HPLC测定细辛脑注射液有关物质的测定

贾树娟

（辽宁中医药大学附属二院，辽宁 沈阳110034）

HPLC测定细辛脑注射液有关物质的测定

贾树娟

（辽宁中医药大学附属二院，辽宁 沈阳110034）

增加细辛脑注射液的有关物质测定，以甲醇-水（70：30）（每1000mL水中含磷酸二氢钠1.56g，十二烷基磺酸钠1.2g）为流动相；方法简便易行、重现性好，与杂质可达到良好分离。本文所采用的方法可以作为细辛脑注射液的有关物质检测方法。

细辛脑注射液；有关物质；高效液相

细辛脑（又名α-细辛脑、α-细辛醚；化学名：2，4，5-三甲氧基-1-丙烯基苯），主要存在于石菖蒲等植物的挥发油中。中药石菖蒲，能“豁痰开窍、醒脑”，具有止咳平喘的作用[1]。石菖蒲的挥发油中有效成分细辛脑可拮抗气管致痉剂组胺和5-羟色胺引起的支气管收缩，其作用与氨茶碱相似，尚能减少咳嗽次数。细辛脑注射液国家标准中均未对有关物质进行检查，为了使研究工作更加完善，本研究采用高效液相色谱法[2]对本品进行有关物质检查，经考察经方法学考察，重现性、精密度、回收率、稳定性试验结果良好，可以作为本品终产品的有关物质测定方法，希望以此控制终产品的质量。

1 仪器与试剂

仪器：检测器：日本岛津（LC-10ATVP）；输液泵：日本岛津（SPD-10ATVP）；色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，Diamonsil（钻石）-C18（250mm×4.6mm，5μm）。试药：细辛脑注射液（衡阳恒生制药有限公司，批号：20110801规格：2mL：8mg）；甲醇（色谱纯）；水（二次蒸馏水）；磷酸二氢钠，十二烷基磺酸钠（均为分析纯试剂）。

2 色谱条件的选择

经试验，以甲醇-水（70∶30）（每1000mL水中含磷酸二氢钠1.56g，十二烷基磺酸钠1.2g）为流动相，主峰保留时间合适，与β-细辛脑分离度良好，柱效高，而且，配制流动相时方便溶解，不易析出。检测波长为257nm，流速1.0mL/min。

3 峰位的确定

精密称定α-细辛脑对照品12mg，置200mL量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图。

精密称定β-细辛脑对照品12mg，置200mL量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图。

由结果可知，β-细辛脑保留时间为7.742min，α-细辛脑保留时间为9.408min。

4 系统适用性考察

4.1 热分解产物分离

精密量取样品1.5mL置试管中，100℃加热30min，放冷后，用水稀释并全部转移至100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。用微孔滤膜（0.45μm）滤过，精密吸取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的4倍。主要分解产物保留时间为3.725min与7.400min，与细辛脑主峰（tR＝8.667min）获得良好分离。

4.2 酸分解产物分离

精密量取样品1.5mL置试管中，加入0.1mol/L的盐酸溶液1mL，100℃加热30min，放冷，用0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至7.0，用水稀释并全部转移至100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。用微孔滤膜（0.45μm）滤过，精密吸取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的4倍。主要分解产物保留时间为3.733min与7.450min，与细辛脑主峰（tR＝8.742min）获得良好分离。

4.3 碱分解产物分离

精密量取样品1.5mL置试管中，加入0.1mol/L的氢氧化钠溶液1mL，100℃加热30min，放冷，用0.1mol/L的盐酸溶液调节pH值至7.0，用水稀释并全部转移至100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。用微孔滤膜（0.45μm）滤过，精密吸取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的4倍。主要分解产物保留时间为7.442min，与细辛脑主峰（tR＝8.725min）获得良好分离。

4.4 氧化分解产物分离

精密量取样品1.5mL置试管中，加30%过氧化氢溶液1mL，100℃加热30min，放冷，用水稀释并全部转移至100mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀。用微孔滤膜（0.45μm）滤过，精密吸取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的4倍。主要分解产物保留时间为2.300min与7.450min，可见分解产物与细辛脑（tR＝8.742min）主峰获得良好分离。

4.5 光照破坏

精密量取样品1.5mL置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，至4500Lx±500Lx的光照箱中照射24h，精密吸取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的4倍。主要分解产物保留时间为4.000min与7.683min；可见分解产物与细辛脑（tR＝8.933min）主峰获得良好分离。

4.6 结论

由图谱可知，酸碱破坏，氧化破坏，热分解及光照破坏都有明显的分解产物峰，但分解产物均与主峰有良好的分离度。由此可见，本方法适合细辛脑注射液有关物质检查。

5 精密度

精密吸取样品1.5mL置100mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。精密吸取配制好的溶液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图。连续进样六次，以主峰的峰面积计算RSD值为0.38%。由结果可见，本方法精密度良好。

6 重复性

精密吸取样品1.5mL置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，共配制六次，即得。分别精密吸取配制好的溶液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图。以主峰的峰面积计算RSD值0.75%。由结果可见，本方法重复性良好。

7 灵敏度

取本品适量，加水溶解后，再用水逐步定量稀释，测得本法最低定量浓度为30ng/mL（S/N≈10），进样量为0.60ng（20μL）。最低检出浓度为10ng/mL（S/N≈3）进样量0.20ng（20μL）。

8 溶液稳定性

精密吸取样品1.5mL置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。分别于0，2，4，6，8h精密吸取配制好的样品溶液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图。以主峰的峰面积计算RSD值。0.66%。由结果可见，溶液8h内稳定。

9 测定法

9.1 供试品溶液的配制：精密吸取样品1.5mL，置100mL量瓶中，加水溶解稀释至刻度，摇匀，即得。

9.2 对照溶液的配制：精密吸取配制好供试品溶液1mL置100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。

9.3 精密吸取对照溶液20μL注入液相色谱仪，调节检测灵敏度。使主成份峰的峰高约为满量程的10%～20%。再精密吸取供试品溶液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的2倍。

经市售品检验，结果为β-细辛脑0.56%，其他有关物质为0.16%。

10 讨 论

本研究制定的细辛脑有关物质的测定方法简单可行，经方法学验证，该方法可用于细辛脑注射液有关物质的检测。

[1] 中药大辞典[M].上海:上海人民出版社,1977.

[2] 中华人民共和国药典,二部附录[M].北京:化学工业出版社,2005.

R286

B

1671-8194（2013）16-0114-02