胃癌病变中p53和增殖细胞核抗原的表达及其与预后的关系

吴冬寒，张学娟，吴冬冰

（海南省三亚市人民医院消化内科 572000）

有研究报道明抑癌基因p53和增殖细胞核抗原（PCNA）与多种肿瘤的发生、发展及预后有关［1］。作者为探讨抑癌基因p53和增殖细胞核抗原（PCNA）在胃癌和癌前病变中的表达情况，采用免疫组织化学技术检测p53和PCNA在正常胃黏膜→肠上皮化生→异型增生→胃癌的演变过程的表达，探讨p53和PCNA与胃癌发生、发展及其与预后的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院2009年1月至2010年12月收集的胃组织148例，术后均经病理检查证实，术后病理其中肠上皮化生26例，中、重度不典型增生28例，原发性胃癌69例，正常胃黏膜组织25例设为正常对照组。69例原发性胃癌中，男性54例，女性15例；年龄33～78岁，平均（52.0±16.13）岁；术前均未经化疗和放疗。按世界卫生组织制定的标准进行组织分型，高、中分化腺癌39例，低及未分化分化腺癌22例，黏液腺癌6例，印戒细胞癌2例。病理分期［国际抗癌联盟（UCIC）标准］为1期11例，2期22例，3期27例，4期9例。浸润深度：浆膜内（包括黏膜层、黏膜下层、肌层）16例，浆膜层和浆膜外层53例；肿瘤直径大于或等于5cm者24例，小于5 cm者45例；淋巴结转移42例，无转移者27例。

1.2 试剂 SP试剂盒试、鼠抗p53单克隆抗体、鼠抗PCNA单克隆抗体由福州迈新生物技术开发公司提供。

1.3 方法 组织玻片经多聚赖氨酸预处理，石蜡标本4μm厚连续切片，常规脱蜡，逐级乙醇水化，免疫组织化学SP法按试剂盒说明书进行，DAB显色。以已知阳性切片作为阳性对照，磷酸盐缓冲液（PBS）替代一抗作为阴性对照。

1.4 结果判定 p53和PCNA表达阳性细胞胞核呈明显棕黄色着色。p53高倍镜下每张切片随机选择10个视野，每个视野计数100个细胞，依据细胞染色程度、及染色细胞百分率进行评分［1］：不着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；0分为无阳性细胞，≤10%为1分，11%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分；染色强度与阳性细胞百分比乘积大于3分为阳性。PCNA计数用PCNA标记指数（PCNALI），每个标本随机观察5个高倍视野，每个视野计数200个细胞，计算阳性细胞百分率。

1.5 统计学处理 本组资料采用SPSS 10.0统计软件处理，组间进行χ2检验、方差分析和t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 p53、PCNA在正常胃组织和病变组织中的表达 p53在正常胃黏膜和肠化上皮组织中无阳性表达，胃癌组织中的阳性表达率显著高于异型增生组织，组间比较差异有统计学意义（P＜0.01）。从正常胃黏膜、肠上皮化生、异型增生到胃癌，PCNA标记指数（PCNALI）逐渐递增，PCNA在肠化、不典型增生和胃癌中阳性表达率与正常胃黏膜比较差异均有统计学意义，且呈递增趋势（P＜0.01），结果见表1。

表1 p53和PCNA在正常胃黏膜及病变组织中的表达

图1 胃癌组织中p53、PCNA表达均呈细胞核阳性（SP×200）

2.2 胃癌组织中p53、PCNA的表达与临床病理特征的关系

p53、PCNA表达与胃癌的分化程度和有无淋巴结转移关系密切，分化程序越低、有淋巴转移，p53、PCNA阳性表达越高，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

2.3 胃癌中p53表达与PCNALI的关系 p53阳性表达组的PCNALI（65.69±17.48）明显高于p53阴性表达组PCNALI（25.03±8.97），差异有统计学意义（P＜0.01）。

表2 p53和PCNA的表达与胃癌临床病理特征的关系

3 讨 论

大量的研究表明胃癌的发生、发展是多阶段逐步演变过程，胃癌的演变遵循正常胃黏膜→肠上皮化生→异型增生→胃癌的变化规律，其间涉及多种癌基因和抑癌基因的表达和调控［2］。抑癌基因p53对细胞周期的增殖具有负调控作用，它可使细胞停滞于G1期，抑制DNA合成及诱导DNA修复，从而抑制细胞的增殖［3－5］。p53另外一个主要的靶基因是 Mdm2，编码泛素连接酶，Mdm2可以结合p53蛋白的N端引起p53的失活，出核转运、降解［6］。p53也是一种细胞老化的主要调节器，能封闭细胞周期有利于细胞进入老化［7］。突变是肿瘤抑制基因失活的主要机制之一，p53与50%的人类癌症有关，在胃癌中p53的突变频率达到32%［8］。基因突变后p53就失去了上述作用。在p53基因编码的蛋白中，野生型p5蛋白的半衰期很短，而突变型p53蛋白降解缓解，代谢半衰期较长，积聚在核内易于检测到，所以使用免疫组化检测的p53均为突变型。本研究发现突变型p53蛋白在正常胃黏膜、肠化上皮无表达，在异型增生中有低表达，且主要是在重度不典型增生中出现，而在胃癌中的表达明显增高，提示p53蛋白的异常表达与胃癌的发生发展密切相关，突变后p53基因抑制细胞增殖能力减弱，导致细胞增殖失控从而发生肿瘤。此外p53蛋白的检测有助于对胃黏膜癌变倾向的判断和胃癌的早期诊断。Forones等采用免疫组化的方法分别检查了胃腺癌、慢性胃炎和肠化生胃黏膜组织，结果发现显示胃腺癌中p53的阳性表达高达59%，结果也与本例相符［9］。本研究结果显示p53蛋白的异常表达与胃癌的分化程度及淋巴结转移有关，低、未分化胃癌p53蛋白表达明显高于高、中分化胃癌，有淋巴结转移组p53蛋白表达也明显高于无淋巴结转移组，与文献报道相符［10－12］。提示p53蛋白的异常表达与胃癌生物学行为密切相关，p53可作为评价胃癌恶性程度和扩散的重要指标。

PCNA是一种核蛋白，在DNA合成中起重要作用，能与DNA多聚酶δ结合，参与DNA复制。PCNA的表达和细胞增殖周期相关，它在G1后期开始升高，G1／S期交界时达到高峰，G2、M期明显下降，检测PCNA可客观反映细胞增殖活性［13］。PCNA阳性细胞的多少与肿瘤发展、预后均有密切的关系［14］。在肿瘤的发生过程中，细胞增生活跃，处于增生状态，其PCNA表达明显增强，且随着疾病的发展，PCNA表达也逐渐增加［15］。本研究显示，在正常胃黏膜→肠上皮化生→不典型增生→胃癌的演变过程中PCNALI呈递增趋势，说明在胃癌变过程，随着病变的加重，恶性程度的增高，细胞的增殖活性逐渐增强。结果显示胃癌的形成与胃黏膜上皮过度增殖有关。本研究还显示PCNA的表达与胃癌的分化程度、浸润深度和淋巴结转移有关，分化程度越低、有淋巴转移，p53、PCNA阳性表达越高，提示胃癌的浸润转移是肿瘤细胞不断增殖的结果，肿瘤细胞的增殖活性与胃癌的生物学行为，特别是肿瘤的浸润、转移和预后等密切相关。检测PCNA对胃癌的分化、侵袭和预后判断有重要的意义。

本研究结果表明，p53蛋白阳性表达组的PCNALI明显高于阴性表达组，表明p53基因的突变可使细胞过度增殖，进而导致肿瘤的形成和发展。PCNA的表达与胃癌的分化程度、浸润深度和淋巴结转移有关，与肿瘤的浸润、转移和预后等密不可分。联合检测p53和PCNA对判断胃癌的发展和预后及指导治疗有积极意义。

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