乳腺癌组织CK5／6HIF－1α的表达及临床意义

李 鹏 乔 森

（济宁医学院附属济宁市第一人民医院，山东 济宁272011）

乳腺癌是威胁女性健康的重要疾病，在美国，乳腺癌是女性中最常见的癌症，也是造成死亡的第二大癌症，发病率仅次于肺癌，已成为女性健康的第一杀手［1］。肿瘤一旦出现转移扩散意味着肿瘤病变已经发展到晚期，必须采用化疗等全身性治疗手段来解决，但化疗又有骨髓抑制、肝肾损伤、消化道反应等毒副作用［2］。

三阴性乳腺癌表达肌上皮细胞角蛋白（Cytokeratins，CK5／6）和CK17，CK5／6为该型乳腺癌的特征性标志物。肿瘤细胞中低氧诱导因子－1α（hypoxia－inducible factor－1α，HIF－1α）数量上升，使癌细胞内含氧量下降，细胞转而用低效的酵解方式来生成ATP，这使肿瘤生物量变大，更加缺氧，形成恶性循环。

本研究探讨CK5／6和HIF－1α在乳腺癌和正常乳腺组织中的表达特点，并结合临床病理资料分析其与临床特征的关系，可为揭示乳腺癌，尤其是三阴性乳腺癌的生物学特性，开展乳腺癌的独特治疗方法提供科学依据。

1 资料和方法

1.1 标本来源

乳腺癌标本来自我院2009年5月至2011年5月经病理活检确诊的48例三阴性乳腺癌患者及212例非三阴性乳腺癌患者（乳腺癌组），正常乳腺组织标本来自同期病理活检未发现癌变的50例正常人（正常组）。两组患者在年龄及月经状态方面无显著性差异。

1.2 方法

1.2.1 免疫组化染色 石蜡切片常规脱蜡、水化，抗原修复后封闭非特异性抗原，加入一抗4℃过夜，加生物素标记的二抗室温孵育30min。PBS冲洗切片，加链霉菌抗生物素－过氧化物酶溶液孵育20min。加入DAB溶液并在显微镜下观察，抗体标记的阳性部位准确后，终止显色。

1.2.2 免疫组化结果判读 0～2分为（－），3分为弱阳性（＋），4～5分为中度阳性（⧺），6～7分为强阳性（⧻）。

1.3 统计学方法

所有数据采用SPSS13.0统计学软件进行统计分析。

2 结果

2.1 两组中CK5／6、HIF－1α的表达

正常组及乳腺癌组的CK5／6的表达见图1，两组患者CK5／6的表达有显著差异（P＜0.05）。见表1。

三阴性乳腺癌及非三阴性乳腺癌患者CK5／6的表达见图1，三阴性乳腺癌及非三阴性乳腺癌患者CK5／6的表达有显著差异（P＜0.05）。见表2。

图1 两组中CK5／6的表达（SP×400）

表1 正常组与乳腺癌组CK5／6的表达比较（n，%）

表2 三阴性乳腺癌及非三阴性乳腺癌CK5／6的表达比较（n，%）

正常组及乳腺癌组HIF－1α的表达见图2，两组患者HIF－1α的表达有显著差异（P＜0.05）。见表3。

三阴性乳腺癌及非三阴性乳腺癌患者的HIF－1α的表达见图2，两组患者HIF－1α的表达有显著差异（P＜0.05）。见表4。

图2 3组细胞中HIF－1α的表达（SP×100）

表3 两组中HIF－1α的表达比较（n，%）

表4 三阴性及非三阴性乳腺癌HIF－1α的表达比较（n，%）

2.2 CK5／6、HIF－1α的表达与临床病理资料的关系

三阴性乳腺癌组中CK5／6、HIF－1α的表达与临床病理资料的相关性见表5。CK5／6在三阴性乳腺癌中的表达与肿瘤分期、肿瘤大小和淋巴结累及情况均无关；HIF－1α高表达与乳腺癌组织学分期、临床分期和淋巴结转移关系密切。

表5 三阴性乳腺癌组中CK5／6、HIF－1α表达与临床病理资料的关系

2.3 CK5／6、HIF－1α表达的相关性

采用Spearman秩相关检验检测三阴性乳腺癌组织中CK5／6、HIF－1α表达的相关性。48例三阴性乳腺癌中，CK5／6和HIF－1α表达呈正相关，见表6。

表6 三阴性乳腺癌组中CK5／6、HIF－1α表达的相关性

3 讨论

乳腺癌是多因素共同作用的结果［3－7］。本实验应用免疫组织化学方法，检测CK5／6、HIF－1α在正常乳腺组织及乳腺癌组织中的表达，并分析其表达与临床病理资料的相关性，为开发新的乳腺癌标志性指标进行基础研究。

当肿瘤细胞快速分化、增殖时，一些在正常组织中不表现的细胞组分大量出现，如作为细胞支架的角蛋白成为肿瘤标志［8］。由于角蛋白有多种类型［9］，所以也就形成了多种肿瘤标志［10］，这一类标志的分子组成往往是不含糖或脂的多肽链［11］，由于其体现了肿瘤共有的增殖特性，因而器官特异性差，是和多种肿瘤标志有关的广谱肿瘤标志，在鳞状细胞癌，如膀胱癌、肺癌阳性表达率较高［12］。

本组发现三阴性乳腺癌组中CK5／6的表达与肿瘤分期、肿瘤大小和淋巴结转移情况无关，表明CK5／6在三阴性乳腺癌中的表达状态是由其基底样表型所决定的，即CK5／6的表达反映了肿瘤的起源，而并不随肿瘤自身的进展而改变。

HIF是近几年来发现的一种细胞因子［13］。它作为一种核转录因子，在总体上调控细胞对氧的反应状况。研究发现HIF－1α在恶性肿瘤发生、发展不同阶段的表达呈上升趋势［14－16］，过度表达提示预后不良。本文发现，乳腺癌中HIF－1α阳性表达率显著高于正常乳腺组织，且三阴性乳腺癌中的阳性表达率高于非三阴性乳腺癌，揭示三阴性乳腺癌的肿瘤致病机制与缺氧诱导基因表达调节相关。

本组还发现三阴性乳腺癌组中HIF－1α的表达与肿瘤分期、肿瘤大小和淋巴结转移情况密切相关，表明HIF－1α的表达反映了肿瘤自身的进展，其阳性率越高预示着预后会越差。在48例三阴性乳腺癌中，CK5／6和HIF－1α表达呈正相关，预示HIF－1α可能间接或直接调解细胞角蛋白CK5／6表达而参与肿瘤的侵袭转移等过程。

综上所述，CK5／6和HIF－1α在乳腺癌的发生、发展中发挥举足轻重的作用。本文结论有助于进一步研究肿瘤细胞凋亡、侵袭转移的分子水平调控机制，可为乳腺癌临床诊断提供依据。

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