清肺消痤颗中黄芩苷的含量测定*

★ 李爽吕佳佳马兴苗范玲刘志辉（.南京中医药大学200级硕士研究生 南京 20046；2.南京中医药大学一附院 南京 20036）

清肺消痤颗粒由黄芩、丹参、赤芍等九味中药组成，具有清火解毒、凉血活血之功效，用于痤疮的治疗，疗效显著。方中黄芩为君药，黄芩苷为黄芩中的活性成分之一，具有抗菌消炎等作用[1-3]。本实验采用HPLC法对制剂中黄芩的有效成分进行了定量研究，为建立该制剂的质量控制方法提供了参考依据。

1 仪器与试剂

1.1 仪器与试药

Agilent1100高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；Mettler Toledo精密电子天平（瑞士梅特勒-托利多（上海）公司）；Millipore-Q纯水机（美国Millipore公司）。

黄芩苷对照品（购于中国药品生物制品检定所，含量测定用，批号为110715-200815）；液相测定用甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：Kromasil柱，（250mm×4.6 mm，5μm），流动相：甲醇-0.2%磷酸水（76：24）；流速：1mL/分；柱温：30℃；检测波长：315 nm；进样量10μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液

精密称取黄芩苷对照品20.94 mg置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度即得。

2.2.2 供试品溶液

将清热消痤颗粒研细，取约0.5 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加70%乙醇40 mL，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液至100 mL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤圆底烧瓶和残渣，洗涤液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 阴性样品溶液

取缺黄芩的阴性样品，分别按“2.1.2.2”项下方法制备溶液，即得。

2.3 系统适用性试验

分别吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，测得HPLC图谱（见图1）。结果表明，样品与对照品在相同位置有吸收，分离度大于1.5，阴性无干扰，理论塔板数按黄芩苷计算应不低于3000。

图1 黄芩苷对照品（A）、供试品（B）、阴性样品（C）色谱图

2.4 标准曲线的绘制

取对照品储备液，加甲醇依次稀释得到浓度分别为52.35、26.18、13.09、6.54和3.18 μg/mL的对照品溶液，按照“2.1”项下色谱条件进样，测定，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，得到回归方程Y=25.689X-6.8359，r=0.9999，结 果 表明 黄 芩 苷 在0.032 μg-0.523 μg/mL范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验

精密吸取浓度为20.9 μg/mL的对照品溶液，重复进样6次，结果以黄芩苷峰面积计RSD为0.72%。

2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液，按上述色谱条件，分别于0、2、4、6、8、12和24小时进样，测定，黄芩苷以峰面积计RSD为1.5%，说明供试品溶液在24小时内稳定。

2.7 重复性试验

取同一批次清肺消痤颗粒约0.2g，精密称定，共6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，测定峰面积，计算含量，结果黄芩苷的平均含量为27.58 mg•g-1，RSD为1.6%，

2.8 加样回收试验

精密称一定量取清肺消痤颗粒（黄芩苷含量为24.3mg•g-1），共6份，每份加入黄芩苷对照品溶液，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液。按“2.1”项下方法进行测定、计算（结果见表1）。

表1 黄芩苷加样回收率结果

2.9 样品含量测定

取清肺消痤颗粒中试产品3批，依法制备供试品溶液，测定，计算。结果三批中试样品黄芩苷含量分别为26.30、25.28、23.18 mg/g。

3 讨论

黄芩为方中君药，故以其所含的有效成分黄芩苷作为制剂的质量控制的指标。黄芩苷在280nm及315nm均有较大的吸收，但若以280nm波长进行测定，在黄芩苷峰前有一杂质峰干扰，且不易削除和减小，故选择测定波长确定315nm，方法学试验结果表明，准确可靠。黄芩苷是一种相对不稳定的化合物[4]，所以提取液应避光保存并及时测定，以免产生误差。而且不同产地的黄芩中黄芩苷含量差异较大[5]，并受采收、加工、贮藏等多个环节的影响，应加强饮片的质量监测，以保证投料饮片的质量稳定。

[1]王玲玲，王凌，杨菲，等.RP-HPLC测定银黄颗粒中绿原酸和黄芩苷的含量[J].中国实验方剂学杂志，2012，12（18）：124-126.

[2]何晓山，周宁娜，林青，等.滇黄琴总黄酮抗心律失常作用的实验研究[J].中国中药杂志，2010，35（4）：508-510.

[3]汪长中，程慧娟，张雄飞，等.黄芩苷对非白念珠菌生物膜抑制作用的研究[J].中国中药杂志，2010，35（5）：639-641.

[4]薛黎明，秦雪梅，张丽增.不同产地黄芩药材的黄芩苷含量测定及指纹图谱研究[J].中成药，2008，1（30）：10-14.

[5]许腊英，毛维伦，赵亚玲，等.酒黄芩与生黄芩不同提取工艺对黄芩苷煎出量的影响[J].中国中药杂志，2003，28（7）：699.