E-cadherin及Vimentin在肾上腺皮质癌中的表达及其意义

徐文清 胡卫列 肖 戈 黄 福 吴浩明

肾上腺皮质癌是起源于肾上腺皮质的恶性肿瘤，侵袭转移性强，患者在诊断时多已发生远处转移，预后差，5年生存率＜35%［1］。研究发现上皮细胞间质转化(epithelial mesenchymal transitions，EMT)参与多种肿瘤的浸润转移，是肿瘤侵袭转移的1个重要分子机制［2］。我们对肾上腺皮质正常组织、腺瘤组织及腺癌组织的病理切片采用免疫组化的方法同步检测EMT相关蛋白E-cadherin及Vimentin的表达，以探讨它们在肾上腺皮质癌发生发展及转移中的作用。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取1990年4月～2010年12月在广州军区广州总医院住院手术治疗，且有完整的临床、病理和随访资料的肾上腺皮质肿瘤患者的存档石蜡标本59例，其中肾上腺皮质腺瘤31例，肾上腺皮质癌28例。所有组织标本统一采用10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，组织切片厚度为2.5 μm。另取健康肾移植供体正常肾上腺组织标本10例作为对照组。

1.2 主要仪器及试剂

超薄切片机RM2135(德国LEI-CA公司)，光学显微镜型号893799(日本OLYMPUS公司)。兔抗人vimentin多克隆抗体购于北京博奥森生物技术有限公司，兔抗人E-cadherin多克隆抗体购于Santz Cruz公司。免疫组化SP法按说明书进行。

1.3 实验结果判定

E-cadherin主要定位于细胞膜，阳性表达呈浅黄色、棕黄色或棕褐色，Vimentin主要定位于细胞质，阳性表达呈浅黄色、棕黄色或棕褐色颗粒。免疫组化结果根据着色阳性细胞数和染色强度分别评分。评估方法采用半定量积分法。随机选取5个高倍视野进行计数，阳性细胞数:0% ～5%计0分;6% ～25%计1分;26% ～50%计2分;51% ～75%计3分;76% ～100%计4分。阳性表达强度:无染色计0分，淡黄色计1分;棕黄色计2分;棕褐色计3分。两两积分相乘，积分0分为阴性(-)，1～4分为弱阳性(+)，5～8分为中等阳性(++)，9～12分为强阳性(+++)。若判定结果相差3分，则重新判定。

1.4 统计学方法

采用SPSS13.0软件进行统计学分析。不同组织的表达强度采用多样本非参数检验，检验E-cadherin与Vimentin在肾上腺皮质癌中表达与肿瘤浸润转移的关系采用 χ2检验，检验各因素间的相关性用Spearmen等级相关分析进行。

2 结果

2.1 E-cadherin及Vimentin在肾上腺组织中的表达

在正常肾上腺组织、肾上腺皮质腺瘤、肾上腺皮质癌中E-cadherin的阳性表达分别为19例(95.0%)、28例(90.3%)、12 例(42.9%);vimentin 的阳性表达分别为9 例(45.0%)、16 例(51.6%)、24 例(85.7%)。见表1。

2.2 肾上腺皮质癌中E-cadherin与Vimentin表达与肿瘤浸润转移的关系

E-cadherin及Vimentin的表达均与年龄、肿瘤大小无关(P＞0.05)，但与淋巴结或远处转移有关，见表2。

表1 E-cadherin在肾上腺皮质腺瘤、肾上腺皮质癌及正常肾上腺组织中的表达(例)

表2 E-cadherin及Vimentin在28例肾上腺皮质癌中的表达与肿瘤临床特征的关系(例)

2.3 肾上腺皮质癌中E-cadherin与Vimentin表达的相互关系

经Spearman等级相关分析发现E-cadherin和Vimentin在肾上腺皮质癌中的表达均呈负相关，相关系数为 γ =-0.812，P ＜0.01，有统计学意义，见表3。

表3 E-cadherin与Vimentin在肾上腺皮质癌中表达的相互关系(例)

3 讨论

EMT是指在特定的生理和病理情况下，具有极性的上皮细胞向在细胞基质间自由移动的间质细胞转化的现象，1982年由Greenburg等提出。上皮细胞表型的丧失和间质特性的获得是EMT发生的主要特征:①细胞黏附分子表达减少导致上皮细胞失去细胞间黏附作用;②角蛋白为主的细胞骨架转变为Vimentin为主的细胞骨架，从而转化成纺锤状细胞，但是也有时EMT发生功能改变，形态并不改变。这种表型的转化使肿瘤细胞摆脱细胞间黏附，从而表现得更具侵袭能力。EMT参与组织形成和器官发生等胚胎发育中诸多过程，近来研究显示它与肿瘤的关系也十分密切，发生EMT的肿瘤细胞在经历了短暂的结构改变后，极性丧失，同时细胞表型发生改变，上皮表型逐渐丧失，而获得了间质表型，肿瘤转移及侵袭能力增强。

E-cadherin主要表达于上皮细胞，是一类介导细胞间黏附的钙依赖性跨膜蛋白，参与细胞间黏附，维持细胞的完整性，其正常表达对上皮细胞的分化也起着重要的作用，是EMT的关键分子。肿瘤细胞E-cadherin的缺失不仅被认为是癌细胞失去上皮特性的金标准，同时也是促进肿瘤转移的重要表现［3］。目前研究发现包括肺癌、胃癌、鼻咽癌［4］等多种来源于上皮细胞的恶性肿瘤E-cadherin表达减少或缺失。本研究显示，28例肾上腺皮质癌患者中，57.1%的病例 E-cadherin表达缺失，与正常肾上腺组织及肾上腺腺瘤相比有统计学意义(P＜0.01)，E-cadherin表达在发生转移的病例中表达量较未发生转移的病例低。

vimentin是1种重要的细胞骨架蛋白，广泛表达于各种内皮细胞、成纤维细胞、淋巴细胞等间质细胞内，而在正常的上皮细胞内不表达。研究发现vimentin在肺癌中表达异常［5］，在肝内胆管癌及乳腺癌中，高表达的vimentin与肿瘤的侵袭及转移相关［6，7］。本研究显示，28例肾上腺皮质癌患者中，有85.7%的病例vimentin呈阳性表达，与正常肾上腺组织及肾上腺腺瘤相比有统计学意义，vimentin表达在发生转移的病例中表达量较未发生转移的病例低。

本实验研究发现，E-cadherin与vimentin在肾上腺皮质癌的表达呈负相关。随着E-cadherin表达减少，vimentin表达增加，肿瘤恶性程度越高，具有上皮结构细胞越少而间质样结构的细胞增多。同时本实验研究发现较未转移的肿瘤，转移的肿瘤E-cadherin表达减少而vimentin表达增加，说明EMT参与肾上腺皮质癌转移。

总之，通过检测E-cadherin及vimentin在肾上腺皮质癌组织中的表达情况，可初步了解在肿瘤组织中EMT发生及发展情况，从而进一步判断肿瘤的侵袭及转移能力，为进一步有效的治疗提供帮助。由于肾上腺皮质癌发病率低，本研究所选用病例较少，关于EMT在肾上腺皮质癌中的作用机制尚需大样本证实。

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