hMSH2和FHIT在宫颈癌中的表达及其相互关系

天津市滨海新区大港医院（300270）薛春芬

宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤之一，该病的发生是个涉及多基因改变、多步骤的累积过程[1]，其分子机制至今仍未完全明确。hMSH2是MMR（mismatch repair）基因的一种，它的正常表达是维持MMR基因错配修复功能的分子基础。FHIT是目前公认的抑癌基因，其位点的异位和突变以及伴随的蛋白表达缺失与人类多种肿瘤的发生、发展关系密切。本研究检测了宫颈癌、CIN及正常宫颈组织中FHIT和hMSH2的表达，旨在探讨两者在宫颈癌发生、发展过程中可能起到的作用及其相关关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集我院存档宫颈癌标本20例并采集2010年5月～2012年5月住院治疗的15例宫颈癌和10例CIN患者病理标本，标本收集前病人均未经放化疗及免疫治疗。所有患者均按宫颈癌HE病理切片诊断标准确诊和FIGO分期标准分期。患者年龄26～72岁，平均48.91岁。同时，选取2011年因子宫良性病变行子宫全切术的30例正常宫颈上皮和慢性宫颈炎组织作为对照。

1.2 方法 采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶链接法（SP法）。兔抗人FHIT多克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术公司，鼠抗人hMSH2单克隆抗体及SP试剂盒购自天津灏洋生物制品科技有限责任公司。所有标本均经10%甲醛固定，石蜡包埋，3µm厚连续切片。抗原微波修复，一抗FHIT工作浓度1∶600，hMSH2工作浓度1∶100，具体步骤按试剂盒说明书进行。

1.3 结果判定

1.3.1 FHIT蛋白评定标准 FHIT蛋白的染色定位于细胞浆。①按染色强度评分：无色或浅黄色为1分；棕黄色为2分；棕褐色为3分。②按阳性细胞数所占百分比评分：＜10%为1分；10%～50%为2分；＞50%为3分。将染色强度评分与所测得的阳性细胞百分数评分相乘所得的积作为其最后得分，进行统计学检验。1～3分为（-），4～9分为（+）。

1.3.2 hMSH2蛋白评定标准 hMSH2蛋白的染色定位于细胞核上。选取肿瘤细胞坏死较少的5个高倍镜（×400）视野，计数500个以上的细胞，阳性细胞数大于总计数细胞的20%时记为（+）。

1.4 统计学处理 采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学处理。

2 结果

2.1 hMSH2在宫颈癌、CIN和正常宫颈组织中的表达 在正常宫颈组织中，hMSH2阳性表达9例，阳性表达率为30.0%；在CIN中，hMSH2阳性表达7例，阳性表达率为70.0%；在宫颈癌组织中，hMSH2阳性表达21例，阳性表达率为60.0%。CIN、宫颈癌和正常宫颈组织中，hMSH2阳性率依次降低，差异有显著性（P＜0.05），后两者相比差异亦有显著性（P＜0.05），见附表1。

附表1 hMSH2在宫颈癌、CIN和正常宫颈组织中的表达

2.2 FHIT在宫颈癌、CIN和正常宫颈组织中的表达 在正常宫颈组织中，FHIT呈中度至强阳性表达，阳性表达率为100%；在CIN中，FHIT阳性表达率为60.0%；在宫颈癌组织中，FHIT（-）22例，（+）13例，阳性表达率为37.1%。在正常宫颈、CIN和宫颈癌组织中，FHIT阳性率依次降低，差异有显著性（P＜0.05）；正常宫颈和宫颈癌组织比较，差异有显著性（P＜0.05），见附表2。

附表2 FHIT在宫颈癌、CIN和正常宫颈组织中的表达

2.3 hMSH2蛋白表达与FHIT蛋白表达的关系在宫颈癌组织中，hMSH2蛋白表达与FHIT蛋白表达无相关性；在FHIT蛋白表达阳性组中，hMSH2蛋白阳性表达率为53.8%，而在FHIT蛋白表达阴性组中，hMSH2蛋白阳性表达率为63.6%，二者相比差异无显著性（r s＝-0.097，P＞0.05），见附表3。

附表3 hMSH2蛋白表达与FHIT蛋白表达的关系

3 讨论

MMR（mismatch repair）基因是生物进化过程中的保守基因，具有修复DNA碱基错配、增强DNA复制准确性、维持基因组稳定性、降低自发突变的功能。hMSH2是MMR基因的一种，它的正常表达是维持MMR基因错配修复功能的分子基础。本实验结果显示，hMSH2在CIN中表达最高，而在浸润性宫颈癌及正常宫颈组织中表达依次降低。在CIN病变中，hMSH2的高表达可能的原因是，与正常宫颈鳞状上皮细胞相比，CIN病变中异常的细胞增生增多[2]。当复制率增高时，微卫星序列（microsatellite sequences，MS）的突变率就增高，微卫星序列的突变有可能成为hMSH2基因的活性输入信号。相反，当疾病由CIN发展到浸润性宫颈癌的过程中，hMSH2蛋白表达降低，这很可能是因为机体细胞突变以及hMSH2基因表达的下调。这可在一定程度上反映宫颈癌的恶性程度。

FHIT是由Ohta等于1996年利用定位克隆技术和外显子捕获法发现的，定位于3p14.2区域，其位点的异位和突变以及伴随的蛋白表达缺失与人类多种肿瘤的发生、发展关系密切，存在于多种与环境致癌因素密切相关的恶性肿瘤中[3]。本实验结果显示，FHIT蛋白在正常宫颈组中均有中至强阳性表达，其异常表达在CIN组中已经存在，推测FHIT蛋白的表达缺失有可能是宫颈癌发生的相对早期的分子生物学事件。FHIT蛋白表达的缺失，有希望成为临床预测宫颈癌前病变发展为浸润性宫颈癌的有用的分子生物学标记物。

本研究虽然发现宫颈癌组中hMSH2蛋白的表达和FHIT蛋白的表达都存在较高的异常，但是并未发现两者之间存在显著的相关性（rs＝-0.097，P＞0.05）。说明FHIT和hMSH2在促进宫颈癌的发生发展中的作用可能是独立的，故两者之间的关系还有待进一步研究。