灯盏花素对高血压脑出血患者VEGF的影响

涂兰波 曹志恺 全伟 卢恒聪 吕建平 陈凡帆

高血压性脑出血是神经外科常见疾病，严重威胁人类生命和生活质量。灯盏花素目前在我国广泛用于脑出血患者的治疗，取得较好的临床效果。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是一种高度特异的刺激血管内皮细胞增殖、促进新生血管形成的因子，研究发现在脑出血中发挥重要作用。为探讨灯盏花素与VEGF在高血压脑出血中的关系，笔者对此进行了研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择笔者所在科2009年10月-2011年8月收治的高血压脑出血患者40例，均行头部CT检查证实，同时符合以下标准：(1)发病时间<48 h；(2)年龄50～80岁；(3)首次单侧基底节区出血；(4)出血量10～30 ml；(5)患侧肌力<Ⅳ级；(6)意识清醒或轻度嗜睡；(7)血压<220/120 mm Hg；(8)近期无出血性病史；(9)病前无长期服用阿司匹林或其他抗血小板、抗凝药治疗史；(10)血小板计数及凝血功能检查正常。排除标准：(1)颅内动脉瘤、动静脉畸形或肿瘤出血；(2)多灶性出血；(3)幕下出血；(4)混合性卒中或出血性梗死；(5)出血破入脑室或蛛网膜下腔；(6)严重心肝肾功能不全；(7)近期有出血性病史或有明确出血倾向；(8)有灯盏花素过敏史。将所有40例患者随机分为灯盏花素治疗组和常规治疗组，每组各20例。灯盏花素治疗组20例，其中男14例，女6例，平均65.4岁，基底节区出血14例，皮质下出血2例，丘脑出血4例。出血量按多田公式计算，10～20 ml 14例，20～30 ml 6例，平均17.8 ml。常规治疗组20例，其中男15例，女5例，平均67.2岁，基底节区出血15例，皮质出血1例，丘脑出血4例，出血量10～20 ml 16例，20～30 ml 4例，平均18.6 ml。两组性别、年龄、出血量比较差异均无统计学意义。另选同时段、同年龄组健康体检人员10例抽取静脉血作为正常对照组。

1.2 治疗方法 常规治疗组和灯盏花素治疗组分别按以下治疗方案进行。

1.2.1 常规治疗组 常规给予抗脑水肿，预防癫痫，维持水电解质平衡，预防消化道出血以及针灸、高压氧等治疗；原有高血压、冠心病、糖尿病或并发肺部感染、尿路感染者均给予相应药物治疗。

1.2.2 灯盏花素治疗组 于发病24～48 h内给予灯盏花素50 mg+5%葡萄糖(糖尿病患者用生理盐水)250 ml静滴，1次/d，连用14 d；所用灯盏花素系昆明龙津制药有限公司生产(规格：25 mg/支)。其他治疗与常规治疗组相同。

1.3 VEGF测定 所有患者分别于发病后2 d、3 d、7 d、14 d时抽静脉血。采集标本于室温下放置0.5 h，1500 r／min离心10 min，分离上清液，分装入0.25 ml的Eppendorf管，-20 ℃冰箱贮存备用，避免反复冻融。血清VEGF定量试剂盒购自深圳晶美公司，采用双抗体夹心ELISA法，检测步骤严格按照试剂盒说明进行。采用酶标仪测定，在450 nm处读取OD值。测定值按标准曲线换算成VEGF含量(pg/ml)。

1.4 出血量的计算 采用多田氏公式进行，出血量(ml)=π／6×长 (cm)× 宽 (cm)× 高 (cm)。

2 结果

两治疗组各时间点及正常对照组静脉血VEGF检测结果见表1。

表1 脑出血患者各时间点血清VEGF检测结果( ) pg/ml

表1 脑出血患者各时间点血清VEGF检测结果( ) pg/ml

*与同时间点正常治疗组比较，P<0.05；△与正常对照组比较，P<0.05

组别 2 d 3 d 7 d 14 d灯盏花素组(n=20) 138.26±34.30△ 147.18±23.12*△ 181.90±30.54*△ 132.07±23.18△正常治疗组(n=20) 145.81±21.84△ 174.25±24.25△ 209.27±31.07△ 133.03±20.76△正常对照组(n=10) 81.2±7.50

由表1可见，所有患者各检测时间点血液中VEGF均高于正常对照组，且具有统计学意义，7 d时达高峰，此后逐渐降低，但至第14天时仍高于正常。第2天灯盏花素治疗组VEGF水平稍低于常规治疗组，两组结果比较差异无统计学意义；第3、7天灯盏花素治疗组VEGF水平低于常规治疗组，两组结果差异具有统计学意义(P<0.05)；第14天灯盏花素治疗组VEGF水平低于常规治疗组，两组结果比较差异无统计学意义。

3 讨论

高血压脑出血的发病率、死亡率、致残率高，严重威胁人类生命和生活质量。目前，尽管在预防和治疗方面取得了一些进展，但尚无特别有效的治疗方法来减轻脑功能损害、降低致残率及改善预后。探讨脑出血后神经损伤的机制以及研究对脑出血预后的影响因素具有十分重要的临床意义。

灯盏花素是由灯盏花提取分离纯化的单一成分—灯盏花乙素，化学名为4，5，6-三羟基黄酮-7-o-葡萄糖醛酸甙。现代药理学研究表明，灯盏花素可以抑制再灌注蛋白激酶C(protein kinase c，PKC)的激活及钙超载，抑制神经细胞凋亡，减少自由基和兴奋性氨基酸的释放，并通过以上机制间接抑制炎性介质和毒性物质的产生，从而达到脑保护作用[1]；还可通过抑制脑血管挛缩，显著升高脑血流量，降低脑血管阻力，改善脑循环，提高血脑屏障的通透性；提高机体巨噬细胞免疫功能及对抗由二磷酸腺苷所引起的血小板聚集，促进纤溶，为防栓、溶栓、抗炎提供条件。目前灯盏花素临床上广泛应用于缺血性心脑血管病的治疗[2]。近年来，灯盏花素也越来越多地应用于高血压脑出血患者的治疗中，显示有利于血肿和脑水肿的吸收，促进神经功能的恢复，降低致残率，改善预后，取得良好疗效[3-4]，且并未增加出血的风险。

VEGF是近年来发现的一种具有肝素结合活性的生长因子，为同性二聚体蛋白化合物，对热和酸具有高度稳定性，高度特异地作用于血管内皮细胞，刺激血管内皮细胞增殖，诱导体内新生血管形成[5]。正常情况下表达水平很低，病理条件下，可在其血管内皮中检测到受体的高表达。众多实验已证实，缺血性脑损伤能明显诱导VEGF生成。VEGF发挥作用主要是通过PKC途径，通过促进内皮细胞增生，在缺血区诱导大量新生血管形成，改善微循环，增加受累脑组织再灌注及供氧量，促进受损脑组织修复，加强神经元的营养和神经元功能的恢复。其在脑缺血性卒中中的作用已得到肯定。有关VEGF与脑水肿形成关系的研究尚不一致，有学者认为，VEGF可能参与脑出血后血脑屏障的破坏，促进脑水肿的形成[6]。而另有研究表明，用VEGF治疗脑梗死能促进缺血区血管形成，减轻脑水肿，具有脑保护作用[7]。VEGF可提高tPA治疗的脑梗死患者血管再通率，改善临床疗效，但可能增加梗死后出血的几率[8]，而抑制VEGF传导路径可以减少出血的发生[9]。

脑出血后病灶周边存在与脑梗死类似的“缺血半暗带”，局部脑血流量明显下降。本实验发现，脑出血后患者各检测时间点血液中VEGF均高于正常对照组，差异具有统计学意义，7 d时达高峰，此后逐渐降低，但至第14天时仍高于正常，与徐元等[10]实验结果基本一致，这表明脑出血同样能刺激VEGF的表达。

一般认为，灯盏花素和VEGF均通过改善微循环，促进新生血管形成，加大脑组织局部脑血流，改善脑缺氧和神经保护作用，促进患者脑功能恢复。而关于两者关系的研究，目前可以找到的资料很少，且结果并不一致。有实验表明，灯盏花素能非竞争性抑制组织PKC活性，明显抑制糖尿病大鼠视网膜VEGF表达[11]；但另有实验发现，灯盏花素可通过上调正畸牙加力初期牙周组织中VEGF的表达而加速其移动[12]；表明灯盏花素与VEGF的关系复杂，在不同的组织和不同的条件下可能出现不同的结果。

从本实验结果看，脑出血后第2天，灯盏花素治疗组VEGF水平稍低于常规治疗组，两组结果差异无统计学意义；第3、7天灯盏花素治疗组VEGF水平低于常规治疗组，两组结果差异具有统计学意义。这表明灯盏花素在脑出血早期抑制了VEGF的增高。第14天灯盏花素治疗组VEGF水平稍低于常规治疗组，两组结果差异无统计学意义，但仍高于正常对照组。根据本实验结果，笔者推测在急性期由于PKC激活导致VEGF升高，灯盏花素抑制PKC途径而降低VEGF水平，而急性期过后，PKC水平明显降低，灯盏花素通过PKC途径调控VEGF所能发挥的作用有限，因此，至第14天时VEGF水平差别不明显。当然，也不能排除由于实验本身样本量不够、临床环境影响因素较多(如肺部感染致缺氧，使用血管紧张素转化酶抑制剂等影响VEGF表达的降血压药物)等原因所致，说明需进行更多的实验来进一步阐明两者之间的联系。

较多的临床实验结果表明，灯盏花素对于脑出血患者具有较好的临床疗效，主要机制是急性期通过清除自由基，降低钙超载，减少神经细胞凋亡；恢复期通过抑制血小板凝聚，促进纤溶，改善脑微循环等发挥作用；加强其对脑出血患者VEGF影响的研究，进一步了解作用机制，为更好地发挥灯盏花素的治疗作用奠定坚实的基础[13]。

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