隔山消化学成分的研究

陈 艳，徐必学，曹佩雪，贺祝英，梁光义*

1贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室，贵阳550007;2贵阳中医学院第一附属医院，贵阳550002

隔山消为萝藦科牛皮消属植物耳叶牛皮消Cynanchum auriculatum Royle ex Wight的干燥块根。产于湖南、南京、江苏、浙江、江西、贵州、四川、云南等地。味甘，具有补肝肾，强筋骨，益精血，乌须发，消积止痛等功效。贵州的民间用来治疗肚胀，消化不良等症。对其生物活性多有报道，对其化合物研究多是对其甾体类化合物的研究，但对其它成分的研究报道较少［1］。本论文对隔山消化学成分进行了分离研究，从石油醚部分离得到7个化合物，分别为:胡萝卜苷(daucosterol)，β-香树脂醇乙酸酯(βamyrin acetate)，β-谷甾醇(β-sitosterol)。白首乌二苯酮(baishouwubenzophenone)，甘油-1-棕榈酸酯(glycerol 1-monopalmitate)，东莨菪内酯(scopoletin)，齐墩果酸(oleanolic acid)。

1 仪器和材料

核磁共振数据用INOVA-400 MHz型超导核磁共振仪测定，TMS作内标;质谱数据用HP-5973型质谱仪测定;柱色谱用硅胶(200～300目)、硅胶H和薄层色谱用硅胶GF254均为青岛海洋化工产品;Sephadex LH-20为Sigma产品。植物样品采自贵州贵阳，经贵州省、贵阳中医学院陈德媛教授鉴定为萝藦科牛皮消属植物耳叶牛皮消Cynanchum auriculatum Royle ex Wight的干燥块根。

2 提取与分离

隔山消干燥块根50 kg，粉碎后依次用体积分数为95%、75%乙醇渗漉，合并滤液，浓缩得浸膏。浸膏加适量的水分散，分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取并浓缩。得石油醚部分(161 g)，经硅胶柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯(10∶1 ～1∶1)，氯仿-甲醇(20∶1～1∶1)两个系统梯度洗脱，收集得到15份。其中第1份(2 g)经硅胶柱层析，石油醚洗脱，得化合物1(30 mg);第6份(约8 g)经硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯(30∶1～10∶1)梯度洗脱，得化合物2(400mg)。第8份(约8 g)经硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯(20∶1～10∶1)梯度洗脱，再经凝胶柱色谱得化合物3(20 mg)，第9份约2 g，反复经硅胶柱层析，凝胶柱层析得化合物4(30 mg)。第10份约10g，反复经硅胶柱色谱，氯仿-甲醇(20∶1 ～5∶1)梯度洗脱得化合物5(30 mg)。第12份约10 g经硅胶柱层析，氯仿-甲醇(10∶1～5∶2)梯度洗脱得化合物6(1 g)。氯仿部分经硅胶柱层析，氯仿-甲醇(20∶1-10∶1)梯度洗脱，每500 mL收集一瓶，其中第111～112瓶中分离得到化合物7(10 mg)

3 结构鉴定

化合物1 白色的针晶(Petrol/EtOAc)，mp.291～293℃，易溶于石油醚、氯仿;碘蒸气反应阳性，10%的硫酸乙醇液显紫红色。ESI-MSm/z:468(M+)，453，239，218(100)，203，189，175，161，135，119，85，71，57，43;1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ(ppm):0.80(3H，s，H-28)，0.87(12H，s，H-23，24，29，30)，0.97(3H，s，H-25)，1.00(3H，s，H-26)，1.06(3H，s，H-27)，2.05(3H，s，COCH3)，4.51(1H，m，H-3)，5.12(1H，m，H-12)。根据以上理化性质及波谱数据，对照文献［1］，鉴定化合物为 β-香树脂醇乙酸酯(β-amyrin acetate)。

化合物2 白色针晶(Petrol/EtOAc)，mp.291～293 ℃。ESI-MSm/z:414(M+)，396，381，329，303，273，255，231，199，185，173，159，145，133，119，107，95，81，69，55，43(100)。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ(ppm):0.678～ 1.01(6 × CH3)，3.49～3.56(1H，m，H-3)，5.35(1H，d，J=4.4 Hz，H-6)。与β-谷甾醇对照品经TLC检测，用三种不同的展开系统展开，其Rf值均一致，综合以上波普数据确定其结构为 β-谷甾醇(β-sitosterol)。

化合物3 白色粉末(CHCl3/MeOH)。EI-MS m/z:456(M+，1)，248(100)，203(60)，189(30)，147(20)，133(50)，119，105，95，81，69;1H NMR(C5D5N)δ(ppm):0.91(3H，s，CH3)，0.97(3H，s，CH3)，1.03(3H，s，CH3)，1.05(6H，s，× 2CH3)，1.27(3H，s，CH3)，1.30(3H，s，CH3)，3.47(1H，m，H-3)，5.52(1H，s，H-12)。以上波谱数据与文献［2］基本一致，且与对照品进行TLC检测，结果Rf值一致，确定其结构为齐墩果酸。

化合物4 白色粉末(CHCl3)，EI-MSm/z:299，257，239，134，112，98，57，43(100);1H NMR(CDCl3，400 MHz):0.88(3H，t，J=6.8 Hz，CH3)，1.25(24H，brs，×12 CH2)，1.62(2H，m，H-3)，2.35(2H，t，J=7.5 Hz，H-2)，3.60(1H，m，H-3)，3.70(1H，m，H-3)，3.94(1H，m，H-2)，4.15(1H，dd，J=11.6，6.0 Hz，H-1)，4.20(1H，dd，J=11.6，4.8 Hz，H-1)。综合解析波谱数据并与文献对照［3］，确定该化合物为甘油-1-棕榈酸酯(glycerol 1-monopalmitate)。

化合物5 淡黄色针晶(CHCl3)，mp 200～202℃。易溶于氯仿、丙酮等有机溶剂，紫外灯254 nm下有暗斑，FeCl3溶液显红棕色，碘反应阳性。IR(KBr)cm-1:3488，3374，2925，1662，1608，1499，1455，1427，1370，1353，1311，1159，1050，893，805。ESI-MSm/z:302(M+)，284，269，266，256，245，227，171，147，137，127，137，115，105，95，77，55，43(100);1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ(ppm):2.40(3H，s，10-CH3)，2.78(3H，s，9-CH3)，6.80(1H，d，J=8.8 Hz，H-5)，7.04(1H，d，J=8.8 Hz，H-4')，7.25(1H，d，J=9.2 Hz，H-3')，7.63(1H，d，J=8.8 Hz，H-4)。以上波谱数据与理化性质与文献4］基本一致，确定其结构为白首乌二苯酮(baishouwubenzophenone)。

化合物6 白色粉末(CHCl3/MeOH)。ESI-MS m/z:414(M+-Glc)，396(100)，382，288，275，255，213，163，145，109，95，69，57，43(100);1H NMR(400 MHz，C5D5N)δ(ppm):0.67 ～ 0.98(s，6 ×CH3)，3.92 ～3.97(1H，m，H-3)，4.05(1H，m，Glc-H-2)，4.30(2H，m，Glc-H-3，Glc-H-4)，4.41(1H，dd，J=12.0，5.2 Hz，Glc-H-6)，4.56(1H，dd，J=11.6，2.0 Hz，Glc-H-6)，5.05(1H，d，J=8.0 Hz，Glc-H-1)，5.34(1H，m，H-6)。与胡萝卜苷对照品Rf值一致，以上波谱数据与文献［5］基本一致，确定其为胡萝卜苷(daucosterol)。

化合物7 浅黄色针晶(Me2CO)，易溶于丙酮、氯仿;在365 nm下有很强的蓝色荧光，碘蒸气反应阳性，2%的磷钼酸乙醇液不显色。ESI-MSm/z:192(M+，100)，177，164，149，121，107，79，69，51;1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ(ppm):7.61(1H，d，J=9.6 Hz，H-4)，6.92(1H，s，H-5)，6.85(1H，s，H-8)，6.27(1H，d，J=9.6 Hz，H-3)，6.23(1H，s，7-OH)，3.96(3H，s，-OCH3)，13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ(ppm):161.5(C-2)，107.4(C-3)，143.4(C-4)，113.3(C-5)，144.0(C-6)，150.2(C-7)，103.1(C-8)，149.7(C-9)，111.5(C-10)，56.4(-OCH3)。以上理化性质和波谱数据与文献［6］一致，确定其结构为东莨菪内酯(scopoletin)。

4 讨论

本文主要对该植物进行了化学成分的研究，这是首次对贵州产的隔山消进行化学成分的研究。本研究为制定该植物的质量标准打下一定基础。

致谢:核磁和质谱数据分别由贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室张建新副研究员和王道平老师测定。

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