血清高迁移率族蛋白B1检测在T3N0M0期前列腺癌冷冻治疗后复发中的意义

胡 萍，司同国，郭 志

前列腺癌是老年男性常见的泌尿系恶性肿瘤，近年发病率直线上升且呈年轻化趋势[1]。经皮穿刺前列腺癌氩氦冷冻消融治疗具备操作简单、微创、疗效确切等优点，由根治术或放疗后复发的补救治疗手段发展为早期局限性前列腺癌的一线治疗手段[2]。与放射治疗、外科手术治疗一样，前列腺癌氩氦冷冻治疗亦有局部复发的风险，而T3期前列腺癌患者更是局部复发的高危人群。早期发现复发的前列腺癌患者，及时予以补救治疗，可显著提高生存率。目前，常用血清前列腺特异抗原（prostatespecific antigen，PSA）进行随访指导穿刺病理活检，但其对于局部复发的诊断敏感度偏低，探讨新的血清标志物是目前研究的热点和难点。多项研究发现高迁移率族蛋白B1（high-mobility group box 1 protein，HMGB1）在前列腺癌中呈高表达，与肿瘤形成、进展和转移相关[3]。同时，血清HMGB1对于肿瘤的诊断价值已在结肠癌、宫颈癌等多种肿瘤中进行研究。本文检测前列腺癌氩氦冷冻治疗的T3期患者术前血清HMGB1和PSA水平，结合临床检测疾病复发的金标准，评价HMGB1预测前列腺癌患者治疗后复发的临床价值。

1 资料和方法

1.1 临床资料

收集2005年1月—2011年6月在我科诊治的T3N0M0前列腺癌患者65例，年龄65～80岁，中位年龄72岁。所有患者均经前列腺穿刺活检确诊，病理均为腺泡癌，Gleason评分5～9分，术前均行前列腺MRI检查、全身骨扫描、胸部CT检查，排除其他合并肿瘤，术前均未接受内分泌及其他治疗。选择同期30例前列腺良性增生门诊患者作为对照组，取血48 h内不做直肠指检。两组患者年龄分布具可比性（P ＞ 0.05）。

1.2 方法

1.2.1 血清HMGB1检测 所有患者术前晨起抽取空腹静脉血 5 ml，1 h 内离心（300 g× 5 min，5000 g×5 min），去除细胞成分取上清，等量分装置-80℃超低温冰箱保存。采用酶联免疫吸附试验（ELISA，R&D公司）检测血清HMGB1水平。板条室温平衡20 min后使用，标准品孔各加不同浓度标准品50 μl；样本孔加待测样本10 μl（样本室温平衡20 min后进行检测），空白孔不加样本。除空白孔，各孔加辣根过氧化物酶标记抗体100 μl，封板膜封孔，置37℃恒温箱中温育60 min；弃液体，洗板、拍干（重复 5次）；加底物 50 μl于 37℃避光孵育 15 min；各孔加终止液，15 min内于波长450 nm处测吸光度（A）值，通过线性回归方程计算样本浓度。实验重复3次取均值。

1.2.2 冷冻治疗 采用美国Endocare公司氩氦冷冻治疗设备，低位硬膜外麻醉或全身麻醉下取膀胱截石位，留置三腔气囊导尿管，38～39℃生理盐水常压下循环保护尿道。BK1101型超声双平面直肠探头，轴面、矢状面导引下定位穿刺，根据肿瘤大小，选择2～6个2 mm的冷冻器。冷冻消融治疗始于腹侧，依次向背侧进行。根据冰球扩展速度及范围，调整输出功率，控制温度在-45～-80℃，持续18～20 min后氦气迅速复温，完成2个循环的冷冻-复温治疗。操作均在超声、心电监护下进行。术后局部压迫穿刺点10～15 min；维持尿道循环灌注大于30 min，持续膀胱冲洗大于24 h，留置导尿管14 d。

1.2.3 随访 所有前列腺癌患者，术后每月定期复查 PSA，若 PSA ＞0.5 μg/ml，1周内行 MRI检查及超声引导下穿刺组织病理检查。对PSA＜0.5 μg/ml患者，术后1、3、6个月行前列腺MRI检查，影像学异常者行病理穿刺活检。对于PSA、MRI或CT结果无异常患者，于术后12个月行超声引导下穿刺活检病理检查。术后病理活检证实肿瘤细胞存活者，定义为术后局部复发。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 两组术前血清HMGB1、PSA检测结果

术前血清HMGB1水平在前列腺癌组为（55.28±29.37）ng/ml，明显高于对照组的（34.61±13.15）ng/ml，组间差异有统计学意义（P=0.004）；对照组和前列腺癌组术前PSA分别为（3.65±1.95）μg/L和（26.7±8.3）μg/L，两组间差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 冷冻治疗后临床随访

65例前列腺癌患者冷冻术后3年内局部复发15例，远处转移4例，无进展生存46例。局部复发组中 11例为 PSA 生化复发（PSA ＞ 0.5 μg/L），4例PSA生化无复发而活检证实局部复发；远处转移组4例患者为MRI及全身骨显像提示盆腔淋巴结及远处转移（无原位复发）；无进展组中2例出现非特异性PSA升高，活检、MRI、腹部CT及全身骨显像均未见原位复发及明显转移灶。

2.3 HMGB1在前列腺癌各亚组患者中的表达水平

将65例前列腺癌患者按治疗后有无复发分为局部复发、远处转移和无进展生存亚组。在无进展生存组，患者术前血清HMGB1平均值为（55.49±7.12）ng/ml。在局部复发组，患者血清HMGB1平均值为（73.13±7.89）ng/ml，其中 11例 PSA 生化复发患者术前血清HMGB1平均值为（81.91±17.67）ng/ml，4例PSA生化无复发患者血清HMGB1均值为（62.75±5.87）ng/ml。在远处转移组，患者血清HMGB1平均值为（94.23±17.91）ng/ml。 局部复发组和远处转移组术前血清HMGB1显著高于无进展生存组（P=0.003），而远处转移组亦明显高于局部复发组，差异有统计学意义（P＜0.001）。局部复发组中4例局部复发而PSA生化无复发患者的术前血清HMGB1水平亦明显高于无进展生存组（P＜0.001）。无进展生存组中2例术后PSA非特异性升高患者术前血清HMGB1平均值为50.04 ng/ml。

3 讨论

T3期前列腺癌具有独特的生物学特性，具有潜在治愈性，对这部分不适合行外科根治术治疗的患者采取前列腺癌氩氦冷冻治疗，可达到与根治术类似的治疗效果。但是，由于T3期前列腺癌患者病理Gleason评分较高，有较高的复发和远处转移风险。对于前列腺癌局部氩氦冷冻治疗术后复发的患者，再次补救治疗仍有较好的疗效。因此，对于经冷冻治疗后复发的前列腺癌患者，早期诊断至关重要[4-5]。目前，血清PSA、骨 ECT、MRI、强化 CT等为常用的局部复发或远处转移的诊断方法，对于随访异常患者，最终可经穿刺病理活检确诊。血清PSA虽然在前列腺癌的诊断、监测和随访中应用广泛，但其敏感度高、特异度低[6]。而且，PSA对于前列腺癌的分期及有无远处转移提示意义不大。美国肿瘤放疗协会（ASTRO）建议前列腺癌放疗后前2年每3～4个月检测1次，以后每6个月1次，PSA降至最低点，连续检测3次逐渐升高，将复发时间定为最低点至第1次升高的中点[7]；而新的Phoenix生化复发定义为术后PSA水平超过PSA谷值加2。通常，临床中将PSA生化复发以0.5 ng/ml为标准。在我国，前列腺癌患者多数确诊时即为中晚期，局部治疗后复发患者很多PSA水平并未升高。既往报道，血清PSA对于前列腺癌局部治疗后复发诊断的敏感度和特异度分别为72%和83%[7]。因此，单一血清PSA对于监测前列腺癌复发价值有限，需要探讨新的肿瘤标志物。

HMGB1是一种分布广泛、进化高度保守的非组蛋白核蛋白，因在琼脂糖凝胶电泳中高迁移率而得名。研究发现，坏死癌症细胞分泌到细胞外的HMGB1可能有助于癌细胞的存活、增殖和侵袭[8]。HMGB1在多种人类恶性肿瘤和动物模型中呈过表达，尽管其与肿瘤相互作用的具体机制尚不清楚，但其作为预测肿瘤侵袭性和预后的标志物已在多种肿瘤的免疫组化和免疫测定过程得到很好的研究，包括胃癌、结肠癌、乳腺癌、宫颈癌等[9-10]。 最近，HMGB1在前列腺癌中的作用受到广泛关注，发现雄激素剥脱可导致前列腺癌细胞分泌HMGB1[3]。有研究报道HMGB1过表达预示前列腺癌根治术后预后差[11]。该研究亦发现，在前列腺癌细胞系中HMGB1高表达，同时对168例前列腺癌切除标本进行免疫组化染色，发现HMGB1阳性染色与生化无复发存活差明显相关，同时是根治术后生化无复发存活的独立预测因子。

对于血清HMGB1表达在前列腺癌患者中的诊断意义目前尚少见报道。本研究中，前列腺癌组患者血清HMGB1比对照组明显升高。此外，局部复发及远处转移者血清HMGB1明显升高，提示HMGB1可能与肿瘤的形成、转移相关，而HMGB1通过何种机制促进肿瘤转移，尚需进一步研究。此外，4例术后PSA随访阴性的局部复发患者，血清HMGB1明显升高。同时，2例PSA非特异性升高的未复发患者，血清HMGB1未见升高，提示HMGB1在预测前列腺癌冷冻治疗后复发方面可弥补PSA随访的不足。因此，在一定程度上血清HMGB1可作为一种新的肿瘤标志物，作为局部治疗后高复发患者的筛查指标。由于本研究样本量较小，存在一定局限性，要进一步探讨HMGB1与前列腺癌预后的关系还需要大样本的临床对照研究。

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