CK19mRNA、CEA和CA199对结直肠癌预后判断的价值及在随诊中的意义

高继绪

【摘 要】目的：探讨CK19mRNA、CEA和CA199对结直肠癌预后判断的价值及在随诊中的意义。方法：收集76例结直肠癌患者、35例结直肠良性疾病患者和20例健康献血员的外周血细胞，分别抽提RNA，逆转录聚合酶链反应法测定CK19mRNA水平；收集上述病例外周血血浆，电化学发光法检测CEA，CA199含量。 数据分别以t检验和x2检验进行统计学处理。结果：三联检测的灵敏度、约登指数最高。结论：结直肠癌患者外周血CK19mRNA、CEA、CA199联合检测可起到互补作用，明显提高检测的灵敏度和约登指数，能较好的提高大肠癌患者的阳性率，帮助临床大夫选择合理的治疗方案，综合判断预后，在随诊中及早发现复发。

【关键词】结直肠癌；癌胚抗原；糖类抗原CA199；预后

大肠癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一，近年来其发病率和死亡率均呈逐年上升趋势， 且发病年龄明显提前[1]。因此提高结直肠癌的复发诊断和预后判断水平是肿瘤临床工作的当务之急。CK19是一种细胞角蛋白，常用作上皮细胞恶性肿瘤来源的标志物，CEA和CA199常用作消化道肿瘤的标志物。本文收集结直肠癌患者、结直肠良性疾病患者及健康献血员外周血，检测CK19mRNA和CEA、CA199水平，探讨CK19mRNA、CEA和CA199对结直肠癌预后判断的价值及在随诊中的意义。

1材料与方法

1.1临床资料：选取2008年6月-2010年6月，术后病理检查确诊的大肠癌患者76例， 年龄在35-78 岁， 中位年龄54.3岁，其中，男45例，女31例。 手术分期按Dukes分期标准， 其中A期16 例， B 期22例， C 期38例， 管状腺癌40例， 乳头状腺癌31例，其他5例。选取20例健康献血员和35例结直肠良性疾病患者为对照，其中健康献血员平均年龄37.6岁，男12例，女8例；结直肠良性疾病患者平均年龄43.2岁，男19例，女16例。

1.2研究方法

1.2.1 RT-PCR法测定外周血CK19mRNA表达水平 取空腹外周血5ml肝素抗凝，淋巴细胞分离液分离单个核细胞（PBMC）后，按异硫氰酸胍（GIT）一步法提取总RNA。取2?g RNA逆转录为cDNA。并以β-actin作内参对照与CK19分别进行PCR：10μl-20μl RT反应物加25mmol/l MgCl2 8μl ，4xdNTP 1μl ，上游引物P1 1μl ，下游引物P2 1μl， 10xPCR缓冲液10μl ，总反应体积100μl .循环条件为94℃1min，58℃1min，72℃1min，循环35次，末次延长7min[2]，取PCR扩增产物10μl行2%琼脂糖凝胶电泳，CK19mRNA长度为308bp。

1.2.2外周血肿瘤标记物CEA及CA199的检测 取外周血2ml分离血清。采用电化学发光法，检测血清CEA及CA199水平，试剂盒推荐正常值如下：CEA<5.0ng/ml， CA199<30U/ml。本试验规定高于正常值为阳性。

1.2.3统计学方法 采用spss13.0 统计软件包进行统计分析，组间均数用X±s 表示、比较用t 检验，计数资料采用x2检验，以P <0.05 ，P<0.01为差异有统计学意义。

2 结果

结直肠癌患者治疗不同时间段CK19mRNA、CEA、CA199检测结果如表1：各阶段CK19mRNA、CEA、CA199三指标联检阳性率比单一指标阳性率有显著性差异（P<0.05）， 综合治疗后结直肠患者阳性率与术前有显著性差异（P<0.05）；与术后一年复查无显著性差异（P>0.05）。结直肠癌患者术前、综合治疗后、术后一年的各指标阳性率与对照组有显著性差异（P<0.05）。

3 讨论

CK19是分布于上皮细胞的中间纤维丝，具有严格的组织分布，非上皮来源组织如正常血液不表达。在目前已经鉴定出的二十多种角蛋白中，以CK8、CK18以及CK19在上皮细胞最有意义，常作为上皮细胞恶性肿瘤的有效标志物。Saintigny等[3]以CK19CK7及MUC-1mRNA为指标用实时定量RT-PCR侦测大肠癌患者外周血认为CK19mRNA在病患组有较高的表达，在健康志愿者外周血中低表达，并认为CK19mRNA与大肠癌的发生有关。肿瘤标志物CEA、CA199目前均是在结直肠癌临床诊治中常用的标志物之一， 二者均为糖蛋白，且均非结直肠癌的特异性肿瘤标记物，二者在结直肠癌患者中均可升高，在结直肠癌的临床诊断中起辅助作用[4]。研究显示，肿瘤标记物的联合检测可提高结直肠癌的检出率[5]。

综上所述，CK19mRNA、CEA和CA199三项肿瘤标志物的联合检测较单一检测对结直肠癌的预后诊断和随诊价值更高，可使各项肿瘤标志物的不同优势互补，提高诊断的灵敏度，对结直肠癌的术后或化疗后随诊动态监控及判断预后有很好的临床意义。

参考文献：

[1] 李连弟， 鲁凤珠， 张思维， 等. 中国恶性肿瘤死亡率20年变化趋势和近期预测分析中华肿瘤杂志， 1997， 19： 3-9.

[2] 郑树， 蔡善荣. 中国大肠癌的病因学及人群防治研究. 中华肿瘤杂志， 2004， 26： 1-3.

[3] Barak V ，Goike H ，Panaretakis KW，et al. Clinical utility of cytoketatins as tumor markers[J]. Clin Biochem， 2004，37（7）：529.

[4] Koprowski H， Brennan S， Steplewski Z， et al. Special antigen in serum of patients with colon cancer[J]. scince， 1981， 212：53-55.

[5] 袁庶強，周志伟，万德森，等.癌胚抗原半衰期在术前癌胚抗原升高的结直肠癌患者中判断预后的作用[J].癌症，2008，27（6）：612-617.