五味子中117种农药多残留气相色谱－串联质谱检测方法研究

徐宜宏，蒋 施，付海滨，赵 颖，金 雁，钟 钰，刘 瑜，李晓东，于 丽

（沈阳出入境检验检疫局 检验检疫综合技术中心，沈阳 110016）

0 引 言

五味子，俗称山花椒、秤砣子、药五味子等，学名：Schisandrachinensls（Turcz，）Baill。多年生落叶藤本，属木兰科，具有抗衰老、强身等药理作用，具有很高的经济价值［1］。

在实际检测中发现，五味子作为一种中药材基质，其中许多成分的化学结构、理化性质等与农药极其相似，严重干扰农药残留量的测定，这对农药残留物的提取、净化提出了更高的要求。其处理方法的好坏直接影响检测结果准确性、实用性、可行性［2－3］。

本实验选择了有机磷、有机氯、拟除虫菊酯类、氨基甲酸酯类及其他类共117种农药为研究对象，建立了五味子中117种农药残留同时检测的GC－MS／MS确证方法，实验结果表明，此方法对于五味子这类复杂基质中药样品有较好的净化效果，大大的降低了背景对检测的干扰，操作简单，快捷，高效，并且采用了先进的GC－MS／MS技术，定性定量准确，完全可以满足出口五味子中农药残留检测限量的要求［4－8］。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

气相色谱串联质谱仪，美国Varian公司450GC－320MS；凝胶渗透色谱仪（GPC），美国J2scientific公司；旋转蒸发系统，美国LABCONCO公司；氦气、氩气（纯度99.999%）；台式离心机，德国Sigma公司；农药标准品：购置于农业部天津环保所，纯度均为99%以上。无水硫酸镁为分析纯，640℃下连续烘干4h；乙酸乙酯，色谱纯，美国Dikma公司；其余溶剂均为重蒸分析纯。

1.2 标准溶液配置与保存

标准储备液：称取适量的各农药标准物质，根据标准品的溶解性选择丙酮稀释成100mg／mL的标准储备液，0～4℃冷藏保存。标准工作液：根据每种标准的灵敏度和仪器线性范围，吸取一定量的混合标准储备溶液，用丙酮稀释成系列浓度的混合标准工作溶液。

1.3 样品前处理

1.3.1 样品制备与提取

准确称取样品10.0g，置于具塞塑料离心管中，加入40mL乙酸乙酯－乙腈（30∶70）混合溶液［9］，超声40min。提取液过滤至塑料具塞离心管中，残渣再用15mL乙酸乙酯－乙腈（30∶70）重复提取1次，合并过滤液。于40℃旋转蒸发至近干。10mL乙酸乙酯－环己烷（1＋1）以溶解残渣，并用0.45μm滤膜过滤，待净化。

1.3.2 凝胶色谱净化（GPC）

净化条件：净化柱填料为Bio Beads S－X3，规格250mm×25mm，；流动相乙酸乙酯－环己烷（1＋1）；流速4.7mL／min；收集时间8.0～23.0min。快速浓缩至近干，加入1.0mL色谱纯乙酸乙酯溶解残渣，离心2min，上清液用0.22μm滤膜过滤，供GC／MS／MS测定。

1.4 仪器测定条件

色谱条件：

色谱柱VF－5ms 30m×0.25mm×0.25mm，程序升温条件：50℃保持4min，15℃／min升温至190℃，5℃／min升温至240℃，10℃／min升温至290℃保持15min；载气：氦气，纯度99.999%；恒流模式，流速：1.0mL／min；进样口温度：230℃，进样量：1μL；进样方式：不分流进样。

质谱条件：

电离电压：EI 70eV，灯丝电流：100μA，离子源温度：220℃，腔体温度：40℃；传输线温度：280℃，碰撞气：氩气，1.8mTorr；溶剂延迟时间5.0min；MRM条件：每个农药选择1～2个母离子，2个子离子定性，其中1个母离子，1个子离子定量，定性及定量离子见表1。

表1 117种农药保留时间、定性定量离子、线性回归方程、线性范围和相关系数（r）

续表1

续表1

2 结果与讨论

2.1 提取条件的优化

该部分实验比较了乙酸乙酯、乙腈、丙酮3种有机溶剂的提取效果。结果表明有些农药在乙酸乙脂提取液中回收率好，有些在乙腈中提取率高，而丙酮的提取效果并不理想。为了兼顾多种农药残留检测的需要，采用乙酸乙酯和乙腈的混合溶液进行样品提取，分别考察了不同比率的乙酸乙酯－乙腈对提取效率的影响，发现乙酸乙酯－乙腈（30∶70，v／v）不仅能有效提取目标农药，同时也减少了基质共提取物对目标农药定性、定量的干扰。这是由于乙腈的极性强，对绝大部分农药的溶解性更好，而少量乙酸乙酯的引入可以兼顾极性较低农药的提取效率。

2.2 净化条件的优化

通过凝胶色谱柱分别收集5～8min，8～16min，16～20min，20～23min，23～25min，测定回收率。通过测定发现，收集时间为8～23min的流出液中各种农药的回收率最高，因此，确定收集时间为8～23 min的流出液，即37.6～108.1mL。

2.3 方法学数据考察

2.3.1 方法的标准曲线与线性关系

参考各国的最高农药限量标准及仪器的灵敏度，在0.01～5.0μg／mL线性范围内配制5个不同浓度梯度的混合标准溶液，以标准溶液中被测组分峰面积和内标物峰面积的比值为纵坐标，标准溶液中被测组分浓度与内标物浓度的比值为横坐标绘制标准工作曲线，得到回归方程、相关系数，列于表1。结果表明，在0.01～5.0μg／mL的浓度范围内，各农药均具有良好线性。

2.3.2 方法的准确度和精密度

在五味子空白样品中添加不同含量水平的117种农药，同时做空白对照。在0.005～0.2mg／kg范围中分别添加3种水平，每个水平5个平行样，按1.3中所述步骤操作，所得到的各农药的添加回收率和相对标准偏差，五味子空白样品及加标样品的总离子流图分别见图1和图2。

图1 空白五味子样品的总离子流色谱图

图2 空白五味子样品中117种农药的添加回收总离子流色谱图

3 结 论

本文选用乙酸乙酯－乙腈（30∶70，v／v）为提取溶剂，凝胶渗透色谱技术（GPC）法为净化方法，建立了五味子中117种农药残留同时检测的（GC－MS／MS）确证方法。为中草药类基质中多种农药残留检测方法提供了理论依据。实验结果表明，该方法准确性和重复性好、检出限低，适用于中草药材中多种农药残留的同时检测，具有一定的应用价值。

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