系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞亚群的临床分析

蔡茂文，张 晶，周 彬

(1.四川省宁南县人民医院内科，四川 宁南 615400;2.四川省医学科学院·四川省人民医院风湿免疫科，四川 成都 610072)

为了解系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)患者外周血T淋巴细胞的变化，探讨T淋巴细胞与SLE疾病活动指标的关系，本研究采用流式细胞术检测了76例SLE患者(低度活动组与高度活动组)外周血 CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+细胞百分率及CD3+CD4+/CD3+CD8+比值，并与同期36例健康体检女性(健康对照组)比较，同时与SLE疾病活动指数(systemic lupus erythematosus disease activity index，SLEDAI)评分(SLEDAI)、24 小时尿蛋白、血沉(SER)、补体C3、补体C4进行相关性分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 76例SLE患者均为女性，均为四川省人民医院风湿免疫科2011年11月至2012年10月的住院患者，年龄17 ～79 岁［(34.67±10.67)岁］，其中20～40岁48例。所有病例均符合2009系统性红斑狼疮国际临床合作组(Systemic Lupus International Collaborating Clinic，SLICC)修定的美国风湿病学会(American College of Rheumatology，ACR)系统性红斑狼疮分类标准［1］。疾病活动性参照中华医学会风湿病学分会《系统性红斑狼疮诊断及治疗指南》［2］，SLEDAI 0～4 分为稳定期，5～9 分为低度活动期，≥10分为高度活动期。76例SLE分为低度活动组(36例)和高度活动组(40例)。健康对照组年龄16 ～76 岁［(35.50±12.12)岁］，性别和年龄与低度活动组、高度活动组差异均无统计学意义(P ＞ 0.05)。

1.2 标本采集和检测方法 采集外周血标本2 ml，EDTA-K2抗凝，EDTA-K2抗凝血 100 μl加入实验管和空白对照管。于实验管加入20μl CD3-Per-CP、CD4-FITC和CD8-PE鼠抗人单克隆抗体，4℃避光孵育30分钟。染色后将实验管和空白对照管在室温下分别加入红细胞裂解液2 ml，混匀后室温孵育15分钟。裂解后两个试管分别在转速1500 r/min条件下离心3分钟，弃去上清液，得到白细胞沉淀。使用磷酸盐缓冲液洗涤后，在转速1500 r/min离心3分钟，反复两次。最后分别加入600μl 4%多聚甲醛固定液混匀，制成单细胞悬液上机分析。

1.3 统计学方法 采用 SPSS 18.0统计软件处理。数据以均数±标准差表示，组间比较用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义;用Pearson积差相关原理进行两两比较，判断指标间相关性。

2 结果

2.1 外周血T淋巴细胞的变化 76例SLE患者中57例存在T淋巴细胞亚群异常，占75.0%。分组比较:低度活动组与高度活动组间 CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD4+/CD3+CD4+差异均具有统计学意义(P＜0.05);两组SLE患者与健康对照组比较，CD3+差异均无统计学意义;而CD3+CD4+细胞均减低，CD3+CD8+细胞均增高，差异均有统计学意义(P＜ 0.01)，CD3+CD4+/CD3+CD8+比值均降低，且多数(34/57，占59.6%)比值倒置(即:比值＜ 1)，差异有统计学意义(P＜0.01)。结果见表1。

表1 SLE患者与健康对照组淋巴细胞亚群比较

2.2 SLE患者T细胞亚群与疾病活动指标的相关性分析 SLE患者CD3+CD4+与SLE疾病活动指标SLEDAI评分、24 h尿蛋白存在显著的负相关，与补体C3、C4存在显著的正相关;CD3+CD8+与C4存在显著负相关，与 SER存在显著的正相关;CD3+CD4+/CD3+CD8+比值与SLEDAI存在显著的负相关;而CD3+则无明显相关性。结果见表2。

表2 SLE患者淋巴细胞亚群与疾病活动指标的相关性分析 (r值)

3 讨论

SLE是一种好发于育龄期女性的累及多系统的自身免疫性疾病［3］，机体在多种因素作用下，正常的自身免疫耐受机制被破坏，B细胞功能亢进，过度增殖，产生多克隆免疫球蛋白和多种自身抗体，从而损伤自身组织。T细胞亚群异常在SLE发病中的作用一直是国内外风湿病学专家研究的热点问题，但结果不太一致。多数人认为B细胞的高度活化是以T细胞异常为基础且在其诱导下产生的。T淋巴细胞亚群对机体免疫功能的稳定起着重要的调节作用，而CD4、CD8亚群的数量和功能异常则是T细胞免疫功能异常的重要体现。过去多数研究认为［4］在SLE活动期，CD4+(辅助/诱导 T细胞)升高，CD8+(抑制/杀伤T细胞)下降，CD4+/CD8+比值升高，尤其是CD8+下降引起B细胞多克隆抗体激活及体液免疫异常。但近年研究［4］显示，活动期SLE患者外周血CD4+细胞及CD4+/CD8+T细胞比值降低，而CD8+T细胞正常或升高。本研究结果也显示活动期SLE患者的CD8+细胞与健康对照组比较明显升高(P＜0.01)，CD4+细胞数明显降低(P＜0.01);CD4+/CD8+比值降低(P ＜ 0.01);CD3+差异无统计学意义(P＞0.05)，表明SLE患者存在T细胞平衡紊乱［5，6］。

有进一步研究发现CD8+细胞亚群具有明显的异质性，活动期SLE患者的CD8+细胞几乎全部被反抑制性T细胞(CD8+VV+)取代，不能显示抑制功能，而阻断了 CD8+细胞对 CD4+细胞的抑制作用［7］，而其中CD8+VV+的增加可以直接作用于Th细胞，发挥正向调节作用使CD8+细胞增多。另一方面CD4+细胞减少，主要原因是CD4+亚群中的抑制诱导T细胞降低，T细胞不能诱导CD8+细胞对B细胞产生抑制作用［8］，因此活动期SLE患者CD4+细胞降低，CD8+细胞正常或升高，仍然表现为体液免疫的亢进，B细胞增殖并产生大量的自身抗体。但关于SLE患者T淋巴细胞的变化与疾病活动度(SLEDAI评分、血沉、补体)及肾脏损害之间的关系，报道较少。

本研究中活动期SLE患者有75.0%存在T淋巴细胞亚群异常，与相关报道有所差异［9］。而SLE高活动期组与低活动期组比较，CD3+CD4+细胞数降低与CD3+CD8+细胞数升高均更明显 (均P＜0.05)，二者比值也明显降低(P＜0.05)。提示活动期SLE患者体内T细胞亚群数量分布存在异常，并且与疾病活动度有密切相关性，这与Maeda等［10］的研究结果一致。

本研究中CD3+CD4+与SLEDAI评分、24 h尿蛋白存在显著的负相关，与补体C3、C4显著正相关;CD3+CD8+与C4存在显著负相关，与SER正相关;CD3+CD4+/CD3+CD8+比值与SLEDAI评分存在负相关。故监测T淋巴细胞亚群的表达对SLE的治疗及评估有一定指导意义。

总之，SLE患者存在T淋巴细胞的异常表达，检测外周血淋巴细胞亚群的数量变化，有助于全面了解患者的免疫状态，对正确判断病情和指导临床治疗有重要意义。

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