咳喘顺丸止咳化痰作用实验研究

郑轶枫，黄萍，吴清和，操红缨

Tel:020-39358086，18924252556

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咳喘顺丸由紫苏子、瓜蒌仁、茯苓、鱼腥草、苦杏仁、半夏（制）、款冬花、桑白皮、前胡、紫菀、陈皮、甘草等组成，具有健脾燥湿，宣肺平喘，化痰止咳的功效[1]，用于慢性支气管炎、支气管哮喘、肺气肿所致的气喘胸闷、咳嗽痰多等症。临床观察结果表明[2]，咳喘顺丸能显著改善慢性支气管炎脾肺气虚、痰湿阻肺的多项临床症状，另外对喘息型慢性支气管炎能减少皮质激素和茶碱药的不良反应，增强机体免疫功能，提高生活质量，本实验采用止咳及祛痰相关药理实验对其止咳化痰作用进行初步评价。

1 材料

1.1 药物

咳喘顺丸(实验用不加辅料之药粉)，由广州陈李济药厂提供（批号: 08136），每克药粉相当于2.025 g生药。临床用法用量为口服，11.11 g/天（相当于生药22.5 g）。按60公斤体重换算，得出每日用量（药粉）为11.11÷60=0.185 g/kg体重（相当0.375 g生药/kg体重），使用时用研钵研磨，再以蒸馏水配成所需浓度。麻杏止咳片，吉林本草堂制药有限公司产品（批号：20080202）；氨酚双氢可待因片，威海路坦制药有限公司产品（批号：080514）；盐酸氨溴索片，天津赫素有限公司产品（批号：070972）。

1.2 动物

SD系大鼠，SPF级，由广东省医学实验动物中心提供（许可证号SCXK（粤）2003-0002粤监证字2008A020）；NIH系小鼠，SPF级，分别由广东省医学实验动物中心、广州中医药大学实验动物中心提供（许可证号SCXK（粤）2003-0002粤监证字2008A022、SCXK（粤）2003-0020粤监证字2008A003）；家鸽由广州中医药大学实验动物中心提供；豚鼠，普通级，由广州中医药大学实验动物中心提供（许可证号SCXK（粤）2003-0020粤监证字2008A027）。

1.3 试剂与仪器

枸橼酸，天津市大茂化学试剂厂生产，批号：20080917；氯化钠注射液，太极集团西南药业有限公司生产，批号：08060010；苯酚红，天津市大茂化学试剂厂生产，批号：20071225；氢氧化钠，广州化学试剂厂生产，批号：20071004－1；氨水，天津市富宇精细化工有限公司生产，批号：080901；咔唑，上海晶纯试剂有限公司产品，批号：17361；D-葡萄糖醛酸内酯，上海晶纯试剂有限公司产品，批号：79721；TD25－WS多管架自动平衡离心机，赛特湘仪离心机仪器有限公司产品；WFJ7200型可见光分光光度计，尤尼柯（上海）仪器有限公司产品；402A型超声雾化器，江苏鱼跃医疗设备有限公司产品；JA1203N型电子天平，上海精密仪器有限公司产品。

2 实验方法

2.1 止咳试验

2.1.1 小鼠氨水引咳法[3~4]取NIH小鼠，雌雄各半，体重18～22 g，随机分为对照组、咳喘顺丸低、中、高剂量组（1.85，3.70，5.55 g.kg-1）、麻杏止咳片组和可待因组，每组10只。各组按0.2 mL/10 g体重灌胃给药（对照组给予等量蒸馏水），每日1次，连续3日。于末次给药后1 h，将小鼠置于2 L的密闭罩内，恒定压力用雾化器喷雾浓氨水15 s ，记录小鼠咳嗽潜伏期（从喷雾开始到小鼠出现第一次咳嗽的时间为潜伏期）和5 min内咳嗽次数，结果进行统计学处理。

2.1.2 豚鼠枸橼酸引咳法[3,4]取豚鼠48只，雌雄各半，体重200～220 g，随机分为对照组、咳喘顺丸低、中、高剂量（0.925，1.85，3.70 g.kg-1）组、麻杏止咳片组和可待因组，每组8只。各组按1 mL/100 g体重灌胃给药（对照组给予等量蒸馏水），每日1次，连续3日。于末次给药后1 h，将小鼠至于2 L的密闭罩内，然后以恒定压力喷雾枸橼酸10 s，记录豚鼠咳嗽潜伏期（从喷雾开始到豚鼠出现第一次咳嗽的时间为潜伏期）和5 min内咳嗽次数，记录结果并进行统计学处理。

2.2 化痰试验

2.2.1 对正常小鼠的化痰作用试验(气管段酚红法)[3,4]取NIH小鼠，雌雄各半，体重18～22 g，随机分为对照组、咳喘顺丸低、中、高剂量组（1.85，3.70，5.55 g.kg-1），麻杏止咳片组和盐酸氨溴索片组，每组10只。各组按0.2 mL/10 g体重灌胃给药（对照组给予等量蒸馏水），每日1次，连续3日。于末次给药后各组动物腹腔注射酚红0.1 mL（5mg）/10 g体重，注射酚红0.5 h处死动物，剥离气管周围组织，剪下自甲状软骨下至气管分支处的一段气管，放入盛有2 mL生理盐水的试管中，再加0.1 mL氢氧化钠，用分光光度计，波长546 nm测OD值。并根据酚红的标准曲线计算酚红含量（μg.mL-1），记录结果并进行统计学处理。

2.2.2 对家鸽的化痰作用试验(气管纤毛运动法)[4]取家鸽48只，随机分为对照组、咳喘顺丸低、中、高剂量组（0.925，1.85，3.70 g.kg-1），麻杏止咳片组、盐酸氨溴索片组，每组8只。各组按1 mL/100 g体重灌胃给药（对照组给予等量蒸馏水），每日1次，连续3日。于末次给药后1 h ，在暗室内剪开鸽颈部皮肤，分离气管，从靠心脏端将5号针头轻插入气管，向气管内壁推入约 0 .02 mL墨汁，在冷光源下观察1 min内墨汁向前运动的距离。记录结果并进行统计学处理。

2.2.3 对大鼠气管排痰量的影响[4]取SD大鼠，180～220 g，随机分为对照组、咳喘顺低、中、高剂量组（0.925，1.85，3.70 g.kg-1），麻杏止咳片组、盐酸氨溴组，每组10只。各组动物按1 mL/100 g体重灌胃给药（对照组灌胃等体积蒸馏水），每日1次，连续3日。末次给药后1 h，剪开大鼠颈中部皮肤，分离气管，在甲状软骨下缘正中两软骨环之间插入玻璃毛细管，使毛细管刚好接触气管底部表面，吸取痰液，记录2h内毛细管内的吸痰长度。

2.2.4 对大鼠气管分泌液中黏多糖含量的影响[5]取SD大鼠，180～220 g，随机分为对照组、咳喘顺低、中、高剂量组（0.925，1.85，3.70 g.kg-1），麻杏止咳片组、盐酸氨溴组，每组10只。各组动物按1 mL/100 g体重灌胃给药（对照组灌胃等体积蒸馏水），每日1次，连续3日。末次给药后1 h，处死大鼠从喉头处行气管插管，缓慢推注预温（37℃）的生理盐水1 mL并回抽此液，重复2次，离心取上清液，2 h内用咔唑比色法检测。每份标本分为2个稀释度，每个稀释度测定 2次，取平均值。

2.3 统计学方法

应用SPSS16.0统计软件进行数据处理分析，所有指标均以均数±标准差(s)表示，采用单因素方差分析分析比较组间差异。

3 实验结果

3.1 止咳实验

3.1.1 对小鼠氨水引咳实验的影响 与对照组比较，咳喘顺丸低、高剂量能显著减少氨水所致小鼠咳嗽次数（p＜0.01），并能显著延长咳嗽潜伏期（p＜0.05）；中剂量能显著减少氨水所致小鼠咳嗽（p＜0.01），并且具有延长咳嗽潜伏期的趋势。麻杏止咳片和可待因亦具有显著减少氨水所致小鼠咳嗽次数和延长咳嗽潜伏期的作用（p＜0.01）。结果见表1。

表1 咳喘顺丸对氨水所致小鼠咳嗽的影响（x±S）

3.1.2 对豚鼠枸橼酸引咳实验的影响 与对照组比较，咳喘顺丸低、中、高剂量能显著减少枸橼酸引起的豚鼠咳嗽次数（p＜0.01），并能显著延长豚鼠的咳嗽潜伏期（p＜0.01）；麻杏止咳片和可待因亦具有显著减少氨水所致小鼠咳嗽次数和延长咳嗽潜伏期的作用（p＜0.05或p＜0.01）。结果见表2。

表2 咳喘顺丸对枸橼酸所致豚鼠咳嗽的影响（x±S）

3.2 化痰实验

3.2.1 对正常小鼠的化痰作用的影响（气管段酚红法） 与对照组比较，咳喘顺丸中、高剂量能显著增加小鼠气管段酚红排泌量（p＜0.05），低剂量对小鼠气管段酚红排泌量无明显影响（p＞0.05）；盐酸氨溴索和麻杏止咳片亦明显增加小鼠气管段酚红排泌量（p＜0.05或p＜0.01）。结果见表3。

表3 咳喘顺丸对小鼠气管酚红排泌量的影响（x±S）

附：标准曲线：y=0.1437x－0.0295（y为OD值，x为酚红剂量），R2=0.9992。

3.2.2 对家鸽的化痰作用的影响（气管纤毛运动法）

与对照组比较，咳喘顺丸中、高剂量能显著增加墨汁走距，具有增强家鸽气管纤毛运动的作用（p＜0.05或p＜0.01）；盐酸氨溴索亦明显增强家鸽气管纤毛运动（p＜0.01）；咳喘顺低剂量和麻杏止咳片对家鸽气管纤毛运动无明显影响（p＞0.05）。结果见表4。

表4 咳喘顺丸对正常家鸽气管纤毛运动的影响（x±S）

3.2.3 对大鼠气管排痰量的影响 与对照组比较，咳喘顺丸中、高剂量能够显著增加大鼠的气管排痰量（p＜0.05～0.01）；盐酸氨溴索与麻杏止咳片亦显著增加大鼠的气管排痰量（p＜0.05或p＜0.01）。结果见表5。

表5 咳喘顺丸对大鼠气管排痰量的影响（x±S）

3.2.4 对大鼠气管分泌液中黏多糖含量的影响 咳喘顺丸中、高剂量组能显著增加大鼠气管分泌液中黏多糖的含量（p＜0.05）；盐酸氨溴索与麻杏止咳片亦显著增加大鼠气管分泌液中黏多糖的含量（p＜0.01）。结果见表6。

表6 咳喘顺丸对大鼠气管分泌液中黏多糖含量的影响（x±S）

附：标准曲线回归方程：y=0.003x-0.0637（x为黏多糖含量，y为OD值），R2=0.9947

4 讨论与分析

咳喘顺丸具有健脾燥湿、理气化痰、宣肺止咳平喘的功效。方中鱼腥草清肺热而解毒，茯苓健脾渗湿以制痰源，瓜蒌仁润肺化痰止咳，苏子降气化痰平喘，共为君药；半夏、陈皮乃辛温性燥之品，功能燥湿化痰，为治湿痰之良药，紫菀、冬花润肺化痰止咳，杏仁降气平喘，共用为臣药；佐以桑白皮、前胡降气平喘，祛痰止咳；使以甘草调和诸药。诸药合用，使肺气得宣、痰热得清、风寒得解,则喘咳、痰多、气急之症能除。

本实验在止咳实验中采用了小鼠氨水引咳法及豚鼠枸橼酸引咳法，结果提示，咳喘顺丸能显著减少氨水所致小鼠咳嗽次数及枸橼酸引起的豚鼠咳嗽次数，并能显著延长小鼠和豚鼠咳嗽潜伏期，表明咳喘顺丸能够有效镇咳。化痰实验中，中剂量和高剂量组咳喘顺丸能显著增加小鼠气管段酚红排泌量，增加墨汁走距，增强家鸽气管纤毛运动，增加大鼠气管分泌液中黏多糖的含量，增加大鼠的气管排痰量。综上所述，咳喘顺丸止咳、化痰作用的研究为其理气化痰、宣肺止咳平喘功效提供了药理学依据，也为临床上治疗慢性支气管炎、支气管哮喘、肺气肿所致的气喘胸闷、咳嗽痰多等症的良好疗效提供了支持。

[1] 谭源深,陈仲宜.介绍一种治疗咳喘病的新药—咳喘顺丸[J].职业医学,1991(04):254.

[2] 李金好,杨清芬,傅志慧.咳喘顺丸治疗慢性支气管炎79例[J].中国中医药信息杂志,2004(07):628.

[3] 李仪奎.中药药理实验方法学[M].上海:上海科学技术出版社,2006:428.

[4] 陈奇.中药药理研究方法学[M].上海:人民卫生出版社, 2006:25.

[5] 徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社, 2002:1361.