疏肝健脾安神和胃法对D－IBS结肠粘膜肥大细胞、P物质和血管活性肠肽的影响

于丰彦 迟宏罡，2 邹 颖，2 吕汝西，2 郑学宝

（1.广东医学院中医研究室 广东 湛江 524023；2.南方医科大学中医药学院 广东 广州 510515）

肠易激综合征是临床常见的胃肠功能性疾病，是一组包括腹痛、腹胀伴排便习惯改变、粪便性状异常等临床表现的症候群，持续存在或间歇发作，但无器质性疾病的证据。IBS已成为全球性的胃肠功能性疾病。其发病机制目前仍未明了，本文旨在探讨肝郁脾虚型IBS患者的结肠肥大细胞密度及肥大细胞脱颗粒密度变化和P物质和血管活性肠肽及观察中药康泰方对其影响，初步探讨疏肝健脾安神和胃法治疗IBS的可能机制。现将有关研究结果报告如下。

1 对象和方法

1.1 研究对象和治疗分组

1.1.1 诊断标准和排除标准：病例选择符合IBS诊断标准（罗马III标准）和中医肝郁脾虚辨证标准及评分标准（卫生部1993年颁布的《中药新药临床指导原则》及国家中医药管理局1994 年颁布《中医病证诊断疗效标准》）［1］的受试对象。排除以下情况：①年龄在18岁以下或65岁以上；②妊娠或哺乳期妇女；③肠道器质性疾病；④严重的心脑血管系统、肝、肾、造血系统疾病以及肿瘤等患者；⑤有消化道手术记录报告；⑥严重原发性疾病及精神病患者；⑦应用可能影响胃肠道功能及内脏敏感性的药物的患者；⑧有过敏史及受试期间有药物及食物过敏者；⑨未按规定用药，无法判断疗效或资料不全等影响疗效或安全性判断者。

1.1.2 分组方法：2009年1月至2011年12月期间广州中医药大学第一附属医院门诊及住院患者按符合上述标准的合格受试者，共收集合格病例70例，按照随机、对照的原则，从入选合格受试者的联系电话末位数，偶数为康泰方治疗组（37例），奇数为对照组（33例）；同时设立健康对照组（15例）。治疗组中有5位患者失访，对照组中有2位患者失访，最终完成疗程的合格病例共63例，治疗组32例，对照组31例。治疗组完成疗程后再次结肠镜取标本的病例共17例，对照组完成疗程后再次结肠镜取标本的病例16例，健康对照组收集到结肠粘膜标本的共15例。临床资料两组患者按性别、年龄、病程等情况进行了统计学处理，结果差异均无统计学意义，两组具有可比性。

1.1.3 治疗：治疗组：康泰方（主要由白术、白芍、元胡、夜交藤等中药组成，广州中医药大学第一附属医院制剂），200mL，2次／d。对照组：得舒特（匹维溴铵片，法国苏威药厂出品），50mg，3 次／d；两组疗程均为8周。

1.2 标本来源：受检者取回盲部结肠黏膜各3块，行SP、VIP免疫组化染色以及MC特殊化学染色。

1.3 主要试剂：SP、VIP兔抗人单克隆抗体和SABC 试剂盒由上海长嘉生物科技有限公司提供。MC染色试剂由国药集团化学试剂有限公司产品提供。

1.4 方法：受检者活检黏膜以4% 甲醛溶液固定。常规石蜡包埋。按试剂盒说明书操作步骤行免疫组化染色，MC 染色采用改良甲苯胺蓝染色法。

1.5 染色结果分析：细胞质呈现棕色颗粒为SP和VIP表达阳性随机计数10个腺体的SP或VIP阳性细胞数。总数＜1个为阴性（一），记1分；2～25个为（＋），记2 分；26－49 个为（＋＋），记3 分；＞50 个为（＋＋＋），记4分。Olympus－CH 光学显微镜下随机计数10个高倍视野（×400）内的MC数取均值。

2 结果

2.1 两组治疗前后主要症状比较，见表1。

2.2 各组治疗前后回盲部肥大细胞密度及肥大细胞脱颗粒密度，见表2、3。

表1 两组治疗前后主要症状比较（Mean±SD）

表2 各组回盲部肥大细胞密度及肥大细胞脱颗粒密度

表3 各组治疗前后回盲部肥大细胞密度及肥大细胞脱颗粒密度

2.3 SP阳性细胞数／VIP阳性细胞数免疫组化检测结果，见表4：治疗组治疗前、对照组治疗前与健康对照组SP 免疫反应阳性细胞数／VIP阳性细胞数之间比较，P＜0.05；治疗组治疗前、后SP免疫反应阳性细胞数／VIP阳性细胞数之间比较，P＜0.05；治疗组治疗前与对照组治疗前的SP免疫反应阳性细胞数／VIP阳性细胞数之间比较，P＞0.05。

表4 各组回盲部SP免疫反应阳性细胞数／VIP阳性细胞数

2.4 肝郁脾虚型D－IBS主要临床症状与回盲部肥大细胞密度、SP、VIP的相关性研究，见表5。

2.5 肝郁脾虚型D－IBS结肠粘膜回盲部肥大细胞密度、SP、VIP之间的相关性研究，表6。

3 讨论

肠易激综合征（IBS）是一种常见的以肠功能紊乱为主的胃肠功能性疾病，其症状主要包括腹痛、腹胀及排便习惯改变等。IBS的病因及发病机制尚未完全阐明。

肥大细胞（MC）在胃肠道有广泛的分布，近年来的研究发现MC 在IBS的发病中起重要作用。SLlllivall等［2］发现IBS患者盲肠的MC 数目明显高于对照组。MC是人体具有重要免疫活性的细胞，可以分泌多种抗炎递质和神经递质如5－HT、组胺等。有学者发现：67% 肠肥大细胞接触上皮下神经，而还有20%在2um 之间，这为肥大细胞与神经系统交流信息提供结构基础。肥大细胞表面有P物质等肽类受体［3］，微量P物质能改变肥大细胞的兴奋性；同时动物试验已表明：肥大细胞介导肠神经元兴奋性增加［4］，提示肥大细胞和神经之间的信息交流是双向的。我们的研究也发现肝郁脾虚型腹泻型IBS结肠粘膜肥大细胞表达脱颗粒与SP、VIP表达呈正相关。

表5

表6

P物质（SP）是由l1个氨基酸组成的多肽，其分泌细胞分布于全部胃肠道，其生理作用为促进胃肠平滑肌和括约肌收缩、胃肠蠕动，参与内脏痛觉反射及扩张内脏血管等。国外Wheatley等［5］发现，80%的便秘患者结肠平滑肌中缺乏SP；Dong［6］等研究发现IBS患者结肠末端中SP能神经纤维和肥大细胞明显多于对照组，认为肠粘膜中SP能神经纤维和肥大细胞的改变是IBS患者内脏高敏感性的重要因素。我们的研究发现肝郁脾虚型腹泻型IBS治疗前结肠粘膜SP表达明显高于健康对照组，康泰方治疗后SP表达下降与治疗前呈显著性差异，对照药物治疗后也明显下降，说明了结肠粘膜SP表达确实与腹泻型IBS致病有关，与以往的研究结果相似。

血管活性肠肽（VIP）是一种含28个氨基酸残基的碱基多肽，国外相关研究［7］认为VIP与IBS患者的腹痛、腹泻等症状关系密切。国内陈芝芸等研究也发现腹泻型IBS患者VIP含量高于正常对照组，便秘型则与对照组无明显差异。本研究发现肝郁脾虚型腹泻型IBS结肠粘膜肥大细胞密度、肥大细胞脱颗粒密度及SP、VIP 的表达较正常健康对照组明显增高，通过多因素相关因素分析发现结肠粘膜肥大细胞密度、肥大细胞脱颗粒密度及SP、VIP的表达之间存在明显的相关关系，同时主要症状与结肠粘膜肥大细胞密度、肥大细胞脱颗粒密度及SP、VIP 的表达成明显正相关，并随着中药康泰方的应用肝郁脾虚型腹泻型IBS的主要症状的改善也同时伴有结肠粘膜肥大细胞密度、肥大细胞脱颗粒密度及SP、VIP的表达的明显下降，并也成正相关关系。说明了结肠粘膜的肥大细胞密度、肥大细胞脱颗粒密度及SP、VIP的表达是其临床表现的致病机理，康泰方可能是通过上述机理改善临床症状。

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