红芪胶囊的质量标准研究＊

徐胜龙 王 晋 李 静 郭国祯 李予蓉 第四军医大学军事预防医学院放射医学教研室（西安710032）

红芪胶囊是第四军医大学放射医学教研室新研制的纯中药制剂，由红景天、黄芪、沙棘、刺五加浸膏4味中药组方而成。属于创新中药6.1类，其功能生津养血，补肾健脾；主治各类放射损伤，增强放射治疗疗效和减轻放疗毒副反应。本实验系首次将以上四味药配伍制备胶囊剂用于主治放射损伤等的新药研究，并获得国家专利（ZL200910021359.6）。

方中黄芪、刺五加浸膏为臣药，沙棘为佐药，共同辅佐红景天的活血化淤消肿、解热退烧、滋补元气等功效。药效学研究结果表明［1］［2］，红芪胶囊可提高机体氧化和还原反应的比值，清除体内过剩的自由基，具有降低脂质过氧化物生成的作用和抗氧化酶活性的能力，从而减轻对生物细胞膜组织的损伤。并能抑制脂质过氧化链式反应中产生的脂质自由基的传递，且有明显的药物剂量依赖性。实验证实红芪胶囊具有高效低毒、多靶点和作用持久等功能特点。为了对该胶囊进行质量控制，稳定性考查以及保证临床用药安全，本实验通过对红芪胶囊中红景天及黄芪的有效成分用薄层色谱法进行定性鉴别；针对红景天采用高效液相色谱法测定胶囊中红景天苷的含量，进行定量分析；依据药典附录要求，对胶囊的崩解时限、微生物限度、重金属、砷盐限量等进行考察。以期为该胶囊剂可靠、准确、灵敏度高的质量控制标准提供了实验依据。

1 试药与仪器 1.1仪器 美国Waters高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC），2695分离单元，2996检测器，Empower色谱工作站，配自动进样器；色谱柱（UltimateTM C18柱，4.6×250mm，5μm，Welch Materials，Inc.）；R200D 电子分析天平（德国Satorius公司）；电子天平，MP 2002，上海恒平科学仪器有限公司；超声波清洗器，SK 250LHC，上海科导超声仪器有限公司。

1.2 试药 红芪胶囊（第四军医大学军事预防医学院提供，批号：20091205，20091215，20091225。该胶囊已申请中国发明专利，专利号200910021359.6已公示）。红景天苷（C14H20O7），批号110752—200511，购自中国药品生物制品检验所；甲醇（CH3OH），AR级，西安化学试剂厂；甲醇（CH3OH），HPLC 级，美国Heneywell公司；超纯水（H2O），美国Millipore纯水器制备）；硅胶G 板（青岛海洋化工厂）：CS 9000型薄层扫描仪（日本岛津）：自动喷雾显色器：定量点样毛细管（Drummond，USA）。

2 方法与结果 2.1 红芪胶囊的制备 将红景天进行除杂处理后，粉碎，采用70%乙醇回流提取，加醇量为8倍量，回流两次，每次回流2h，合并滤液，浓缩，减压干燥。黄芪和沙棘混合加8倍量水煎煮两遍，每次1.5h，过滤，合并滤液，浓缩，减压干燥，所得干膏与刺五加浸膏及上述红景天干膏，粉碎，加入适量的辅料，混合均匀，95%乙醇制粒，60℃以下烘干，过20目筛，装入0号胶囊，即得。

2.2 红芪胶囊的性状［2］本品为胶囊剂，3批样品观察，除去胶囊壳后显浅棕色至棕褐色；气微香、味微苦。

2.3 理化显色法鉴别红芪胶囊［2］取本品内容物2g，加乙醇20mL 使溶解，滤过。取滤液1mL，加3%碳酸钠溶液1mL 与新配制的重氮对硝基苯胺试液1～2滴，即显红色；另取滤液1mL，加5%亚硝酸钠溶液3～5滴与10%硝酸铝溶液3～5滴，稍放置，加氢氧化钠试液2mL，即显红棕色。

2.4 薄层色谱法定性鉴别 2.4.1红景天的薄层色谱法鉴别：取本品内容物约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，密塞，摇匀，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品备用。精密称取红景天苷对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（2010年版《中国药典（一部）》附录ⅥB）试验，吸取对照品溶液及供试品溶液各10μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－丙酮－水（6∶3∶1∶1）的下层溶液为展开剂［3］，展开，展距18cm，取出，晾干，置碘蒸气中熏2～3min。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点（见图1）。

图1 红芪胶囊中红景天的薄层色谱图

2.4.2 黄芪的薄层色谱鉴别：取本品内容物2g，加甲醇20mL，加热回流1h，滤过，滤液加于中性氧化铝柱（100～120目，5g，内径10～15mm）上，用40%甲醇100mL 洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30mL使溶解，用水饱和的正丁醇提取2 次，每次20mL，合并正丁醇液；用水洗涤2 次，每次20mL；弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5mL 使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（2010年版《中国药典（一部）》附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－水（13：7：2）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点，紫外光灯（365nm）下显相同的橙黄色荧光斑点。见图2。

图2 红芪胶囊中黄芪甲苷紫外薄层色谱图

2.5 红景天苷的含量测定［2，4］2.5.1色谱条件与系统适用性试验：色谱柱（UltimateTMC18柱，4.6×250mm，5μm）：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇－水（15︰85）；检测波长：275nm；流速：1.0mL／min；进样量：10μL。在上述色谱条件下红景天苷峰理论板数计算不低于2000。

2.5.2 对照品溶液的制备：精密称取红景天苷对照品25.00mg，置于5mL量瓶中，加甲醇至刻度，作为对照品母液。

2.5.3 供试品溶液与空白溶液的制备：取本品内容物约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，密塞，摇匀，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取过滤液，即得；依法制备空白溶液。

2.5.4 线性关系考察：分别精密量取对照平母液0.1、0.25、0.5、1.0、1.5mL，置于5mL量瓶中，加甲醇至刻度，进样。以红景天苷的峰面积（y）对红景天苷的浓度（x）做线性回归，得方程为y＝3138368x ＋10054，相关系数R2＝0.9987，说明红景天苷的峰面积在0.10～1.50mg／mL 浓度范围内呈良好的线性关系。

2.5.5 精密度试验：取浓度为0.25mg／mL 的对照品溶液重复进样6次，测定峰面积积分值。红景天苷的峰面积的相对标准差（Relative Standard Devia－tion，RSD）值为0.39%，表明仪器精密度良好。

2.5.6 稳定性试验：精密吸取浓度为0.25mg／mL 的对照品溶液及供试品溶液，分别于0h、2h、4h、6h、8h、12h进样测定，结果显示各时段峰面积平均值分别为779466.2、1952541红景天苷的峰面积的RSD值分别为0.24%、0.17%，结果表明红景天苷峰值在12h内稳定。

2.5.7 重现性试验：分别制备6份供试品，在上述色谱条件下测定，测定峰面积，红景天苷的峰面积的RSD 值为0.58%。

2.5.8 加样回收率试验：精密称取已测定供试品溶液（批号091215，0.16%）5份，分别添加一定量的红景天，按供试品溶液制备项下操作，在上述色谱条件进行测定，计算回收率，平均回收率为98.47%，RSD 值为0.71%。结果表明红景天苷回收率良好。结果见表1。

表1 供试品中红景天苷加样回收率测定结果

2.5.9样品测定：分别从3批红芪胶囊中取样，每个批次精密称定胶囊内容物约，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，密塞，摇匀，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得上样溶液。在上述色谱条件下进样测定。色谱图见图3。

每粒胶囊含红景天苷限度确定：三批样品平均含量为0.16%。依据日处方量，经小试、中试确定了千粒处方。据千粒处方得红芪胶囊主药红景天中红景天苷含量：400×0.16%× （1±10%）＝0.576～0.704（mg／粒），考虑到产品批量生产及稳定性诸因素的变化，拟规定红芪胶囊每粒含红景天苷计，不得少于0.50mg／粒。结果见表2。

表2 3批红芪胶囊样品测定结果

2.6 崩解时限检查 依据《中国药典2010年版一部》附录ⅠL 胶囊剂下有关规定，照崩解时限检查法（附录ⅫA）检查。对本实验的3批红芪胶囊样品进行了检查，结果平均崩解时限为36.3min，符合标准规定。

2.7 微生物限度 依据《中国药典2010年版一部》附录ⅠL 胶囊剂下有关规定，照微生物限度检查法（附录ⅩⅢC）检查。对本实验的3批红芪胶囊样品进行了检查，结果显示细菌含量平均为52个／g，霉菌含量平均＜10个／g，未检测出含有大肠杆菌。

图3 红芪胶囊中黄芪甲苷和红景天苷的HPLC色谱图

2.8 重金属、砷盐限量检查 《中国药典2010年版一部》附录ⅠL 胶囊剂下虽未有关于重金属、砷盐限量检查项，鉴于中药新药的质量标准要求，按《中国药典2010年版一部》重金属检查法（附录ⅨE）和砷盐检查法（附录ⅨF）对红芪胶囊样品进行检查。

2.8.1 重金属检查：重金属检查结果分析显示：3批红芪胶囊内容物重金属含量未超过百万分之十标准比色管，可见本品含量不超过百万分之十，根据中药新药对重金属的限度要求，在允许的范围之内。

2.8.2 砷盐限量检查：砷盐限量检查结果分析显示：3批样品内容物砷盐含量均未超过百万分之二，根据中药新药砷盐的限度要求，本品的砷盐含量测定结果不作为质量控制指标。

图4 3批红芪胶囊样品中砷盐检查结果

3 讨 论 随着地球环境污染的恶化，天然植物药物的生存受到一定程度的威胁，而本品所用药材的原产地、药材粗加工中不可避免地会摄入自然条件下的（如空气、水源、土壤）及后续工艺流程中对人体健康的有害成分。那么药材安全已经成为市场准入的关键，针对中药材及中药制剂进行重金属、砷盐的测定评价药品安全性具有十分重要的意义。

为了寻找疗效佳、毒性低、便于临床使用治疗放射损伤疾病的药物，我教研室根据中药理论、中药属性及在“君臣佐使”的组方原则下，根据中医辨证施治的理论，研制出一种治疗放射损伤疾病的辐射防护中药红芪胶囊。根据国家中药新药的质量标准要求，本品内容物重金属、砷盐限量检查，均符合国家药典规定之标准。药品安全是国家药典的强制性检测指标，实验室检查证明药材的原材料购置及后续加工艺流程等环节安全可靠。对该药进行了薄层色谱等是对药物成分进行鉴别，甄别药物有效成分是对药物基本药效的认证。所以对红芪胶囊中红景天及黄芪的薄层色谱进行了鉴别，结果为：薄层色谱斑点清晰，分离效果良好，确保了药效多靶点作用的特性。经过高效液相色谱及HPLC色谱条件测定，红景天胶囊保留时间适合，能与其它有效成分进行较好地分离。用上述HPLC 色谱条件测定红景天胶囊含量，在0.10～1.50mg／mL 浓度范围内线性关系良好，加样回收率高，可作为红芪胶囊中质量控制标准。

通过对本品各项指标的考察，确定的定性、定量方法，经过多批样品进行反复测定，为红芪胶囊进入临床试药前提供质控标准依据。本实验所建立的方法可靠，准确性好，符合国家药典及药品临床准入之规定，可用于该胶囊的质量控制。

［1］ 李予蓉，谭 娟，王 晋，等.红芪胶囊对60Co－γ射线辐射后大鼠脑、肺、血清SOD 活性和MDA 含量的影响［J］.陕西中医，2010，（31）：363－364.

［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典版一部［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：1.

［3］ 徐晓莹，李宝明，何丽一，等.红景天中红景甙的薄层光密度测定法研究［J］.药物分析杂志，1996，16（4）：272.

［4］ 吴少雄，柳陈坚，郭亚东，等.HPLC法测定复方红景天胶囊中红景天苷的含量［J］.云南中医中药杂志，2008，29（6）：52－53.