黄花铁线莲中香豆乙酸的抗炎活性研究△

涂院海，杨晓军

(1.延安大学附属医院，陕西 延安 716000；2.延安大学化学与化工学院，陕西 延安 716000)

黄花铁线莲中香豆乙酸的抗炎活性研究△

涂院海1*，杨晓军2

(1.延安大学附属医院，陕西 延安 716000；2.延安大学化学与化工学院，陕西 延安 716000)

目的：研究延安本地植物黄花铁线莲化学成分香豆乙酸在风湿病治疗中的药用价值。方法：在获得的5种化合物中，选香豆乙酸进行动物急性毒性及抗炎活性实验。结果：化合物香豆乙酸无急性毒性反应，且具有良好的抗炎活性。结论：延安本地生长植物黄花铁线莲所提取化学成分香豆乙酸具有良好的抗炎活性，对治疗风湿病关节炎有很好的药用价值。

黄花铁线莲；化学成分；香豆乙酸；抗炎活性；风湿病

黄花铁线莲Clematis intricata Bunge是毛茛科铁线莲属野生草本植物，在我国北方各省普遍生长，别名狗豆蔓、萝萝蔓，商品名透骨草，以全草及叶入药。夏秋采全草，晒干，摘叶晒干。味辛，性温，有微毒，具有祛风除湿，活血止痛，消肿作用。外用主治风湿性关节炎，民间常有用鲜草捣烂外敷治疗关节、软组织肿痛[1-2]。

为了进一步挖掘中草药在风湿病治疗中的有效途径，提高临床疗效，减少化学药带来的不良反应，最终为进入临床应用研究奠定理论基础，作者采集位于延安地区的野生植物黄花铁线莲全草，通过硅胶和凝胶柱色谱分离，利用多种波谱技术鉴定化学结构[3-4]，获得5种化合物。选择其中3种成分进行了动物急性毒性实验和抗炎活性实验，结果3种成分均未发现急性毒性反应，且均具有良好的抗炎消肿作用。本文仅对香豆乙酸(结构式见图1)的动物急性毒性、抗炎活性作单独报道，探讨其对风湿病的药用价值。

图1 香豆乙酸的化学结构式

1 材料

1.1 药物与试剂

复方七叶皂苷钠凝胶(山东绿叶制药有限公司，批号：20100953，阳性对照用)，交叉菜胶(美国Sigma公司)，二甲苯(北京益利精细化学有限公司)。

香豆乙酸的制备：黄花铁线莲(采集自陕西省志丹县，由延安大学生命科学院刘世鹏老师鉴定为Clematis intricata Bunge，自然晒干至恒重，粉碎。在超声波辐射下用70％乙醇提取，提取液减压浓缩得暗褐色浸膏。暗褐色浸膏用硅胶柱层析分离得到香豆乙酸组分。

1.2 动物与仪器

1.2.1 实验动物：ICR小鼠，体重18～22g；SD大鼠，体重80～110g，由西安交通大学实验动物中心提供，合格证号：0003240，许可证号：SCXK(陕)2007-001。

1.2.2 仪器 1012-P电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；YLS-7A足趾容积测量仪(山东医科大学)；YLS-Q4耳肿打耳器(山东医科大学)。

2 方法与结果

2.1 急性毒性实验

取ICR小鼠2只，给药前禁食12h，按16.67mg·mL-1最大浓度，按 0.4mL·(10g)-1的最大给药体积(折算给药剂量：666.8mg·kg-1)，24h内灌药2次，给药后观察小鼠一般情况。2只小鼠给药后大便正常，无死亡，活动自如，进食、饮水正常，也无明显中毒反应，提示本品难以测出LD50，故选择最大受试药物量实验[5]。

最大受试药物量实验：取小鼠40只，雌雄各半，体重18～22g，随机分为正常对照组及给药组，每组各20只小鼠(雌雄各半)，给药前禁食12h，给药组以33.3mg·mL-1浓度的香豆乙酸乳悬液，按0.4mL·(10g)-1(折算给药剂量：1 333.6mg·kg-1)，24h内2次灌胃给药，给对照组同体积色拉油，连续观察14d，详细记录小鼠行为活动、状态、饮食、大小便及毛色、分泌物等。

结果给药后0.5～3h，小鼠出现大汗、蜷缩等现象，随后观察，小鼠大便正常呈湿润颗粒状，无死亡，活动自如，进食、饮水均正常，皮毛光洁，口、鼻、眼及肛门清洁无分泌物，连续观察两周，体重有增加，给药前体重、第7d、第14d体重见表1，给药组体重与对照组体重差异无统计学意义。解剖小鼠，发现胸腔、腹腔未见异常液体，肠管未见胀气，心、肝、脾、肺、肾等重要脏器未见颜色、形态异常，没有出血点或其他病理改变，胃黏膜颜色红润，无出血点或溃疡，尸检无异常。在此剂量下未观察到香豆乙酸的急性毒性反应。/g

表1 香豆乙酸急性毒性小鼠体重(±s，n＝20)

表1 香豆乙酸急性毒性小鼠体重(±s，n＝20)

注：给药组与对照组比较，P＞0.05

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2.2 抗炎活性实验

实验组通过角叉菜胶致大鼠足跖肿胀及二甲苯致小鼠耳肿胀，利用复方七叶皂苷钠乳膏作对照，观察香豆乙酸外涂致炎部位对肿胀的减轻程度。

2.2.1 对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响 按方法[6]取SD大鼠40只，体重80～110g，雌雄各半。随机分为4组，每组10只。分别为模型组，阳性药组，香豆乙酸大、小剂量组。每鼠采用足趾容积测量仪测量标记位置以下右后肢的容积(mL)，作为致炎前正常值，然后分别在大鼠右后肢足跖皮下注射1％角叉菜胶混悬液0.1mL/只致炎，即可涂药：大剂量组每鼠右后肢足跖皮肤涂0.4mL(浓度16.67mg·mL-1)，小剂量组每鼠右后肢足跖皮肤涂0.2mL，阳性对照组每鼠右后肢足跖皮肤涂0.4mL。给药后1h，采用足趾容积测量仪测量标记位置以下的右后肢的容积(mL)，以后每隔1h用以上方法测右后肢足跖容积，共测量5h。计算肿胀度，肿胀度(mL)＝给药后足容积-给药前足容积，各组与模型对照组比较，组间进行t检验，结果见表2。由表2可见，与模型组比较，阳性药，香豆乙酸大、小剂量组从致炎后1～5h均能明显抑制角叉菜胶致大鼠足跖肿胀，提示香豆乙酸对化学性致炎有抑制作用。

2.2.2 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 按文献方法[7]，取健康ICR小鼠40只，体重18～22g，雌雄各半，随机分为4组，每组10只，分别为模型组，阳性药组(复方七叶皂苷钠凝胶)，香豆乙酸大、小剂量组。给小鼠右耳前后两面涂二甲苯约50μL，左耳作为正常对照。即可涂药：大剂量组每小鼠右耳前后两面皮肤涂100μL，小剂量组每小鼠右耳前后两面皮肤涂50μL，阳性对照组每小鼠右耳前后两面皮肤涂100μL。给药后1h后，将小鼠脱颈椎处死，沿耳廓基线剪下两耳，用9mm打孔器在左右耳同一位置打孔，电子天平上称重，右耳重量减去左耳重量为肿胀度，计算肿胀百分率，肿胀百分率＝(右耳重量-左耳重量/左耳重量)×100，组间比较，进行t检验，结果见表3。从表3可以看出，香豆乙酸大、小剂量组均能明显抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀，提示香豆乙酸对急性炎症有一定的抑制作用。

表2 KSHT-II对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响(±s，n＝10)/mL

表2 KSHT-II对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响(±s，n＝10)/mL

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

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表3 KSHT-II对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(±s，n＝10)

表3 KSHT-II对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(±s，n＝10)

注：与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

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3 结果

黄花铁线莲中提取的香豆乙酸通过动物急性毒性实验，显示均无明显的毒性反应，给药组与对照组比较，P＞0.05。通过大鼠耳肿实验和小鼠足跖肿实验，与复方七叶皂苷钠凝胶模型对照组对比，有良好的抗炎消肿作用。与模型对照组比较，急性毒性实验P＞0.05；抗炎活性大鼠足跖肿实验P＜0.05，P＜0.01；小鼠耳肿实验P＜0.01。

4 讨论

风湿病涉及医学多学科领域，病因复杂，病程长，疗效慢，且多数伴随骨关节、滑膜肿胀，属于一组疑难杂症。临床治疗中因长期口服用药导致肝肾及血液系统和胃肠道损害，是临床医生难于顾全的疑难问题[8]。作者在多年风湿病临床工作中，通过民间调查走访，翻阅资料，挑选陕北延安野生植物黄花铁线莲为研究对象，着手开展了对其化学成分、急性毒性和抗炎活性研究，分析黄花铁线莲单体化合物在风湿病治疗中的作用。

黄花铁线莲属于透骨草体系的1种，不同来源的透骨草，其疗效不完全一致[9-11]。资料调查有不少学者应用黄花铁线莲植物外敷或配伍煎汁仪器导入治疗风湿病及关节炎、腰腿痛、颈椎病等[1-2]。但是将提纯的单体化学成分研究应用于风湿病临床尚未见报道。通过对黄花铁线莲提取的化学成分香豆乙酸进行动物急性毒性实验和抗炎活性实验，结果证明未发现急性毒性反应。通过大、小鼠耳肿和足跖肿实验，与复方七叶皂苷钠凝胶对比，有良好的抗炎活性。

研究结果表明，延安本地野生黄花铁线莲植物中提纯的单体化学成分香豆乙酸无毒性，且具有良好的抗炎活性，在风湿病治疗方面有较高的药用价值，并消除了局部起水泡的不良反应，为进一步实施我国黄花铁线莲中单体化合物体内外用药研究与开发提供了有利的依据，有可能成为高效、低毒、无内脏损害的治疗风湿病的理想药物。

[1]全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编[M].下册.北京：人民卫生出版社，1976：173-175.

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[5]国家食品药品监督管理局.中药、天然药物研究技术指导原则[M]，2004.

[6]陈奇.中药药理研究方法[M].北京：人民卫生出版社，2006：353-354.

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《自然保护区展望：以历史使命、生存战略为视觉》简介

陶思明的《自然保护区展望：以历史使命、生存战略为视觉》一书由科学出版社出版发行。作者以自己从事中药材生产管理的十年亲历体验，在“人的生存保障”、“康体健身”等多个章节涉及到对中药材的论述，认为追根溯源，振兴中医药事业的基本问题之一就是要保护好中药材的天然来源——动物、植物、微生物，发展生产，保障供给，通过自然保护区加强保护，首先保证种源不灭绝，资源量也会随之增加，不只是后代人，现在的人就可以大受其益。

作者阐述了自然保护区的历史使命和生存战略两大基本问题，试图建立自然保护区与经济、社会、文化、教育、科学以及人们日常生产、生活等广泛领域的密切联系，认为大力增强社会各界和广大公众对保护区多种功能的更全面了解，积极发展公民参与决策，永存人民心中的自然保护区，才能永远立于不败之地；揭示了自然保护区以“自然为本”的本质和“以人为本”社会中“人”在捍卫自然生态利益上的局限性，认为每个保护区的每一天都受到经济利益的觊觎和挑战，必须始终坚持生态优先的思想和决策方向，始终追求有利于落实保护的管理制度和措施，以实现国家保护目标为导向，真正管住有明显危害的开发建设活动，真正避免人主动施加的不可控威胁，解放自然力，从而展现自然保护区事业乐观的未来。

该书可供各级政府经济发展、自然保护、公共服务、财政支持等部门，国土规划、产业布局、区域发展、资源环境等研究单位，以及涉及自然保护区政策法规制定、开发建设管理、社区工作、公众传媒、环保志愿者和大专院校相关专业师生等阅读和参考。

Study on Anti-inflammatory Activity of Coumadin Acetic Acid in Clematis intricata

TU Yuan-hai1，YANG Xiao-jun2
(1.Yanan University Affiliated Hospital，Yanan 716000，China；2.Yanan University Chemistry and Chemical Engineering Institute，Yanan 716000，China)

Objective：To study coumadin acetic acid in Clematis intricata on the treatment of rheumatism medicinal value.M ethods：Choose coumadin acetic acid from the 5 kinds of compound to observe effects on animal acute toxicity and anti-inflammatory activity experiment.Results：Compound coumaric acid had no acute toxicity reaction，and had good anti-inflammatory activity.Conclusion：Coumadin acetic acid has good anti-inflammatory in the treatment of rheumatism arthritis，which had very good medicinal value.

Clematis intricata；Coumadin acetic acid；Anti-inflammatory；Activity rheumatism

2011-12-12)

延安市科技局资助科研项目(2008年)

*[通讯作者]涂院海，E-mail：qifengqi＠163.com