液体顶空气相色谱法测定蒿甲醚中有机溶剂残留

陆漓滨，唐庆华

（广西桂林南药股份有限公司，桂林 541000）

蒿甲醚（Artemether）作为一种抗疟原料药，与其他抗疟药联合用药，治疗危重疟疾者疗效好，近年来备受人们的关注。该原料药的制备工艺使用了甲醇、乙醇及二氯甲烷等有机溶剂，依据第四届人用药品注册技术要求国际协调会（ICH）1997年7月17日提出的残留溶剂指导原则[1]，甲醇、乙醇和二氯甲烷溶剂被列为药品必须限制的第二、三类低毒性有机溶剂，因此对该原料药进行有机溶剂残留检测就显得尤为重要。笔者及同事曾用液体顶空和液固顶空气相色谱法对药物中有机溶剂残留量进行测定，均获得较为理想的效果[2~5]。本文建立的蒿甲醚有机溶剂残留测定法，方法简单、准确、灵敏度及重现性好。

1 仪器与试药

日本岛津GC-17A气相色谱仪，HSS-4A顶空进样装置，CLASS-GC10色谱工作站；

蒿甲醚原料药（某公司提供）；甲醇、乙醇、二氯甲烷溶液均为色谱纯，纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：DB-1大口径毛细管柱30 m×0.53 mm× 1.5μm；柱温：35℃ 气化室：150℃；检测器：FID，250℃；载气： 氮气，流速3mL·min-1；顶空设置：VIAL 75℃；SYRINGE 75℃；COND TIME 20 min；ANAL TIME 10 min；顶空进样量100μL。理论板数不低于8000；甲醇、乙醇、二氯甲烷的分离度均大于2。对照品溶剂及原料药气相色谱图见图1。

图1 对照品溶剂(A)及原料药(B)气相色谱图

2.2 溶液及试样制备

2.2.1 对照品试样制备

分别精密称取甲醇0.0605g , 乙醇0.0043g，二氯甲烷0.0046g，分别置100mL容量瓶中，用纯化水稀释并定容，作为对照品贮备液；分别精密移取甲醇、乙醇及二氯甲烷对照品贮备液0.05mL，1.0mL，0.5mL置同一顶空瓶中，加入纯化水1mL，加盖密封，作为对照品试样。

2.2.2 供试品试样制备

称取蒿甲醚原料药0.1g置顶空瓶中，加入纯化水1mL，加盖密封，作为供试品试样。

2.3 线性试验及检测限

精密移取对照品贮备液甲醇0.05mL，乙醇0.15mL，二氯甲烷0.12mL；甲醇0.5mL，乙醇0.3mL，二氯甲烷0.3mL；甲醇0.85mL，乙醇0.6mL，二氯甲烷0.6mL；甲醇0.95mL，乙醇1.0mL，二氯甲烷1.0mL；甲醇1.05mL，乙醇1.5mL，二氯甲烷1.5mL等5个试样，按甲醇、乙醇及二氯甲烷量由小到大顺序分别置顶空瓶中，并各加入纯化水1 mL，加盖密封，作为标准溶液试样，装入HSS-4A试样转盘，依次在自动恒温箱中于75℃下保温20 min，每个样品各顶空进针3次，分别以各对照品的峰面积Y为纵座标，以浓度X为横座标，进行线性回归，结果表明：甲醇、乙醇及二氯甲烷分别在30.2~635.2，6.4~64.5，5.5~68.7μg·mL-1的浓度范围内线性关系良好，回归方程分别为：

当信噪比S/N=3，甲醇、乙醇及二氯甲烷的检测限分别为0.02，0.04，0.01μg· g-1。

2.4 回收率试验

用已测得溶剂残留量的蒿甲醚原料药，批号为API 1的试样，分别精密添加入适当甲醇、乙醇及二氯甲烷溶剂量的对照品贮备液，即相当于加入蒿甲醚原料药中甲醇量为726.0 μg· g-1，乙醇量为276.0μg·g-1，二氯甲烷量为460.0 μg·g-1，加盖装盘，依照本顶空气相色谱法测定，计算加样回收率。结果见表1。

表1 回收率测定结果 ( n = 3 )

2.5 精密度试验

2.5.1 系统精密度试验

分别移取甲醇、乙醇及二氯甲烷对照品贮备液0.05mL，1.0mL，0.5mL置同一顶空瓶中，加入纯化水1mL，加盖密封，作为系统精密度试验的试样，依法测定，连续顶空进样6次，测试甲醇、乙醇及二氯甲烷的溶剂峰面积，计算结果：甲醇、乙醇及二氯甲烷的RSD分别为5.3%，4.2%，2.0%。

2.5.2 方法精密度试验

分别移取甲醇、乙醇及二氯甲烷对照品贮备液0.05mL，1.0mL，0.5mL置同一顶空瓶中，加入纯化水1mL，加盖密封，作为对照品试样；再分别称取蒿甲醚原料药API 3平行6份，分别加入纯化水1mL，作为方法精密度试验的试样，依法测定，连续顶空进样6次，测试结果：计算甲醇、乙醇的RSD分别为9.25%，5.50%，均小于10%，符合顶空气相色谱法中残留溶剂测定法之外标法的规定[6]；而且测得甲醇和乙醇的残留量与先前测定值基本一致，试样均未检出二氯甲烷。

2.6 稳定性试验

取供试品试样，以1天、2天、3天进样测定，测试结果表明：蒿甲醚原料药样品均未检出二氯甲烷，原料药中甲醇，乙醇溶剂残留量基本不变，计算RSD值，甲醇、乙醇分别为6.20%，0.48%。

2.7 样品测定

称取3个批号的蒿甲醚原料药，每份约0.1g，各置顶空瓶中，分别加入纯化水1mL，加盖密封，装入试样转盘，按本顶空气相色谱法进行测定。检测结果表明：蒿甲醚原料药试样均未检出二氯甲烷，原料药气相色谱图见图1。

所测试的3批蒿甲醚原料药，甲醇、乙醇的残留量均符合规定[1]，结果见表2。

表2 样品测定结果 ( n = 3 )

3 讨论

本文建立的蒿甲醚原料药中有机溶剂残留的顶空气相色谱法，选择纯化水作为蒿甲醚原料药的溶剂，不单是考虑到用纯化水作溶剂不像有机溶剂会干扰各待测物出峰，更值得一提的是，用纯化水作为蒿甲醚的溶剂既可避免有机溶剂带入的酸、碱性介质对甲氧基的影响，并有利于试样中甲醇、乙醇及二氯甲烷溶剂的出峰，考虑到蒿甲醚分子结构因素，原料药溶液的顶空试样瓶不宜在过高的温度下恒温时间太长。

本液体顶空气相色谱法，测定组分出峰保留时间与相应物质对照品溶液进样一致。不过，还应该说明一点，在原料药样品色谱图中，所能看到的4.605min基线处出现的小峰，并不是二氯甲烷溶剂峰，尽管该小峰在后面进行系统性试验中还有出现，然而依据有针对性地进行的相应色谱条件试验，已排除了二氯甲烷溶剂的可能性。

本色谱法添加组分回收完全。

本方法采用液体顶空进样，作为原料药溶剂残留测定的2010年版《中国药典》的法定方法[6]，不失为一种理想的方法。

[1]周海钧主译. 药品注册的国际技术要求 [M].北京;人民卫生出版社,2000：88-89.

[2]唐庆华,翁小清,唐咸梅. 顶空气相色谱法测定盐酸依匹斯汀中溶剂残留[J].中国药事,2004,18（9）：563-564.

[3]唐庆华,陆漓滨. 细辛脑中有机溶剂残留的毛细管顶空GC测定[J].中国医药工业杂志,2005,36（2）：95-96.

[4]唐庆华,胡建英.液固顶空GC测定阿拉普利中溶剂残留[J].生命科学仪器, 2005,3（6）：44-46.

[5]唐庆华,马志伟. 液体顶空GC测定盐酸马尼地平有机溶剂残留[J].生命科学仪器, 2006,4（4）：37-39.

[6]中国药典2010版[S].（二部）,附录Ⅷ P残留溶剂测定法：附录61.