参七消痞颗粒对慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜损伤的改善作用研究

李俊青 李纯 刘希 王晶 孙建宁

（北京中医药大学，北京 100102）

慢性萎缩性胃炎（CAG）在临床上多见，发病率高。早在19世纪中期人们已经对慢性萎缩性胃炎有了一定的认识，直到20世纪80年代初幽门螺旋杆菌的发现，CAG的致病机制和治疗方法才有了质的飞跃[1-2]，但到目前为止仍无法达到满意的效果。近年来中医药对CAG的基础研究及临床治疗探索取得了明显的成果[3-4]。本实验采用N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）负荷多因素造成大鼠CAG模型，探讨中药复方参七消痞颗粒（SQ）对慢性萎缩性胃炎模型大鼠胃黏膜病变的改善作用。

1 实验材料

1.1 实验动物 SPF级Wistar大鼠220只，雌雄各半，体重160～180g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK（京）2006-0009。

1.2 主要试剂 MNNG为日本TCI公司产品，购于北京化学试剂公司；盐酸雷尼替丁胶囊，中诺药业（石家庄）有限公司生产，批号：100902256；无水乙醇，购于北京化工厂，批号：20100901；中药复方参七消痞颗粒，亚宝北中大（北京）制药有限公司生产，复方组成：党参、百合、丹参、白花蛇舌草、香橼、乌药、三七、半枝莲、莪术（1∶3∶2∶3∶1∶1∶0.3∶2∶0.5）。

2 实验方法

2.1 动物模型的建立 以化学致癌剂MNNG作为工具药造模，模拟人不当摄入硝酸盐在胃内转化为亚硝酸胺等致癌物质，作用于胃黏膜，通过损伤DNA诱发脂质过氧化或导致脂质过氧化，引起胃黏膜细胞突变和破坏，造成胃黏膜萎缩病变，甚至癌变；同时辅助灌胃雷尼替丁溶液，抑制大鼠胃酸分泌，加上每周1次高浓度酒精刺激及饥饱失常，共同作用于大鼠，造成大鼠慢性萎缩性胃炎模型。具体造模方法参考岳双冰等[5]的方法并加以改进。大鼠按体重随机分为正常对照组和CAG模型组，模型组大鼠每日饮用120μg/mL MNNG溶液，每日灌胃雷尼替丁溶液0.03g/kg大鼠体重，每周禁食1次，每次16h，禁食第2天灌胃体积分数50%的乙醇1mL/只，当天不再灌胃雷尼替丁溶液，连续14周。MNNG用去离子水配成1g/L的储备液，于4℃冰箱避光保存，用前以自来水稀释为120μg/mL浓度的溶液，装入用黑胶布包裹的避光饮水瓶内供模型组大鼠自由饮用，每日更换。

2.2 动物分组及给药干预 第15周开始模型组动物停止造模，随机分为 CAG模型组、摩罗丹组（MLD）、叶酸组（YS）和参七消痞颗粒低（2g/kg）、中（4g/kg）、高（8g/kg）剂量组。正常对照组和CAG模型组每日灌胃蒸馏水，其他各组灌胃给予相应药物1mL/100g大鼠体重，给药8周。第22周即大鼠给药8周后取材。

2.3 取材及指标观测 第22周所有大鼠禁食16h，不禁水，10%水合氯醛麻醉，打开腹腔，腹主动脉取血，分离血浆、血清，-80℃保存，放免法检测血浆胆囊收缩素（CCK）和血清表皮生长因子（EGF）；取胃，沿胃大弯剪开，除去胃内容物，生理盐水冲洗干净，展开照相，大体观察；胃窦部横向条状取材，用10%中性福尔马林液固定，HE染色做病理检查。

2.4 统计学方法 用SPSS11.5统计软件进行分析。数据均采用（）表示，多组间比较采用单因素方差分析（ANOVA）。

3 实验结果

3.1 大鼠胃黏膜大体观察 与正常对照组相比，CAG模型组大鼠胃内容物恶臭，胃黏膜苍白，胃壁较薄，胃黏膜皱襞走向紊乱，部分区域皱襞变浅或消失，部分见出血点等。SQ各给药组大鼠均有不同程度的改善，胃壁较厚，弹性较好，胃黏膜皱襞较多。见图1。

3.2 大鼠胃组织病理结果 大鼠HE切片镜下观察：正常对照组大鼠胃黏膜正常，偶见少量炎性细胞，属于正常现象；CAG模型组大鼠胃黏膜见不同程度的萎缩，固有层腺体减少，排列不规则，间隙较大，肠上皮化生，少数见异型增生，有炎性细胞浸润。各给药组与CAG模型组相比，病理结果均有不同程度的改善。见图2。

3.3 大鼠胃黏膜厚度/黏膜肌层厚度值 大鼠病理组织镜下观察发现，MNNG致大鼠CAG病理改变主要出现在胃窦区的褶皱处，且不同部位的L1/L2值差异悬殊，故在统计大鼠胃黏膜厚度/黏膜肌层厚度值时应挑选有胃窦区褶皱的HE切片的比值。结果参七消痞颗粒3个剂量均能不同程度地改善胃萎缩病变，提高大鼠胃窦区褶皱处的胃黏膜厚度/黏膜肌层厚度（P＜0.05，P＜0.01）。见表 1。

3.4 大鼠CCK、EGF水平 胆囊收缩素能促进胆囊收缩，在调节协调胃肠活动方面起多种作用，促进胰腺腺泡分泌各种消化酶。CAG模型组大鼠CCK明显下降，提示其胃肠活动功能下降明显；参七消痞颗粒低、中剂量能显著提高模型大鼠CCK的含量，与CAG模型组比较有显著性差异（P＜0.01）。消化表皮生长因子是一种多功能的生长因子，在体内体外都对多种组织细胞有强烈的促分裂作用，同时能通过多种机制对胃黏膜起到保护作用，如抑制胃酸分泌，增强胃黏膜黏液的分泌，增加胃黏膜血流量等。CAG模型组与正常对照组相比，血清EGF水平显著偏低（P＜0.01），而参七消痞颗粒低、中剂量能显著提高大鼠血清EGF水平，与CAG模型组相比具有显著性差异（P＜0.01）。见表 2。

4 讨论

本实验建立了MNNG负荷多因素致大鼠慢性萎缩性胃炎模型，主要病理改变出现在胃窦区褶皱处，大鼠胃黏膜萎缩，固有层腺体减少，排列不规则，间隙较大，有肠上皮化生和异型增生，动物成模率高，成模时间较短，适合用于实验研究。

表1 各组大鼠胃黏膜、黏膜肌层厚度与比值（）

表1 各组大鼠胃黏膜、黏膜肌层厚度与比值（）

注：与正常对照组比较，△△P＜0.01；与 CAG 模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

表2 各组大鼠 CCK、EGF水平（）

表2 各组大鼠 CCK、EGF水平（）

注：与正常对照组比较，△△P＜0.01；与CAG模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

慢性萎缩性胃炎临床诊断以黏膜固有腺体萎缩甚至消失，黏膜肌层常见增厚为主要病理改变。有文献报道采用胃黏膜厚度/黏膜肌层厚度值作为评价指标[6-7]。本实验观察了大鼠胃窦区褶皱处的胃黏膜厚度/黏膜肌层厚度值（L1/L2），观测位置固定，病理改变明显，测量数值稳定可靠，结果客观。

中药复方参七消痞颗粒是中国工程院院士董建华教授的经验方，为东方医院院内制剂，临床用于治疗慢性萎缩性胃炎，效果明显。

实验结果显示大鼠14周造成胃萎缩胃炎模型，停止造模8周，CAG模型组大鼠胃萎缩病变无明显恢复。停止造模给药8周，参七消痞颗粒低、中、高三个剂量均可不同程度地改善胃萎缩病变，提高大鼠胃窦区褶皱处的胃黏膜厚度/黏膜肌层厚度值，显示SQ有良好的治疗萎缩性胃炎的作用。进一步用放免法检测大鼠血浆中的CCK和血清EGF，发现CAG模型组大鼠CCK和EGF下降明显，而参七消痞颗粒能显著升高模型大鼠血液中的CCK和EGF水平，提示参七消痞颗粒对慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜的保护改善作用，可能通过提高胃肠活动功能，增强胃黏膜黏液的分泌，增加胃黏膜血流量，增强胃黏膜保护作用。

[1]Pentti Sipponen.Chronic Gastritis in Former Times and Now.Helicobacter，2007（Suppl.2）：16

[2]Melanie N.Weck，Hermann Brenner.Association of Helicobacter pylori infection with chronic atrophic gastritis：Meta-analyses according to type of disease definition.Int.J.Cancer，2008，123：874

[3]杨维佳，俞佳.慢性萎缩性胃炎中医辨证分型及其治疗近况.江苏中医药，2009，40（5）：73

[4]吴晓燕，朱方石，王伟.中医药治疗慢性萎缩性胃炎临床研究进展.江苏中医药，2009，41（6）：81

[5]岳双冰，张仲海，马经野，等.大鼠慢性萎缩性胃炎癌前病变血瘀积证模型的研制.中国中西医结合消化杂志，2009，17（2）：123

[6]徐妙，姒健敏，王海云.云母对大鼠慢性萎缩性胃炎的预防作用及机制研究.中国病理生理杂志，2007，23（4）：749

[7]袁庆丰，姒健敏，周雯，等.表皮生长因子对萎缩性胃炎大鼠胃黏膜上皮增生的影响.中国临床药理学与治疗学，2009，14（2）：136