结直肠癌术后组织中Kindlin－2、整合素β1和VEGF蛋白的表达及意义

王启船 王 青 万里新 屈中玉 盛 晶 (南阳市中心医院肿瘤内科，河南 南阳 473009)

结直肠癌是一种具有高度侵袭性的肿瘤，其发生发展的分子生物学机制复杂。Kindlin-2作为黏着斑蛋白家族的重要成员，对黏附细胞可以形成有效的调节，进而对肿瘤的进展形成有效的促进〔1，2〕。整合素β1是重要的黏附分子，与Kindlin-2可能在黏附分子调节的角度有共同作用，同时整合素β1还可以调节基质降解和信号转导，在肿瘤形成、生长、分化、血管形成和转移中起重要的作用〔3〕。血管内皮生长因子(VEGF)对血管生成的促进作用明显，Kindlin-2和整合素β1可能和VEGF有关联。本研究采用流式细胞技术，检测结直肠癌及正常结肠组织中Kindlin-2、整合素β1和VEGF蛋白表达情况，探讨Kindlin-2、整合素β1和VEGF表达的关系。

1 材料与方法

1.1 临床资料 2008年1月至2010年11月行结直肠癌根治手术的患者87例术后的新鲜样本。严格经病理主任医师阅片后纳入，并置于－80℃冰箱中冻存。排除术前进行放、化疗的患者。年龄36～70岁，平均54.1岁，其中男47例，女40例。选择切端证实为正常结肠黏膜组织的标本70例为对照组，其中男35例，女35例，年龄36～71岁，平均54.3岁。

1.2 3种蛋白检测的方法 购买Santa Cruz公司的Kindlin-2、整合素β1和VEGF的浓缩液。通过预实验选取最佳配比浓度。流式细胞学的检测步骤参考刘爱东等〔4〕应用的方法，应用BD公司的流式细胞仪进行检测。

1.3 流式细胞结果的判定 采用荧光指数(FI)表示Kindlin-2与整合素β1抗体蛋白的表达量。FI值计算公式为:FI=(结直肠癌中Kindlin-2、整合素β1或VEGF蛋白表达的平均荧光强度－对照样品的荧光强度)/对照样品平均荧光强度。

1.4 统计学处理 应用SAS6.12软件，组间比较采用t检验，同时进行相关性分析。

2 结果

2.1 两组中Kindlin-2、整合素β1和VEGF表达的比较 观察组中Kindlin-2、整合素 β1和 VEGF的表达明显高于对照组(P＜0.01)。见表1。

表1 两组Kindlin-2与整合素β1表达(±s)

表1 两组Kindlin-2与整合素β1表达(±s)

VEGF观察组组别 n Kindlin-2 整合素β1 87 1.27±0.15 1.30±0.19 1.52±0.29对照组 70 1.00±0.17 1.00±0.20 1.00±0.32 t/P值8.75/0.008 5 9.86/0.000 5 13.67/＜0.000 1

2.2 观察组中Kindlin-2、整合素β1和VEGF与临床特征的关系 Kindlin-2、整合素β1和VEGF的半定量表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移、Dukes分期及Ki67的表达密切相关，见表2。

表2 Kindlin-2、整合素β1和VEGF在观察组不同临床特征中表达的比较(±s)

表2 Kindlin-2、整合素β1和VEGF在观察组不同临床特征中表达的比较(±s)

临床病理特征 n Kindlin-2 t值 P值 整合素β1 t值 P值 VEGF t值 P值5 1.43±0.34 9.42 0.012 1浆膜及以外 30 1.39±0.18 1.47±0.16 1.65±0.34淋巴结转移 无 54 1.16±0.14 10.23 0.000 3 1.21±0.15 9.81 0.003 9 1.32±0.13 10.24 0.004 3有33 1.43±0.16 1.46±0.18 1.67±0.19 Dukes分期 Ⅰ～Ⅱ 51 1.18±0.18 8.60 0.010 5 1.20±0.21 10.10 0.001 9 1.42±0.35 9.86 0.010 2Ⅲ～Ⅳ 36 1.38±0.20 1.50±0.22 1.59±0.31 Ki67 ＜20% 47 1.17±0.18 9.41 0.006 2 1.19±0.19 11.30 ＜0.000 1 1.45±0.32 8.74 0.0182≥浸润深度 未及浆膜 57 1.17±0.16 9.78 0.004 6 1.20±0.15 9.20 0.007 20% 40 1.40±0.18 1.44±0.17 1.60±0.25

2.3 Kindlin-2、整合素β1和VEGF在结直肠癌中的相关性相关性分析发现肿瘤中Kindlin-2和整合素β1(r=0.44，P=0.031 4)、Kindlin-2 和 VEGF(r=0.41，P=0.046 5)、整合素 β1和VEGF(r=0.49，P=0.020 9)的表达均具有正相关性。

3 讨论

整合素由α、β2两个亚基组成，是一种多功能的跨膜糖蛋白，两个亚基组成的结构大部分相似，但是每个亚单位具有特征性的细胞外片段、跨膜片段和细胞内片段，因此具有特征性功能。其不仅有介导黏附作用，还可以介导细胞转导信号。整合素β1是重要的β亚单位，能与不同的α亚单位结合，构成细胞外基质的大部分受体，是调节细胞与细胞外基质的重要黏附分子，其高表达对肿瘤的进展有重要作用〔5〕。Kindlin家族共发现3个成员，其功能也较多，其对肿瘤细胞恶变的作用主要和细胞内信号转导和细胞的增殖相关，Kindlin-2是代表性成员〔6〕。Kindlin-2常表达在细胞质的黏附斑处，然后进行转录，再与migfilin连接，将细胞与细胞进行连接，以传导细胞间的信号〔7〕。Kindlin-2与整合素结合后，调节细胞间信息传递和信号转导，使细胞间的黏附能力减弱，而细胞的迁移能力增强。VEGF是血管生成因子，其可以促进血管内皮细胞的增殖，新生血管形成后对肿瘤细胞提供营养，因此VEGF其在肿瘤的发生和进展中有重要作用。

本实验提示Kindlin-2、整合素β1和VEGF高表达在肿瘤的发生中具有重要的促进作用;Kindlin-2、整合素β1和VEGF可能具有正向协同作用，三者具有内在联系。关于Kindlin-2与整合素β1的协同性与其结构域上相关位点结合有关。但是鲁杰〔8〕认为转化生长因子β能增强Kindlin蛋白的表达，此时细胞的分化加速，增殖作用增强，并且促进肿瘤细胞的转分化，使肿瘤细胞的恶性程度增加。也有学者通过研究Kindlin和血管的关系认为Kindlin和整合素β1的作用是通过血管内皮生长因子实现的〔2〕，即Kindlin-2与整合素β1均可以促进肿瘤血管的生成，二者通过VEGF作为桥梁作用，并且协同发挥肿瘤血管生成的作用，使肿瘤的血管生成加速，肿瘤体积增大，本实验显示的Kindlin-2和整合素β1蛋白与VEGF的相关性，也证实了此结论。但是Kindlin的具体调节机制尚待进一步证实。

1 Perera HD，Ma YQ，Yang J，et al.Membrane binding of the N-terminal ubiquitin-like domain of kindlin-2 is crucial for its regulation of integrin activation〔J〕.Structure，2011;19(11):1664-71.

2 Shen Z，Ye Y，Dong L，et al.Kindlin-2:a novel adhesion protein related to tumor invasion，lymph node metastasis，and patient outcome in gastric cancer〔J〕.Am J Surg，2012;203(2):222-9.

3 杜玉晓，杨成章，张小萌，等.整合素β和整合素连接激酶在喉鳞状细胞癌中的表达及意义〔J〕.临床耳鼻咽喉头颈外科杂志，2008;22(11):500-3.

4 刘爱东，庞久玲，刘士生.胃癌中基质金属蛋白酶-9和CD105表达关系的研究〔J〕.中国老年学杂志，2009;29(4):886-7.

5 李 智，李 剑，万相斌.E-cadherin和整合素α5β1的表达与结直肠癌生物学行为和预后的关系〔J〕.新医学，2011;42(4):227-30.

6 Liu J，Fukuda K，Xu Z，et al.Structural basis of phosphoinositide binding to kindlin-2 protein pleckstrin homology domain in regulating integrin activation〔J〕.J Biol Chem，2011;286(50):43334-42.

7 Qu H，Tu Y，Shi X，et al.Kindlin-2 regulates podocyte adhesion and fibronectin matrix deposition through interactions with phosphoinositides and integrins〔J〕.J Cell Sci，2011;124(Pt 6):879-91.

8 鲁 杰.喉鳞状细胞癌患者癌组织Kindlin-2与融合素β表达的关系〔J〕.中国老年学杂志，2012;32(12):2492-3.