顶空气相色谱法测定格拉司琼中的残留溶剂研究

中国医科大学附属第一医院（110001）田昕

北京康远制药有限公司（100072）刘思飞 赵明 韩程亮Δ

格拉司琼为选择性5-HT3受体拮抗剂，主要用于恶性肿瘤化疗以及放疗过程中的镇吐及其他相关病症的治疗。格拉司琼为继昂丹司琼上市后的第二个5-HT3受体拮抗剂，与昂丹司琼相比，格拉司琼对受体的选择性更高，止吐作用更强，剂量简单、作用更为持久。格拉司琼或其盐类物质目前的主要给药途径为静脉输注、口服及外用剂型，现有文献中未见格拉司琼残留溶剂的相关报道。

该产品按照其生产工艺要求，分别使用了甲醇、乙醇、二氯甲烷、异丙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃共6种有机溶剂。参照国家食品药品监督管理局药品审评中心《化学药物残留溶剂研究的技术指导原则》要求，同时参考有关文献[1][2]，并经大量试验研究，建立了同时测定格拉司琼中甲醇、乙醇、二氯甲烷等上述6种残留有机溶剂含量的顶空气相色谱法。按照ICH及《中国药典》2010版关于残留溶剂的有关规定[1][3]，制定各溶剂的限度为：本品1g中含甲醇不得超过300µg，乙醇、异丙醇及乙酸乙酯不得超过500µg，二氯甲烷不得超过60µg，四氢呋喃不得超过72µg。根据该原料的溶解特征，笔者采用二甲基亚砜为溶媒，以1，4-二氧六环为内标，采用内标法进行试验，经方法学考察结果表明各组分的分离度、重现性良好，试验方法合理，简单易行，测定结果准确可靠，可作为格拉司琼中甲醇、乙醇、二氯甲烷、异丙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃残留溶剂的有效测定方法。

1 仪器与试药

Agilent 6890N气相色谱仪、Agilent 7689E顶空进样装置配有Agilent操作控制及积分软件；AND HA-202M电子分析天平。

甲醇（美国FISHER公司，批号：076535）；乙醇（北京益利精细化学品有限公司，批号：20070728）；异丙醇（北京化学试剂公司，批号：070508）；二氯甲烷（北京化学试剂公司，批号：40002694）；乙酸乙酯（上海试剂一厂，批号：97-03-01）；四氢呋喃（北京化学试剂公司，批号：20060628）；1，4-二氧六环（北京化工厂，批号：081001）；二甲基亚砜（天津市福晨化学试剂厂，批号：20070615、20071105）均为色谱纯。

格拉司琼（批号：080107、080108、080109），由宁波天衡制药有限公司提供。

内标溶液配制：精密称取1，4-二氧六环300mg，置于200mL量瓶中，以二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，作为内标溶液。

对照溶液配制：取色谱纯甲醇、乙醇、二氯甲烷、异丙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃适量，分别精密称定，置于同一量瓶中，加内标溶液溶解并稀释制成每1mL约含甲醇75µg，乙醇、异丙醇、乙酸乙酯125µg，四氢呋喃18µg以及二氯甲烷15µg的均匀溶液作为对照溶液。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 采用色谱柱为DB-624交联毛细管柱（30m×0.53mm.i.d，3µm），以氮气为载气，氢火焰离子化检测器，进样口温度为180℃，检测温度250℃。柱温采用程序升温：40℃保持8min后以10℃/min升至180℃，保持2min；流速为2.5mL/min。顶空进样（95℃预热25min），进样体积为顶空瓶上部气体1mL，分流比为1∶10。

2.2 分离度试验 精密量取对照溶液1.0mL于顶空瓶中，按上述方法进行测定，记录色谱图；甲醇、乙醇、二氯甲烷、异丙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃的分离度均大于1.5，取对照溶液连续进样6次，所得待测各溶剂峰面积的相对标准偏差均小于5.0%，符合《中国药典》2010年版二部的相关规定。

2.3 线性范围及标准曲线 精密称取甲醇75.0mg、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯各125.0mg、二氯甲烷15.0mg及四氢呋喃18.0mg，置于10mL容量瓶中，以内标溶液稀至刻度摇匀，作为标准曲线储备溶液。精密量取该溶液2.0mL置于10mL容量瓶中加内标溶液稀释至刻度，摇匀，作为标准曲线溶液。按比例精密稀释成不同浓度标准溶液6瓶，照上述方法进行测定，以浓度为横坐标，以各溶剂峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标，进行线性回归，结果见附表1。

2.4 最小检测限 按照信噪比3∶1，本方法溶液中乙甲醇、乙醇、二氯甲烷、异丙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃的最小检测限分别为0.01µg/mL、0.19µg/mL、0.02µg/mL、0.18µg/m、0.02µg/mL、0.003µg/mL。

2.5 精密度试验 精密量取对照溶液各1.0mL，置于6个顶空瓶中，照上述方法测定，根据甲醇、乙醇、二氯甲烷、异丙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃的峰面积计算RSD%分别为4.25%、4.28%、4.27%、3.33%、3.25%、2.92%，均小于5.0%。

附表1 线性范围和回归方程

附表2 格拉司琼的平均回收率

附表3 三批格拉司琼的残留溶剂测定结果（%）

2.6 回收率试验 分别精密称取格拉司琼250mg3份于3个顶空瓶中，分别加入对照溶液1mL充分混匀，照上述方法进行测定，通过积分确定其峰面积，按内标法计算试样中甲醇、乙醇、二氯甲烷、异丙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃的平均回收率，结果见附表2。

2.7 样品测定 精密称取格拉司琼3批供试品各约250mg（每批两份平行），分别于6个顶空瓶中，分别加入内标溶液1.0mL充分混匀，照上述方法进行测定，结果3批供试品中均未检出异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃等有机溶剂残留，甲醇和乙醇残留量均符合规定，结果见附表3。

3 讨论

3.1 预热温度及时间的选择 本试验根据样品的热稳定性以及溶解度分别选择于75、85、95及105℃条件下预热，经过比较在温度相对较低的条件下，样品的回收率较低，而过高的温度对于样品的稳定性以及低沸点的溶剂也会造成一定影响；而后，笔者对预热时间进行了选择，分别预热15、20、25、30min后进行测定，最终选择了95℃、预热25min作为预热条件。

3.2 内标物质的选择 气相色谱的测定过程中，使用外标法定量容易造成多针进样、重现性不好、测定结果不准确等问题，故采用内标法对其进行定量。经过试验，分别考察了乙醇、丙酮以及1，4-二氧六环等多种内标物质，结果发现在该条件下1，4-二氧六环的出峰时间与其他溶剂出峰无干扰，最终确定1，4-二氧六环为本试验中的内标物质。

3.3 关于格拉司琼残留溶剂的测定 有文献报道[4]，盐酸格拉司琼中的残留溶剂测定方法，其采用外标法测定盐酸格拉司琼中的甲醇、异丙醇、乙醚、甲苯等8种有机溶剂。盐酸格拉司琼为格拉司琼盐酸盐形式，溶解特征与格拉司琼有较大差异，主要用于静脉给药的注射液中；在口服以及外用等给药途径中，则主要以格拉司琼原型作为原料制成相应制剂。本文建立的格拉司琼中残留溶剂的测定方法能够同时测定生产工艺中涉及的6种有机溶剂的残留，所建立的方法准确、可靠，可用于格拉司琼中残留溶剂的测定，保障药品的安全、有效。