AMP579与腺苷对缺血再灌注心肌细胞凋亡及作用机制的比较1）

田 金，王 雄

减轻缺血再灌注损伤是临床研究的重要课题［1］，腺苷对减轻缺血再灌注损伤国外有较多报道。而AMP579对减轻缺血再灌注损伤文献报道较少。本课题组制备在体大鼠缺血再灌注模型，比较AMP579和腺苷对减轻心肌缺血再灌注损伤的作用。观察两药对心肌细胞凋亡的影响和作用机制。

1 材料与方法

1．1 动物与试剂 健康雄性 Wister大鼠64只由山西医科大学动物实验中心提供，体重220g～250g；腺苷为Arnresco公司。红四氯唑（TTC）。Evans蓝（上海申能－德泰诊断技术有限公司）；TUNEL细胞凋亡检测试剂盒。核转录因子（NF－κB）免疫组化检测试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司）。

1．2 模型分组 以20%乌拉坦（5mL／kg）腹腔麻醉，开胸暴露心脏，结扎左前降支冠状动脉（LAD），随机将64只大鼠分组，每组16只。假手术组：开胸不结扎冠脉，麻醉150min；缺血再灌注组（I／R组）：结扎30min再灌注120min；腺苷组：结扎30 min，静滴腺苷305μg／（kg·min），持续5min，再灌注120min。AMP579组：结扎30min，静滴 AMP579 305μg／（kg·min），持续5min，再灌注120min。AMP579组，再灌注前经股静脉静滴AMP579 305μg／（kg·min），持续5min［2］。

1．2．1 心肌梗死范围测量 实验终止后将LAD重新阻塞，左心室内推20%Evans蓝2mL，2min后迅速剪下心脏，分离缺血区和非缺血区，坏死区和非坏死区［2］。

1．2．2 心肌细胞凋亡检测 取缺血区心肌组织置于10%中性甲醛液中，固定48h，乙醇脱水［2］。

1．2．3 免疫组化检测NF－κB水平 应用TUNEL法，免疫组化染色NF－κB均在细胞浆及胞核内表达，阳性反应为棕黄色或黄色，用Image－Proplus型全自动医学图像彩色分析系统测定阳性目标的平均光密度值，并计算其均值作为代表值［2］。

1．3 统计学处理 采用SPSS13．0统计分析软件，计量资料以均数±标准差（±s）表示。两组资料比较用q检验，多组资料之间比较用方差分析。

2 结 果

2．1 心肌梗死范围 腺苷组和AMP579组梗死范围明显低于I／R组。详见表1。

表1 各组大鼠心肌梗死范围比较（±s）

表1 各组大鼠心肌梗死范围比较（±s）

与假手术组比较，1）P＜0．01；与I／R组比较，2）P＜0．01；与腺苷组比较，3）P＜0．05

组别 动物数（只） 心肌梗死范围（%）假手术组8 0 I／R组 8 37．11±2．761）腺苷组 8 21．87±1．291）2）AMP579组 8 18．96±1．191）2）3）

2．2 心肌细胞凋亡 与假手术组比较，I／R组心肌细胞凋亡率明显增高。与I／R组相比，腺苷组与AMP579组心肌细胞凋亡率明显降低，且AMP579组明显低于腺苷组。详见表2。

表2 各组大鼠心肌细胞凋亡率及NF－κB表达比较（±s）

表2 各组大鼠心肌细胞凋亡率及NF－κB表达比较（±s）

与假手术组比较，1）P＜0．01；与I／R组比较，2）P＜0．01；与腺苷组比较，3）P＜0．05

组别 动物数只细胞凋亡率‰NF－κB平均光密度值假手术组 8 7．74±1．010．073±0．013 I／R组 8 439．83±13．931） 0．416±0．0641）腺苷组 8 312．57±11．931）2） 0．250±0．0531）2）AMP579组 8 268．33±10．841）2）3） 0．169±0．0121）2）3）

2．3 免疫组化检测NF－κB水平 假手术组仅在胞浆中有少量表达，I／R组于胞浆和胞核中均有明显表达，说明有部分NF－κB在活化过程中转移到核内，而腺苷组与AMP579组在胞浆和胞核中的表达均有不同程度的减少。详见表2。

3 讨 论

腺苷和AMP579均可减轻缺血再灌注损伤，缩小梗死面积，其作用机制包括抑制细胞介导的脱颗粒及黏附反应与血小板聚集、抑制钙超载、扩张血管等［3］。其对细胞凋亡的抑制作用文献报道较少。

NF－κB是哺乳动物细胞中的转录因子，参与机体炎症反应、免疫反应、细胞分化与凋亡及其他应激反应［4］。心肌NF－κB表达增强将加重心肌细胞凋亡。心肌缺血再灌注过程中产生大量的各种活性氧及炎症介质导致NF－κB的激活，加重心肌损伤。

本研究发现，AMP579和腺苷均可减轻心肌缺血再灌注损伤，缩小梗死面积。AMP579的作用更强。其缩小梗死面积的程度与抑制NF－κB程度有关。AMP579的抑制作用更强。说明心肌缺血再灌注损伤NF－κB表达水平与细胞凋亡密切相关［5］。这也为AMP579减轻缺血再灌注损伤提供了实验依据，而NF－κB诱导凋亡的信号转录途径有待进一步研究。

［1］ Van Domburg RT，Sonnenschein K，Nieuwlaat R，et al．Substained benifie 20years after reperfusion therapy in acute therapy in acute myocardial infarction［J］．J Am Coll Cardiol，2005，46：15－20．

［2］ 李晓京，王雄．腺苷后处理对缺血再灌注心肌凋亡的影响［J］．中西医结合心脑血管病杂志，2009，7（3）：302－303．

［3］ Zhao ZQ，Clark KL，Wang NP，et al．Comparison of AMP579and adenosine in inhibition of cell－cell interaction between human neutrophic and vascular endothelid cell［J］．Drug Devel Res，2000，49：266－272．

［4］ Abraham E，NF－kappaβactivation［J］．Crit Care Med，2000，28（4Suppl）：N100－N104．

［5］ Zingareli B，Hake PW，Denenbery A，et al．Sesquiterpene lactone parthenolide，an inhibitor of I kappa B kinase complex and nuclear factor－kappa B，exerts beneficial effects in myocardial reperfusion injury［J］．J Shock，2002，17（2）：127－134．