HPLC法测定五爪风中补骨脂素的含量

刘 元宋志钊

1.广西中医药研究院，广西 南宁 530022；2.广西中药质量标准研究重点实验室，广西 南宁 530022

HPLC法测定五爪风中补骨脂素的含量

刘 元1，2宋志钊1，2

1.广西中医药研究院，广西 南宁 530022；2.广西中药质量标准研究重点实验室，广西 南宁 530022

目的：建立五爪风中补骨脂素的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，以Appollo－C18色谱柱为分离柱，以乙腈－水（33：67）为流动相，246nm为检测波长，柱温为室温。结果：补骨脂素在4.5～72.0μg／mL范围内，峰面积与其浓度呈良好线性关系（r＝0.9997），平均回收率为100.3%，RSD为1.50%（n＝6）。结论：该方法简便、准确、重复性好，可作为该药材含量测定方法。

五爪风；补骨脂素；HPLC

瑶药五爪风系桑科榕属植物掌叶榕［Ficus simplicissima Lour.var.hirta（Vahl）Migo］的根，别名五指毛桃、五指牛奶、五爪龙、粗叶榕，为传统瑶药“七十二风”中的五爪风［1］，具有健脾补肺、利湿舒筋之功效，主要用于治疗脾虚浮肿、食少无力、肝炎、风湿痹痛、肺痨咳嗽等症，瑶医作为治疗慢性病和病后体弱的常用药材。目前瑶药五爪风尚未有法定标准，为了控制其质量，采用高效液相色谱法测定五爪风中补骨脂素的含量，结果令人满意。

1 仪器与试药

日本岛津LC－20ATVP高效液相色谱仪，SPD－20AVP紫外检测仪；威玛龙色谱工作站；Appollo－C18（4.6mm× 250mm，5μm）；HH－S恒温数显水浴锅，江苏金坛仪器厂。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余所用试剂均为分析纯。补骨脂素对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：110739－200310）。五爪风药材6批：20110509（金秀）、20110908（金秀）、20111204（武鸣）由本院黄云峰、宋志钊同志采集；20121220购自金秀县药材市场；20120424购自玉林药市；20120615购自南宁药材市场。以上样品均由本院中药所鉴定。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Appollo－C18色谱柱（4.6mm× 250mm，5mm）；检测波长为246nm；流动相：乙腈－水（33：67）；流速：1.0mL／min；柱温为室温。理论塔板数按补骨脂素峰计算不低于3000。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取补骨脂素对照品9.00mg，置50mL量瓶中用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成180μg／mL对照品溶液，备用。精密吸取上述对照品溶液1.2mL，置10mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得（21.6μg／mL）。

2.3 供试品溶液的制备 取本品药材粉末（过40目筛）1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足缺失的重量，摇匀，滤过，即得。

2.4 标准曲线及线性范围考察 精密称取补骨脂素对照品9.00mg，置50mL量瓶中用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成180μg／mL对照品溶液，备用。分别精密吸取180μg／mL补骨脂素对照品溶液0.25、0.5、0.75、1.0、2.0、4.0mL，分别置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样10μL，测定。以补骨脂素对照品进样浓度μg／ml为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标（Y）绘制标准曲线，得回归方程为：Y＝65979X＋69276，r＝0.9997。结果表明：补骨脂素进样浓度在4.5～72μg／mL之间与峰面积积分值线性关系。

2.5 精密度试验 分别吸取同一供试品溶液，进样6次，依次测定，即得。测得供试品RSD为1.40%。

2.6 重复性试验 取同一批号（20110908）样品，按供试品溶液制备方法制备6份，分别进样，测定。结果测得补骨脂素含量为0.372mg／g，RSD＝1.44%（n＝6）。表明该方法重复性良好。

2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液分别于0、2、4、6、8、10、12h进行测定。结果供试品中补骨脂素含量的RSD 为2.10%，表明供试品溶液在12h内保持稳定。

2.8 加样回收试验 取已测知含量（0.372mg／g，批号20110908）的供试品0.5g，精密称定，精密加入补骨脂素对照品溶液（180μg／mL）1.0mL，精密加入甲醇相25mL，按供试液制备项下的方法制备。结果补骨脂素平均回收率为100.3%，RSD为1.50%（n＝6），结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n＝6）

表2 6批五爪风药材中补骨脂素测量结果

2.9 样品测定 按供试液的制备及检测方法，测定6批五爪风药材中补骨脂素含量，补骨脂素含量（mg／g）在0.139～0.675之间，结果见表2。

3 讨论

3.1 五爪风的化学成分研究发现其含有补骨脂素［2］，对五爪风中补骨脂素的含量测定方法进行初步探索，经过预实验，多批五爪风药材中含有补骨脂素。因此五爪风中指标成分补骨脂素的含量测定方法，可作为控制本品质量标准的指标之一。

3.2 对补骨脂素对照品溶液进行紫外扫描，结果其在246nm处有最大吸收，故确定检测波长为246nm。参照《中国药典》2010年版一部里有关补骨脂素含量测定方法，以甲醇－水、乙腈－水为流动相，考察了多个比例，最后确定乙腈－水（33：67）的比例较为适合。

3.3 采用超声处理30min、加热回流1h、索氏提取2h进行提取方法考察，采用加热回流1h补骨脂素含量最高，故采用加热回流作为提取方法。采用甲醇、50%甲醇、流动相作提取溶剂进行考察，甲醇提取补骨脂素含量较高，故采用甲醇作为提取溶剂。以加热回流30、60、90min进行提取时间考察，加热回流30、60、90min，三者补骨脂素含量无明显差别，从节省时间考虑，故加热回流提取时间定为30min。

［1］戴斌，李钊东，丘翠嫦，等.“虎牛钻风”类传统瑶药的调查研究［J］.中国民族民间医药杂志，1998，31（2）：28－34.

［2］轧霁，张晓琦，王英，等.五指毛桃黄酮和香豆素类成分研究［J］.林产化学与工业，2008，28（6）：49－52.

Determination of Psoralen in Ficus hirta Vahl by HPLC

Yuan LIU1，2，Zhi－zhao Song1，2
1.Guangxi Institute of Chinese Medicine＆Pharmaceutical Scince，Nanning，Guangxi 530022，China；2.Guangxi Key Laboratory of traditional Chinese medicine quality standards，Nanning，Guangxi 530022，China

ObjectiveTo assay the content of Psoralen in Ficus hirta Vahl by HPLC.Method The Appollo－C18（4.6mm× 250mm，5μm）column was used，the mobile phase consisted of acetonitrile－water（33：67），the detection wave length was 246nm and the column temperature was room temperature.Resuilts Linearity of Quercitr was good at 4.5～72.0μg／mL（r＝0.9996）.The average recovery of buddleodide was100.3%with RSD less than 1.50%（n＝6）.Conclution The method is simple，accurate and repeatable，which can be applied in determination of Psoralen in Ficus hirta Vahl.

Ficus hirta Vahl；Psoralen；HPLC

R284.1

A

1007－8517（2013）16－0016－02

2013.06.14）

广西科技攻关项目（桂科攻11107010－3－4）。

刘元，女，高级实验师，从事中药药理学研究与新药开发。E－mail：liuyuan0821＠vip.163.com