T4期、有脉管侵犯、有淋巴结转移、有肝脏和腹膜转移，肿瘤靠近贲门、Ⅲ期和Ⅳ期胃癌组织MMP － 11 蛋白表达明显强于低龄患者、肿瘤小于5 cm、T1～T2期、无脉管侵犯、无淋巴结转移、无肝脏和腹膜转移、肿瘤靠近幽门、Ⅰ期和Ⅱ期的胃癌组织表达(表1)。

4. 结果判定:MMP － 11 以细胞浆出现棕黄色颗粒为阳性，根据染色程度和染色细胞百分率进行评定和分析［12－13］:基本不着色者为0 分，着色淡者为1 分，着色适中者为2 分，着色深者为3 分;着色细胞占计数细胞的百分率≤5% 记0 分，6% ～25% 记1分，26% ～50% 记2 分;≥51% 记3 分。将每张切片的染色程度与染色细胞百分率得分相乘，其乘积为最后得分。0 ～1 分为阴性(－)，2 ～3 分为弱阳性(+ )，4 ～6 分为中等阳性(+ + )，＞6分为强阳性(+ + +)。在统计分析中，将表达(－ / + )划为低表达组，(+ + ～+ + +)划为高表达组。

溃决洪水（泥石流）的流动特性包括洪峰流量、溃决泥石流量、行进距离和淹没面积等特性。其中，洪峰流量是最重要的一个量值；溃决泥石流体积将影响行进距离和淹没面积，也较重要。冰碛湖溃决洪水（泥石流）的模拟主要从湖水量计算、溃决洪峰估算、泥石流体积估算、溃决洪水（泥石流）最远距离估算、淹没面积估算等方面进行。

图1 MMP － 11 在非肿瘤胃粘膜及胃癌组织中的不同表达强度，SP法× 100。A 为非肿瘤胃粘膜组织表达(－ )，B 为高分化腺癌表达(+ ++ )，C 为中分化腺癌表达(+ + + )，D 为中分化腺癌表达(+ + + )。

1. MMP － 11 在正常胃黏膜组织和胃癌组织中的表达(图1):在92 例非肿瘤胃黏膜组织中，76(82. 6%)例MMP － 11 蛋白为阳性表达，均为低表达。在436 例胃癌组织中，MMP － 11 蛋白阳性表达384(88. 1%)例，高表达207(47. 5%)例，主要在细胞浆表达。

表1 MMP － 11 的表达与临床病理指标间的关系

淋巴结转移 130. 382 0. 0001无145(87. 3%) 21(12. 7%)有84(31. 1%) 186(68. 9%)远处转移 64. 455 0. 0001无226(60. 3%) 149(39. 7%)有3(4. 9%) 58(95. 1%)

在MMPs 家族中，MMP － 11 是一种不同寻常的成员，因为它的成熟形式是不能够水解细胞外基质中的主要成分，然而，包含催化区的片段具有酶的活性［14］。MMP － 11 的生物功能尚不完全清楚。研究表明MMP － 11 以旁分泌的形式分泌，能促进恶性上皮细胞的归巢，对原发性肿瘤和转移灶而言，这是一个关键过程。许多研究发现恶性肿瘤组织MMP － 11 高表达，MMP － 11 高表达可能是肿瘤的早期表现，并可能促进肿瘤的进展［15］。高表达MMP － 11 的肿瘤恶性程度高、预后差［16］。MMP － 11 可能在人类肿瘤的形成和进展过程中起重要作用［17］。

讨 论

3. MMP － 11 表达与患者预后的关系:在I、II 和III 期，MMP－ 11 高表达胃癌患者5 年生存率显著低于MMP － 11 低表达者。I 期，MMP － 11 低表达胃癌患者5 年生存率是89. 2%，高表达组为42. 9%(P = 0. 0001);II 期，MMP － 11 低表达患者5 年生存率是66. 3%，高表达者为40. 0%(P = 0. 0001);III 期，MMP － 11 低表达患者5 年生存率是29. 6%，高表达者为15. 1% (P = 0.0001);MMP － 11 在IV 期患者的表达与患者生存率无关，在IV期，MMP － 11 低表达患者5 年生存率是0%，高表达者为3. 0%(P = 0. 726)。独立预后因素分析表明ADAM10 表达(＜0. 001)、浸润深度(＜0. 001)、淋巴结(＜0. 001)、远处转移(＜0. 001)和TNM 分期(＜0. 001)是胃癌的预后独立因素之一。

新中国成立以来，中国农业农村进入了崭新的发展阶段。在这一时期，中国农业农村先后经历了土地改革、合作化运动到人民公社，乡村社会进行了长达30年的曲折探索。这一时期的主要任务在于实现耕者有其田的目标，继而开展农业社会主义改造，以防止农业发展走向资本主义小农化。其结果是，1958年后逐渐形成了人民公社制度，这一制度一方面促进了农业生产的发展，另一方面与当时农业生产力不相适应，最后不得不退出历史舞台。

本研究表明MMP － 11 在胃癌组织高表达，主要在细胞浆表达，MMP － 11 蛋白的表达强度与患者的年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、浸润深度、脉管侵犯、淋巴结转移、远处转移及TNM 分期有关;我们的研究结果与文献报道结果相一致。本研究还发现MMP － 11 的表达水平与胃癌患者的预后显著相关，独立预后因素分析表明MMP － 11 表达、浸润深度、淋巴结、远处转移和TNM分期是胃癌的预后独立因素之一。胃癌患者血浆MMP － 11 高表达，MMP － 11 表达与淋巴结转移相关(P = 0. 006)，多变量分析表明MMP － 11 高表达是进展期胃癌独立预后因素［18］。

为了避免由于肿瘤TNM 分期影响MMP － 11 的表达对预后的判断价值，我们按照TNM 分期分别分析MMP － 11 表达与胃癌患者预后的关系。结果发现在I、II 和III 期，MMP － 11 高表达胃癌患者5 年生存率显著低于MMP － 11 低表达者，MMP － 11 在IV 期患者的表达与患者生存率无关。未见按TNM 分期评价MMP － 11 表达与胃癌患者预后的关系的报道。

本研究表明MMP － 11 在胃癌形成、进展和浸润转移过程中起重要作用，并与胃癌患者的预后密切相关，是胃癌患者的独立的预后因素之一，本研究将为MMP － 11 作为胃癌诊断和预后判断的分子标记物提供了理论依据。

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