趋化因子配体18在乳腺癌组织中的表达及意义

张晓申，高 进，郑文博，叶熹罡，唐 炜，陈 伦，潘凌霄，李 君

(广州医学院第一附属医院乳腺外科1、肝胆外科2，广东 广州 510120)

趋化因子配体18(Chemokine CC-motif ligand 18，CCL18)属CC族趋化因子，主要由M2型单核细胞分泌[1]。CCL18参与各种慢性炎症和纤维化疾病的发生发展，包括Gancher病和类风湿关节炎[2-3]。另外，在卵巢癌、胃癌组织中可观察到CCL18的表达[4-5]。然而，CCL18在恶性肿瘤进展中的作用还存在争议。CCL18参与卵巢癌的免疫抑制[5-6]，而在胃癌患者中，CCL18却起着局部抗肿瘤免疫调节的作用[4]。虽然M2型巨噬细胞大量存在于乳腺癌组织中，但由其产生的CCL18因子在乳腺癌进展中的作用仍不清楚。本研究通过检测乳腺癌组织、良性乳腺病组织和正常乳腺组织CCL18的表达情况，并分析其与乳腺癌患者的临床病理特征的关系，如肿瘤大小、分期、淋巴结转移及Ki67，探讨CCL18在乳腺癌组织的表达意义。

1 材料与方法

1.1 一般资料 选取广州医学院第一附属医院乳腺外科2009年12月至2012年6月，病理诊断为乳腺癌的患者80例(包括导管原位癌8例，浸润性导管癌72例)，年龄35～68岁，中位年龄41岁；选取病理诊断为良性乳腺病患者40例(包括：乳腺纤维腺瘤16例，导管内乳头状瘤7例，纤维囊性乳腺病17例)，年龄31～46岁，中位年龄38岁。再取20例良性乳腺病患者病灶周边的正常乳腺组织作为对照组。全部入组病例为女性。

1.2 主要试剂 免疫组化试剂盒EnVisionTMDetection Kit(DAKO公司，美国)、CCL18抗体为兔抗人多抗(Abcam公司，英国)，鼠抗人Ki67单抗免疫组人试剂盒(上海麦莎生物科技有限公司)。

1.3 免疫组化EnVision法检测 将制作好的病理切片于67℃烤箱烤片1 h后脱蜡至水。CCL18、Ki67切片采用微波(15 min)修复抗原。CCL18的抗体稀释浓度为1：200。后续步骤按EnVisionTMDetection Kit说明书进行。Ki67切片用SP法进行检测。

1.4 结果判定 CCL18判定标准：根据Chen等[7]的报道方法，以显微镜下棕黄色胞浆染色细胞为阳性反应，计数全视野内阳性细胞数。Ki67阳性细胞为胞核着色，取任意5个高倍镜视野，以阳性细胞所占细胞总数的平均值作为Ki67阳性率，参考Aleskandarany等[8]的研究将其分为3个等级：阳性细胞数＜10%为弱阳性(+)，10%～50%为阳性(++)，＞50%为强阳性(+++)。均由两位病理科医师独立阅片，当结果不同时，取平均值为最终结果。

1.5 统计学方法 应用SPSS16.0统计软件对数据进行统计分析，分类计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组中CCL18的表达 CCL18在对照组、良性乳腺病组均无表达，在乳腺癌组有57例为阳性表达，阳性率为71.25%；CCL18在乳腺癌组的表达明显升高，差异有统计学意义(χ2=72.108，P＜0.001)，见表1。

表1 三组中CCL18的表达(例)

2.2 乳腺癌组CCL18的表达及其与肿瘤大小、分期、淋巴结转移、Ki67的关系 CCL18的表达与肿瘤的大小、病理分期、淋巴结转移个数呈正相关，差异均有统计学意义(P＜0.05)，而与Ki67的表达相关性不显著，见表2。

表2 CCL18在乳腺癌组的表达与肿瘤大小、分期、淋巴结转移、Ki67的关系(例)

3 讨论

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，主要死亡原因是术后复发及转移，其发生发展是一个复杂的有多种生物学指标参与的过程。研究发现，乳腺癌的侵袭性与肿瘤微环境密切相关，而肿瘤微血管、炎症细胞、趋化因子是肿瘤微环境的重要组成部分[9-12]。趋化因子是由不同类型细胞分泌的能使细胞发生趋化运动的低分子能量细胞因子，具有广泛的生物学作用。除了在炎症过程中可特异性激活和募集白细胞外，还可通过改变肿瘤细胞生物学行为和激活肿瘤微环境中基质干细胞(如血管内皮细胞、肿瘤相关巨噬和成纤维细胞)，促进肿瘤的生长和转移[13-15]。CCL18基因定位于染色体17q11.2，不仅参与机体的免疫应答，还在多种肿瘤的发生中扮演着重要的角色。Chen等[7]研究发现，在乳腺癌组织中存在M2型单核细胞，位于肿瘤细胞浸润的前沿组织，且表达CCL18。而在本研究中，CCL18在乳腺癌组织中的表达比在良性乳腺疾病组织及正常乳腺组织中明显升高，且与肿瘤的大小、临床分期、淋巴结转移成正比，表明CCL18有可能成为一种新的乳腺癌生物学指标，并在一定程度上可以反映乳腺癌的侵袭性与转移，与Chen等[7]观察到的一致。

1983年Gerdes等[16]发现了Ki67与细胞增殖相关的核抗原。其表达随细胞周期的变化而变化，能反映肿瘤的增殖活性，是公认的细胞增殖活性标志物。作为一种与增殖细胞相关的核抗原，Ki67抗原与恶性肿瘤的发展与转移关系密切[17]，高表达时易出现乳腺癌淋巴结转移[18]，且与乳腺癌临床分期密切相关，其阳性率随临床分期的递增而增加明显[19]。Narita等[20]研究发现CCL18在乳腺癌患者血浆中的浓度与Ki67的表达呈正相关，但Chen等研究[7]发现，CCL18在乳腺癌组织中的表达与Ki67的表达相关性不显著。在本研究中，在乳腺癌组织CCL18的表达与Ki67的相关性不明显，这表明CCL18与乳腺癌细胞的侵袭力相关，而与乳腺癌细胞的增殖活性无关。

综上所述，CCL18可作为一种新的乳腺癌生物学指标，其高表达表明乳腺癌侵袭性强，容易发生转移，但与肿瘤细胞的增殖活性无关，对判断乳腺癌的预后有指导意义。

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