我院就诊女性人乳头瘤病毒基因筛查分析

尹德英，刘 霞，田 镔

(兰州市妇幼保健院检验科，兰州 730030)

生殖道人乳头瘤病毒(human papilloma virus，HPV)感染是常见的妇产科疾病之一，主要通过性传播，近年来发病率逐年升高［1］。早期流行病学和基础研究已经证实HPV感染是宫颈上皮内病变(cervical intraepithelial neoplasm，CIN)和宫颈癌的主要原因。HPV有多种基因型(亚型)，而且不同的HPV亚型的感染其致病性和后果也有显著差异，根据HPV持续感染是宫颈癌发生的必要条件和主要危险因素，将HPV-DNA分为高危型与低危型的感染检测也成为宫颈癌筛查的必要内容。本文对2012年10月至2013年5月期间来我院就诊895例妇科患者进行19种HPV基因型的分型检测，旨在了解我院就诊女性HPV DNA基因分型在宫颈病变中感染状况及分布特点。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2012年10月至2013年5月我院就诊患者宫颈病变HPV感染筛查的女性患者895例。年龄:20～61岁，从﹤25岁开始，以5岁为一年龄段 ，分8个年龄组。

1.2 仪器和试剂 HPV-DNA提取试剂盒，分型检测试剂盒(中山大学达安公司);ABI7300PCR实时荧光PCR扩增仪(美国);核酸分子杂交水浴摇床。

1.3 标本采集和处理 HPV筛查标本提取样步骤和要求按宫颈细胞学取材;常规宫颈口采样，采集标本放于盛有细胞保存液的小瓶中，－20℃冷冻保存待检。

1.4 HPV分型检测步骤 ①HPV-DNA提取;②HPV-DNA PCR扩增;③核酸分子快速导流杂交;④显色HPV分型。操作和结果判读严格按试剂盒说明书进行。19种HPV分为高危型和低危型。HPV亚型高危型有 16 种，包括 16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、cp8304;HPV 亚型低危型有3种，分别为6、11和43。有≥2个型为多重感染(无论高危型和低危型)。

1.5 统计学方法 列表资料分析，以百分率作为HPV感染与宫颈病变的评价指标，P＜0.05为差异有统计学意义，对多重感染者各亚型阳性率重复计算。

2 结果

2.1 妇女HPV感染检出率(表1) 应用HPV基因分型的情况，895例女性中HPV基因检测阳性82例，阳性率9.16%，高危 HPV亚型71例，阳性率7.93%(71∕895)，高危人数结构百分比占 86.58%(71∕82);低危 HPV亚型阳性11例，占1.22%，低危人数结构百分比13.41%(11∕82)。

表1 各年龄段妇女HPV感染检出率［n(%)］

2.2 不同年龄组的HPV基因分布(表2和表3)82例HPV阳性中，以HPV16亚型检出率最高，占总阳性率的32.93%(27∕82)，占高危38%;最低是HPV18、并为二重感染，占阳性 1.22%，占高危1.41%;其它型别以感染率高低依次为 HPV52(12.20%)、58(10.97%)、cp8304(8.54%)、66(8.54%)、53(6.10%)、68、31、56、33 各 3 例，分别占(3.65%)，59、51、39 分别占 2.44%，多重感染占高危15.85%，其中与16、cp8304多重感染为主，感染率 28.50%，其次分别与 68、66多重分别占(21.43%，14.28%)5 个型 1 例占 7.1%，低危亚型HPV 6占总阳性 9.76%，占低危感染 72.73%，HPV11(6.10%)，占低危感染 45.45%，低危型 43没有检测出。

表2 各基因型在不同年龄组的HPV基因分布［n(%)］

表3 多重感染在各年龄组的基因分布(n)

3 讨论

本研究中HPV检测阳性率9.16%，与之前有报道的甘肃地区的感染率29.5%相比较低，并低于浙江省台州地区35.08%，北京地区的57.1%，深圳17.5%，呼和浩特地区13.04%及山西省高发区的27.5%，与西藏地区 9.19% 相接近［2］。最常见的HPV基因型为16型，与全球范围内的最常见感染亚型一致，除52，58，cp8304感染亚型也呈上升趋势，而与国外常见的HPV18型较少见，提示HPV感染的型别具有人群和地域特点。

3.1 HPV感染的分型分布 国际癌症研究所(IARC)新近发现，在宫颈癌患者中除HPV16外，HPV45，31，33 较常见，多数亚洲国家研究显示［3-5］，HPV52，58 的感染率高于 HPV45，31，33。本研究发现，不同年龄组各基因型阳性感染率不同，HPV16是最常见的基因型，在总体及各年龄组中的阳性率均居首位，与世界范围的研究结果一致［3-7］。HPV52，58仅次于HPV16，符合亚洲人群研究结果。

3.2 HPV感染对比分析 本研究中HPV cp8304，66，53阳性率较高，HPV18阳性率较低，与以往采用其他方法的研究结果不同，有关研究香港2 080例中国籍妇女宫颈癌筛查中，结果均提示除HPV16，52，58 外，HPVcp8304，53，66 在中国人中较常见，而HPV18的感染率低于其他国家，显示具有人群和地域特点;对潮州农村地区HPV感染率的调查表明:人乳头状瘤病毒52，16，58，33，68 和 18 型为该地区最为常见的感染类型，其中52和/或58型的感染率显著高于16和/或18型的感染率［8］;2009年有研究报道:甘肃地区HPV 感染亚型依次16，52，58，31，18，6，68，53，33，11，而 cp8304，66，仅占 0.1% ～3.1%，出现上述结果还可能与下列情况有关:①以往研究较少检测cp8304，53，66，其感染状况未被认识;②上述基因型在宫颈癌患者中并不常见，而以往多数研究集中在宫颈癌患者，对普通人研究较少。

3.3 HPV感染的年龄分布 本研究发现＜35岁女性低危HPV相对占优势，以HPV6的阳性远较其他年龄段高，且随年龄增加阳性率明显递减，而＞25岁女性高危型感染逐渐增多，尤其在40～45岁年龄组，高危型HPV16，52，58的阳性率较高，虽然在年轻人群中HPV感染多是一过性的，且低危型的感染较多见，但35岁之后高危型HPV的持续感染是宫颈癌的直接原因，存在宫颈癌发生的高危因素，应重视该现象，结合宫颈阴道镜、宫颈液基细胞(TCT)、宫颈组织活检以及HPV DNA定量，早期防治。

3.4 关于HPV多重感染 宫颈癌的发病机制目前尚不清楚，但HPV感染已被流行病学和生物学证明是引起宫颈癌及癌前病变的必要因素［9］。HPV多重感染是否增加宫颈癌的发生?对此问题争议较多，有学者认为多重感染并不增加宫颈癌的发生，HPV感染的型别数与宫颈病变级别有关，但也有不少学者认为多重感染与宫颈病变有关。Ho等［10］认为HPV多重感染出现持续感染的危险性更大，其是宫颈病变发生的原因，因此多重感染易导致宫颈病变。Lee等［11］认为，多重感染发生宫颈癌的危险比单一型感染者增加约1.5倍，因此本研究结果值得重视。

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