慢性牙周炎患者基础治疗前后龈沟液上皮中性粒细胞活化肽78和RANTES的变化

陈 焱 许红苗 俞诚波 林 晡 尹向鹏

温州医学院附属温岭市医院口腔科 温岭 317500

慢性牙周炎患者基础治疗前后龈沟液上皮中性粒细胞活化肽78和RANTES的变化

陈 焱 许红苗 俞诚波 林 晡 尹向鹏

温州医学院附属温岭市医院口腔科 温岭 317500

牙周炎 趋化因子 龈沟液 上皮中性粒细胞活化肽78 正常T细胞表达和分泌因子慢性牙周炎是一种宿主对细菌反应和骨溶解性病损的慢性炎症性疾病[1]，发病机制十分复杂，至今尚未完全清楚。目前已知细胞因子及其网络在牙周炎的先天性或获得性免疫中起了一定作用[2]，其严重度与TNF-α相关[3]，其次还与T细胞免疫、吸烟等有关[4-5]。最近发现，趋化因子及其受体可能在此机制中起了重要的作用，介导了白细胞在牙周组织的浸润[6]。本研究通过观察慢性牙周炎患者龈沟液中趋化因子上皮中性粒细胞活化肽78（（epithelial neutro⁃phil activating protein-78，ENA-78））和正常T细胞表达和分泌因子（regulated upon activation normal T cell expressed and secreted factor，RANTES）的表达，探讨趋化因子在慢性牙周炎发病机制中的作用，为临床治疗提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 31例均来自本院2011年8月—

2012年2月之间就诊的慢性牙周炎患者，均符合诊断标准。其中男21例，女10例，年龄36～86岁，平均（61.1±11.2）岁。入选标准：全身情况良好；口内余牙数＞15个，至少半年内未接受任何治疗，不吸烟。X

线显示多个位点牙槽骨吸收超过根长的1/3，妇女未妊娠，过去3个月内无抗生素、非甾体类抗炎药及免疫抑制剂应用史。至少有1个牙周袋探针深度≥5mm作为研究牙。

1.2 方 法 所有患者均行牙周基础治疗，包括卫生宣教、龈上及龈下洁治、根面平整。分别于牙周基础治疗前、治疗4周后用滤纸条法收集龈沟液。标本采集方法：清水漱口，研究牙以棉卷隔湿，吹干牙龈并擦干牙面，将2mm×20mm无菌滤纸条轻轻插入龈沟或牙周袋内，遇阻力即止，30s后取出（如被血污染则弃除重取），10min后再次取样。将两条滤纸条作为1个标本，称重，按比重为1换算成体积，置于同一Eppendorf（EP）管中，-70℃冰箱保存，集中待检[7]。

1.3 ENA-78和RANTES蛋白检测 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测ENA-78和RANTES蛋白浓度[8]。人ENA-78（CXCL5）和RANTESELISA试剂盒购自美国R&D公司。取出标本和试剂盒平衡至室温，每个样本加入100μL PBS液，5000r/min离心5min，取上清液，检测方法按照试剂盒所附说明书操作。

1.4 统计学方法 应用SPSS16.0统计软件进行统计分析，计量数据以均数±标准差（±s）表示。采用配对t检验。

2 结 果

慢性牙周炎患者治疗后龈沟液中ENA-78和RANTES蛋白浓度显著低于治疗前（P＜0.01），见表1。

表1 ENA-78和RANTES蛋白浓度（±s）pg/mL

表1 ENA-78和RANTES蛋白浓度（±s）pg/mL

注：与治疗前比较，*P＜0.01

组 别n/例ENA-78 RANTES治疗前治疗后31 31 102.29±42.25 57.52±20.17* 62.81±13.95 46.16±12.59*

3 讨 论

牙周炎是牙周菌斑中的微生物所引起的牙周支持组织的慢性感染性疾病，是一个炎症发展的过程，导致牙周组织的炎症、牙周袋的形成、进行性附着物丧失和牙槽骨吸收。龈沟液中含有大量血清蛋白、炎症因子、微生物代谢产物和酶[9]。其中细胞内毒素对引起全身症状和局部炎症起了重要的作用，引起炎症因子TNF-α、INF-γ、IL1-β、IL-2、IL-6、IL-10、GMCSF和MIP1-α等升高，进一步加重牙周炎的炎症反应[10]。在唾液中发现，IL-1β、MMP-8、OPG和MIP-1α浓度急性期升高，恢复期下降，认为它们可以作为评价慢性牙周炎的严重程度[11]。在炎症因子等的作用下，外周血中的白细胞向牙周组织浸润，白细胞在宿主对龈下的微生物群反应中起着决定性的作用。

趋化因子分为4类：CXC类、CC类、CX3C类及C类。CXC类趋化因子包括IL-8、ENA-78等，对中性粒细胞有强烈的趋化和激活作用。目前认为IL-8参与了慢性牙周炎的炎症过程，与牙龈部的中性粒细胞集聚有关[12]。有研究发现，牙周炎患者血清IL-6和ENA-78的浓度显著性高于健康对照组，且吸烟组中ENA-78的浓度高于非吸烟组，认为它与牙周炎的炎症机制有关[13]。本研究发现，慢性牙周炎治疗前ENA-78蛋白浓度高于治疗后，提示它可能与慢性牙周炎的炎症相关。

RANTES是趋化性细胞因子CC亚族成员（CCL5），由T细胞、上皮细胞、成纤维细胞和血小板等分泌，具有趋化单核细胞、T淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞等多种白细胞的功能，这些性质使RANTES在免疫调节功能及自身免疫紊乱和炎性过程中有重要作用；RANTES还具有介导激活白细胞、影响炎症性疾病的转归及调节细胞的生长和分化作用。RANTES有选择地吸引和活化巨嗜细胞及淋巴细胞的趋化作用。慢性牙周炎组龈沟液中RANTES浓度高于健康人，牙周袋探针深度＜3mm组其蛋白浓度高于＞6mm组，显示出RANTES参与了牙周炎的致病和进展[14]。相似研究也发现，慢性牙周炎组龈沟液中RANTES浓度高于健康人，但在伴有吸烟的患者中其浓度低于不伴有吸烟组，认为吸烟可能抑制了机体免疫，易致牙周炎的发生[15]。本研究发现，慢性牙周炎治疗前RANTES蛋白浓度高于恢复期，提示它也可能与慢性牙周炎的炎症有一定的相关性。

牙周基础治疗作为治疗牙周炎的重要手段，主要目的是通过牙周常规治疗控制和去除牙周炎症和咬合性致病因素，获得良好的菌斑控制，使绝大多数患者炎症情况得到改善。本研究发现慢性牙周炎经治疗后，龈沟液中的趋化因子水平也相应下降，提示其在评价病情的严重度中有一定作用。

［1］Deo V，Bhongade ML.Pathogenesis of periodontitis:role of cytokines in host response［J］.Dent Today，2010，29（9）: 60-62，64-66.

［2］Preshaw PM，Taylor JJ.How has research into cytokine inter⁃actions and their role in driving immune responses impacted our understanding of periodontitis［J］.J Clin Periodontol，2011，38（Suppl11）:60-84.

［3］Gurol C，Kazazoglu E，Dabakoglu B，et al.A comparative study of the role of cytokine polymorphisms interleukin-10 and tumor necrosis factor alpha in susceptibility to implant failure and chronic periodontitis［J］.Int JOral Maxillofac Implants，2011，26（5）:955-960.

［4］Marcal JR，Samuel RO，Fernandes D，et al.T-helper cell type 17/regulatory T-cell immunoregulatory balance in hu⁃man radicular cysts and periapicalgranulomas［J］.JEndod，2010，36（6）:995-999.

［5］Tymkiw KD，Thunell DH，Johnson GK，et al.Influence of smoking on gingival crevicular fluid cytokines in severe chronic periodontitis［J］.JClin Periodontol，2011，38（3）: 219-228.

［6］Severino VO，Napimoga MH，de Lima Pereira SA.Expression of IL-6，IL-10，IL-17 and IL-8 in the peri-implantcrevicu⁃lar fluid of patientswith peri-implantitis［J］.Arch Oral Biol，2011，56（8）:823-828.

［7］陈建洪，吴坚，李亚静，等.吸烟和非吸烟慢性牙周炎患者基础治疗后龈沟液肝细胞生长因子水平的变化［J］.中华口腔医学研究杂志（电子版）,2010，4（1）:50-54.

［8］周艳，徐艳.慢性牙周炎病人基础治疗前后Th17型细胞因子及RORC的表达变化［J］.牙体牙髓牙周病学杂志，2012，22（2）：103-106.

［9］Guentsch A，Kramesberger M，Sroka A，etal.Comparison of gingival crevicular fluid samplingmethods in patients with severe chronic periodontitis［J］.JPeriodontol，2011，82（7）: 1051-1060.

［10］Shaddox LM，Wiedey J，Calderon NL，etal.Local inflamma⁃tory markers and systemic endotoxin in aggressive peri⁃odontitis［J］.JDentRes，2011，90（9）:1140-1144.

［11］Sexton WM，Lin Y，Kryscio RJ，et al.Salivary biomarkers of periodontal disease in response to treatment［J］.JClin Periodontol，2011，38（5）:434-441.

［12］Scarel-Caminaga RM，Kim YJ，Viana AC，et al.Haplo⁃types in the interleukin 8 gene and their association with chronicperiodontitissusceptibility［J］.Biochem Genet，2011，49（5-6）:292-302.

［13］Lappin DF，Murad M，Sherrabeh S,et al.Increased plasma levels epithelial cell-derived neutrophil-activating peptide 78/CXCL5 in periodontitis patients undergoing supportive therapy［J］.JClin Periodontol，2011,38（10）:887-893.

［14］Gamonal J，Bascones A，Jorge O，et al.Chemokine RAN⁃TES in gingival crevicular fluid of adult patientswith peri⁃odontitis［J］.JClin Periodontol，2000，27（9）:675-681.

［15］Tymkiw KD，Thunell DH，Johnson GK，et al.Influence of smoking on gingival crevicular fluid cytokines in severe chronic periodontitis［J］.JClin Periodontol，2011，38（3）: 219-228.

2012-06-07