急性脑梗死患者血清脂联素、过氧化物酶体增殖物活化受体γ、氧化型低密度脂蛋白及单核细胞CD36、CD54表达的关系

周礼圆，蓝 娇，李燕华，庞 刚，李吕力，林慧琼

（1.广西壮族自治区人民医院神经内科，广西南宁 530021；2.广西壮族自治区人民医院科研实验中心，广西南宁 530021；3.广西壮族自治区人民医院神经外科，广西南宁 530021）

急性脑梗死患者血清脂联素、过氧化物酶体增殖物活化受体γ、氧化型低密度脂蛋白及单核细胞
CD36、CD54表达的关系

周礼圆1，蓝 娇2，李燕华1，庞 刚3，李吕力1，林慧琼1

（1.广西壮族自治区人民医院神经内科，广西南宁 530021；2.广西壮族自治区人民医院科研实验中心，广西南宁 530021；3.广西壮族自治区人民医院神经外科，广西南宁 530021）

目的 探讨急性脑梗死（acute cerebral infarction，ACI）患者血清脂联素、过氧化物酶体增殖物活化受体γ（peroxisome proliferator-activated receptor gamma，PPARγ）、氧化型低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein，ox-LDL）及单核细胞CD36、CD54表达的特点，并分析其相关性。方法选择ACI患者（ACI组）31例、健康体检者（对照组）27例，检测血脂，ELISA方法测定血清脂联素、PPARγ、ox-LDL浓度，流式细胞技术检测外周静脉血单核细胞CD36、CD54表达。结果ACI组血清脂联素、PPARγ、HDL-C低于对照组，ox-LDL、CD36、CD54、TG、LDL-C高于对照组（均P＜0.01）。相关分析显示，血清脂联素水平与PPARγ、ox-LDL呈正相关（r=0.939、0.934，P＜0.01），PPARγ与ox-LDL呈正相关（r=0.945，P＜0.01），CD36与CD54呈正相关（r=0.760，P＜0.01）。结论ACI患者血清脂联素、PPARγ降低，ox-LDL、CD36、CD54升高，血脂异常，其相互网络调控是相互促进、相互制约的，在ACI发生发展中起重要作用。

脑梗塞；脂联素；过氧化物酶体增殖物激活受体

动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是脑梗死的主要病因之一，脂联素是与AS发生关系最为密切的因子之一，是AS发生的独立危险因素。过氧化物酶体增殖物活化受体γ（peroxisome proliferatoractivated receptor gamma，PPARγ）和AS之间的联系是多方面的，可能是通过对内皮功能的保护、对脂肪细胞分化和脂质代谢的影响、抑制平滑肌细胞的增殖和迁移、对炎性趋化因子的作用以及稳定斑块的功能来发挥作用的。CD36是识别、吞噬氧化型低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein，ox-LDL），使巨噬细胞泡沫化，AS形成的主要清道夫受体。为探讨急性脑梗死（acute cerebral infarction，ACI）患者血清脂联素、PPARγ、ox-LDL及单核细胞CD36、CD54表达特点及其相关性，我们进行了相关研究。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选择2010年6月—2011年6月在我院神经内科住院的ACI患者31例，男性18例，女性13例，年龄43～75岁，平均（61.90±9.72）岁。患者均为首次发病，在14d内就诊，均符合1995年全国第四届脑血管病会议制定的各类脑血管病诊断标准［1］，并经头颅CT或MRI检查证实。合并糖尿病10例，高血压病21例，冠心病5例。另选27例健康体检者作为对照组，男性20例，女性7例，年龄40～60岁，平均（50.59±5.90）岁，无糖尿病、高血压病、冠心病病史。2组均排除急性或慢性感染、肿瘤、肾衰竭等其他慢性疾病患者以及由一些少见原因如药物、代谢疾病、感染、血管病变、烟雾病、静脉血栓等引起的脑梗死。

1.2 检测方法：抽取受试者清晨空腹静脉血5mL，分离血清保存于-80℃冰箱保存。采用酶联免疫吸附法检测脂联素、PPARγ、ox-LDL，试剂盒由美国R＆D公司提供；全自动生化分析仪检测血脂。

1.3 血液标本制备：ACI组患者入院后次日取晨空腹血2mL（肝素抗凝），取100μL全血分别加入CD36、CD54抗体20μL室温避光孵育15min，加入1×溶血素1mL（美国BD公司提供），室温避光孵育8min，离心5min（300g/min），弃上清，以磷酸缓冲液2mL漂洗，同速离心5min，弃去上清后加入300μL磷酸缓冲液上机检测。免疫试剂异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate，FITC）标记的单克隆抗体CD36-FITC、CD54-FITC及阴性对照羊抗鼠IgG-FITC均由美国BD公司提供。

1.4 流式细胞术检测：使用美国BD公司生产的FACSCzlibur型流式细胞仪，上机后收集1×104个细胞，以前向角及侧向角圈出单核细胞，按CD36+和CD54+细胞占单核细胞比例表示外周血CD36和CD54的表达水平。用美国BD公司软件Cell Quest Plot分析点图。

2 结果

2.1 2组检测指标比较：ACI组脂联素、PPARγ均低于对照组，ox-LDL及单核细胞CD36、CD54表达均高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。ACI组高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）低于对照组，三酰甘油（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）均高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），2组总胆固醇（total cholesterol，TC）比较差异无统计学意义。见表1，2。

表1 2组检测指标比较Table 1 Com parison of indexes between ACI group and control group

表2 2组血脂检测指标比较Table 2 Comparison of lipids between ACI group and control group（¯x±s，mmol/L）

2.2 相关性分析：ACI患者的血清脂联素水平与PPARγ、ox-LDL呈正相关（r=0.939、0.934，P＜0.01），PPARγ与ox-LDL呈正相关（r=0.945，P＜0.01），CD36与CD54呈正相关（r=0.760，P＜0.01）。

3 讨论

脑梗死是一种多因素疾病，AS是脑梗死的重要病理基础。脂联素是脂肪细胞释放的最丰富的脂肪因子，对细胞外刺激和代谢改变作出反应。脂联素通过抑制生长因子介导的血管平滑肌细胞的增殖和迁移、抑制血管内皮细胞的炎症反应、抑制黏附分子在内皮细胞的表达、减少泡沫细胞的形成等多种途径而达到抗AS的作用。有研究［2］发现，脑梗死患者血清脂联素水平明显下降。本研究亦提示脑梗死患者血清脂联素水平明显低于健康对照者，三酰甘油水平明显高于健康对照者，低水平的脂联素导致三酰甘油水平升高，减弱了增加脂肪酸β氧化、抑制血管平滑肌细胞和外周单核细胞的增殖及抑制巨噬细胞向泡沫细胞的转变作用，从而促进了脑AS［3］。

过氧化物酶体增殖物激活受体属Ⅱ型核受体超家族成员，是配体活化的转录因子之一。PPARγ作为一种重要的核受体，在血管平滑肌细胞、巨噬泡沫细胞和血管内皮细胞上均有PPARγ的表达。PPARγ的生物学功能复杂多样，PPARγ对AS的抑制作用主要表现为抑制炎症反应和调节细胞增生和迁移。PPARγ配体或激动剂可减少炎症因子白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、诱导型一氧化氮合酶、基质金属蛋白酶9的表达，抑制单核细胞/巨噬细胞转录因子、核因子（nuclear factor-κB，NF-κB）和转录活化因子的活性；此外，PPARγ能够明显抑制内皮细胞细胞间黏附分子1、CD54、血管细胞黏附分子1表达，这有助于抑制慢性炎症，调节血管内皮功能，防止AS的形成［4-5］。脑缺血再灌注损伤动物模型的脑组织中存在PPARγmRNA及蛋白表达下调，并存在动态变化，PPARγ与脑缺血炎性损伤机制有关，而PPARγ激活剂应用后，可以减少缺血再灌注脑组织梗死体积及中性粒细胞的浸润［6］。本研究提示脑梗死患者血清PPARγ水平明显低于健康对照者，CD54表达明显高于健康对照者，两者共同参与了AS的形成及ACI的炎性损害。

CD36抗原是B族清道夫受体，CD36生物学作用涉及AS、炎症和脂质代谢的调节等多个方面。CD36对ox-LDL具有特异性，介导约40％的ox-LDL脂质入胞。有研究［7］发现，CD36与ox-LDL结合后被内吞加工，通过促分裂素原活化蛋白激酶p38依赖途径激活PPARγ。PPARγ作为参与脂代谢的转录因子及CD36受体启动因子参与调节CD36mRNA转录，促进单核细胞分化和摄取ox-LDL。ox-LDL通过CD36和PKC依赖途径激活巨噬细胞中的转录因子NF-κB。触发炎症因子如TNF-α/β等的分泌。在这些细胞因子的刺激下，CD54表达明显增加，增加AS斑块局部炎症反应，促进AS形成［8］。本研究中ACI组患者血清ox-LDL含量、单核细胞CD36和CD54表达均高于健康对照者，与文献报道一致。提示ACI患者AS斑块形成及炎症反应活跃。

脂联素、PPARγ、ox-LDL与CD36、CD54存在相互网络调控作用，脂联素既可抑制成熟巨噬细胞的功能，又能减少巨噬细胞前体细胞的生成，从而减少泡沫细胞形成。脂联素抑制单核细胞与血管内皮的黏附，下调巨噬细胞清道夫受体CD36表达，抑制巨噬细胞对ox-LDL的摄取，促进巨噬细胞的裂解，从而抑制血管平滑肌细胞和外周单核细胞的增殖及巨噬细胞向泡沫细胞的转变，抑制AS形成［3，9］。PPARγ激动剂能够增加人类、ob/ob小鼠及培养的3T3-L1细胞的脂联素mRNA的表达及分泌，通过抑制TNF-α的效应，作用于脂联素的启动子，从而促进脂联素的表达［10］。与此同时，PPARγ在血管内皮细胞及血管平滑肌细胞表达，可通过抑制血管壁炎症及抑制平滑肌细胞增殖、迁移，从而抑制AS形成。另一方面，CD36与ox-LDL结合后通过促分裂素原活化蛋白激酶p38依赖途径激活在单核/巨噬细胞PPARγ的表达，通过上调CD36的表达，增加细胞胆固醇的流入，促进巨噬细胞源性泡沫细胞的形成。

在AS的炎症反应中，脂联素、PPARγ通过影响细胞内核转录因子NF-κB信号通路，抑制TNF-α诱导的血管细胞黏附分子1、E-选择素及CD54等在主动脉内皮细胞表面的表达，抑制内皮细胞的炎症反应而影响AS的形成［11-12］。

本研究发现，脂联素与PPARγ、ox-LDL三者之间呈显著正相关，CD36与CD54呈显著正相关。提示脑梗死急性期AS斑块不稳定及炎症活跃状态，AS斑块病变坏死、活动释放较多ox-LDL，诱导单核细胞CD36表达及触发炎症因子表达，增加CD54持续增高表达水平，加速AS泡沫细胞形成及炎症反应，而脑梗死急性期低水平的脂联素和PPARγ减弱其抗AS作用，脂联素、PPARγ、ox-LDL与CD36、CD54在ACI患者AS形成过程中是相互促进、相互制约的，其相互网络调控途径有待进一步研究。

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（本文编辑：刘斯静）

RELATIONSHIP OF SERUM ADIPONECTIN，PEROXISOME PROLIFERATOR-ACTIVATED RECEPTOR GAMMA，OXIDIZED LOW DENSITY LIPOPROTEIN AND CD36，CD54 EXPRESSION IN MONOCYTESOF PATIENTSW ITH ACUTE CEREBRAL INFARCTION

ZHOU Liyuan1，LAN Jiao2，LIYanhua1，PANG Gang3，LILvli1，LIN Huiqiong1
（1.Department of Neurology，the People's Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region，Guangxi，Nanning 530021，China；2.Research Center of Medical Science，the People's Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region，Guangxi，Nanning 530021，China；3.Department of Neurosurgery，the People's Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region，Guangxi，Nanning 530021，China）

Objective To observe the serum level of adiponectin，peroxisome proliferatoractivated receptor gamma（PPARγ），oxidized low density lipoprotein（ox-LDL）and CD36，CD54 expression in monocytes of patients with acute cerebral infarction（ACI），and analyze their correlation. M ethods Lipids were measured in 31 patients with ACI（ACI group）and 27 healthy subjects（control group），serum concentrations of adiponectin，PPAR-γand ox-LDLweremeasured by using ELISA，CD36，CD54 expression in monocytes were measured by using flow cytometry，and the corelation analysis was done between them.Results Compared to the control group，serum concentration of adiponectin and PPARγ，HDL-C decreased，while ox-LDL，CD36，CD54，TG，LDL-C increased in ACI group（all P＜0.01）.Correlation analysis showed that serum concentration of adiponectin was positively corelated with PPARγand ox-LDL（r=0.939，0.934，0.945，all P＜0.01），and CD36 was positively corelated with CD54（r=0.760，P＜0.01）.Conclusion In patientswith ACI，the serum levels of adiponectin，PPARγ were decreased，CD36，CD54 expression inmonocyteswere increased，dyslipidemia，adiponectin，PPARγ，ox-LDL，CD36，and CD54 expression ofmonocyte may influence mutually and play an important role in the occurrence and development of ACI.

brain infarction；adiponectin；peroxisome proliferator-activated receptors

R743.33

A

1007-3205（2013）11-1368-04

2013-04-16；

2013-06-17

广西壮族自治区卫生厅自筹经费科研课题（Z2009164）

周礼圆（1973-），女，壮族，广西南宁人，广西壮族自治区人民医院主治医师，医学硕士，从事神经内科疾病诊治研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.11.003