弹力纤维染色方法的改良与体会

王志东 张子军

弹力纤维染色方法的改良与体会

王志东 张子军

弹力纤维广泛分布于人体的血管、肺、心脏等组织中。在研究肺腺癌弹力纤维的过程中, 摸索出比较好的弹力纤维染色方法, 现介绍如下。

1 染色程序

①切片脱蜡至水。②Lugol碘液处理5 min。③稍水洗。④5%硫代硫酸钠处理5 min。⑤流水冲洗5min。⑥75%乙醇稍冼。⑦醛品红染液处理10min；⑧75%乙醇浸洗2次,每次约10秒；⑨稍水洗；⑩Harris苏木素复染, 酒精脱水,二甲苯透明, 中性树胶封片。

2 染液配制

①Lugol碘液配制碘片:碘化钾:蒸馏水=1g:2g:100 ml,至碘片全部溶解。②醛品红染液配制碱性品红:70%乙醇:浓盐酸:三聚乙醛=0.5 g:100 ml:1ml:1ml。③Harris苏木素复染液配制苏木素精:无水乙醇:甘油:硫酸钾铝:蒸馏水:冰乙酸=2 g:100 ml:100 ml:3 g:100 ml:10 ml(配制完毕, 阳光下曝晒6周后方可使用, 并且每日摇动一次)。

3 染色结果

弹力纤维染成紫红色, 呈波浪状分布；细胞核染成蓝色；二者对比明显, 可以在充分了解组织全貌的情况下对弹力纤维的分布、堆积的量进行细致的观察, 也可以对细胞与弹力纤维的关系进行比较观察, 并且在观察弹力纤维的过程中,可同时看到肺腺癌肿瘤细胞的分化状况, 使切片更直观和醒目。此方法用时短, 染液易配制, 要求条件不高, 切片可长时间保存。

4 注意事项

在75%乙醇浸洗时, 时间要严格掌握, 并要随时在显微镜下控制染色的情况, 以便随时终止乙醇浸洗, 防止切片被75%乙醇脱色。Harris苏木素复染时, 根据染色室室温的条件将时间掌握在3~5 min。然后进行自来水冲洗返蓝, 自来水冲洗时间要充分, 返蓝要彻底, 同时也要在显微镜下进行染色控制。染色完成后切片直接进入无水乙醇脱水, 脱三次,每次2 min。

5 讨论

弹力纤维在新鲜标本上呈黄色发亮的细线条状［1］。在HE染色状态下, 呈现鲜艳的粉红色, 但是, HE染色的组织学切片, 除细胞核呈蓝色外, 细胞浆、细胞膜及细胞间质多呈现为深浅不一的红粉色, 再加上组织发生病理改变而导致弹力纤维断裂、增生, 进而导致其排列散乱, 更难以判断弹力纤维发生了怎样的病理改变。所以找到一种简便、有效的弹力纤维染色方法就尤为重要。如, 发生慢性支气管炎、肺腺癌、弹力纤维瘤、动脉粥样硬化、不明原因动脉炎等疾病时,弹力纤维会发生病理改变。传统地衣红染色时间以天计, 并且在用盐酸酒精分化时, 对时间的控制要求非常高, 必须在显微镜下观察分化程度, 一旦弹力纤维清晰, 应立刻终止分化。否则, 一旦发生过分化, 经过多日反应而染色的弹力纤维上的地衣红就会被盐酸酒精脱色, 而达不到染色效果。可是, 若分化时间不够, 组织背景染色就比较重, 弹力纤维与组织背景对比就不明显, 影响染色结果观察。Weigert间苯二酚—碱性品红是显示弹力纤维最常用方法之一［2］, 用此方法染弹力纤维, 可以显示的比较清晰, 但是, 这种方法会使胶原纤维着色, 所以这种方法的特异性就受到质疑。而维多利亚蓝染色时间长, 分化难以掌握, 结构显示不够清晰, 也给判断带来困难。本方法在醛品红法的基础上进行了改进, 从染色效果上看, 弹力纤维显色清晰, 与背景对比明显, 无其他非特异性染色。同时, 这种染色方法操作简单、染色时间短、染色液可重复使用。这些特点为诊治、研究富于弹力纤维改变的疾病奠定了组织学基础。

［1］ 王玉清. 弹力纤维染色法的改进. 锦州医学院学报, 2001,22(2): 26.

［2］ 李冰, 刘同慎, 马云, 等. 长效Weigert弹力纤维染色液染色效果分析. 滨州医学院学报, 2002, 25(2): 157.

116001 大连市第六人民医院病理科(王志东);大连市儿童医院(张子军)