IL-18基因多态性与江西人群哮喘的关系

易金萍，陈小文，李建春，邓琼

(南昌大学第一附属医院检验科,江西 南昌 330006)

IL-18属IL-1家族成员之一，由单核细胞、巨噬细胞等多种细胞产生,最初命名为IFN-γ诱导因子,是一种具有多效性的细胞因子。在IL-12协同作用下,IL-18诱导高剂量Th1型细胞因子IFN-γ的产生。然而,IL-18也能诱导Th2细胞应答。在IL-2协同作用下,诱导NK细胞和T细胞产生IL-4、IL-13,诱导B细胞合成IgE。因此IL-18在过敏性疾病炎症反应中起着重要作用。据报道IL-18基因启动子区单核苷酸多态性(SNP)可影响IL-18的产生。本文就IL-18基因启动子区-607C/A、-137G/C基因多态性与江西人群哮喘的关系作一报道。

1 对象与方法

1.1 对象 哮喘组(A组)为2011年1月至2012年12月住院收入的146例支气管哮喘患者,男48例,女 98例,平均年龄(32.6±10.8)岁,均符合中华医学会呼吸病学分会哮喘学组2003年制定的支气管哮喘防治指南诊断标准。对照组(C组)为106例健康体检者,男36例,女70例,平均年龄(31.5±10.2)岁。各组一般资料具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 基因组DNA提取 采集受检者静脉血2ml,用EDTA-K2抗凝。采用DNA提取试剂盒按照说明书提取外周血基因组DNA,溶解于TE缓冲液,-20℃保存。

1.2.2 引物设计与合成 参照文献[1]采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)设计引物。

1.2.3 PCR扩增反应 -607(C/A)位点的PCR扩增步骤为:94℃预变性2min;94℃变性20s,64℃退火40s,72℃延伸40s,7个循环;94℃变性20s,57℃退火40s,72℃延伸40s,25个循环。-137(G/C)位点的PCR扩增步骤为:94℃预变性2min;94℃变性20s,68℃作用 1min,5个循环;94℃变性 20s,62℃退火20s,72℃延伸40s,25个循环。PCR扩增产物80 V恒压电泳30min,紫外灯下观察结果。

1.3 统计学处理 基因型和等位基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律后,各基因型及等位基因频率比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 PCR-SSP结果 -607C/A位点的特异性正向引物和通用反向引物扩增产物为196 bp,内参正向引物和通用反向引物扩增产物为301bp。-137G/C位点的特异性正向引物和通用反向引物扩增产物为261bp,内参正向引物和通用反向引物扩增产物为 446 bp(图 1)。

2.2 二组人群IL-18-607C/A、-137G/C基因多态性分析 经 χ2检验,各组IL-18-607C/A、-137G/C基因型及等位基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律。各组IL-18-607C/A、-137G/C基因型及等位基因频率分布见表1~3，各组之间均未见统计学差异。

图1 IL-18基因启动子-607C/A、-137G/C位点多态性电泳图

表1 各组IL-18-607C/A基因型和等位基因频率的比较

表2 各组IL-18-137G/C基因型和等位基因频率的比较

表3 各组IL-18-607C/A、-137G/C基因多态性单倍型比较

3 讨论

哮喘是一种以可逆性的支气管收缩、气道高反应性和炎症为特征的慢性呼吸道疾病。Th2细胞因子和炎性介质在气道炎症形成中起着关键作用。IL-18在哮喘发病机制中的作用依赖于不同的细胞因子环境。IL-18能和IL-12协同作用诱导IFN-γ的产生，刺激Th1型免疫应答而抑制IgE的合成[2，3]。许多研究也证实了IL-18参与哮喘发病机制。Tanaka等[4]报道IL-18浓度在急性哮喘患者中升高，治疗后IL-18浓度很快下降，并且和最大呼气流速成反比，表明IL-18在哮喘急性期可能反映疾病的严重程度。

IL-18基因启动子区SNP可影响IL-18的产生。-607C/A位于cAMP应答元件结合蛋白(CREB)的结合位点,-137G/C位于GATA3结合位点。-607 C变为A和-137 G变为C影响转录因子与IL-18基因启动子的结合能力,阻断IL-18的基因转录从而影响IL-18表达。近来有诸多IL-18基因SNP与哮喘关系的研究报道。IL-18基因启动子-607C/A、-137G/C SNPs与外国人群哮喘的相关性有较多的报道，与中国人群哮喘的相关性报道较少。Pawlik等[5]证实-137G等位基因和CG/GG基因型与波兰人群重度哮喘的发病有关。Niti等[6]报道携带-137CC基因型降低哮喘的发病风险有关。而Lachheb[7]认为IL-18-607A等位基因和突尼斯人特应性哮喘相关。Ma等[8]对 6 例-607C/A、-137G/C SNPs与哮喘的易感性的报道进行荟萃分析，发现携带-607AC/CC基因型与增加哮喘的发病风险有相关性。杨慧等[9]未检出-607C/A、-137G/C和过敏性哮喘有关,而认为-137C等位基因与合并过敏性鼻炎的哮喘有关。本研究发现-607C/A、-137G/C等位基因频率在对照组与哮喘组非常接近，未见统计学差异。上述报道结果的不一致性可能与人种差异、入选病例标准、病例数量、病例分层和统计处理等多种因素有关。

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[6]Niti B,Jagtar S,Surinder K J.Protective role of IL-18-137G/C polymorphism in a North Indian population with asthma:A pilot study[J].Cytokine,2013,61(1):188-193.

[7]Lachheb J,Chelbi H,Ammar J,et al.Promoter polymorphism of the IL-18 gene is associated with atopic asthma in Tunisian children[J].Int J Immunogenet,2007,35(1):63-68.

[8]Ma Y,Zhang B,Tang RK,et al.Interleukin-18 promoter polymorphism and asthma risk:a meta-analysis[J].Mol Biol Rep,2012,39(2):1371-1376.

[9]杨慧,刘宁,陈小文,等.IL-18启动子区基因多态性与江西汉族人群哮喘的关系[J].中国免疫学杂志[J].2009,25(6):524-527.