本草防晒霜防晒作用的实验研究

高晓芬 ，林颖 ，梅册芳 ，陈四有 ，郜文秀 ，李鹏 ，陈曙 ，易建平

(1.广东省韶关学院医学院，韶关512026；2.韶关市皮肤病医院，韶关512026）

皮肤老化分为自然老化和光老化，前者不可避免，而光老化通过防护是可以延缓的，引起光老化的主要原因是紫外线的照射[1]。紫外线的照射不但可以加速皮肤老化，而且可以引发和加重一些皮肤疾病，如日光性皮炎、慢性光化性皮炎、多形性日光疹、皮肤癌、黄褐斑、红斑狼疮等[2]，因此防晒成为延缓老化，预防和治疗疾病的最主要措施之一，目前为了防御日光紫外线的损害，已经有多种防晒剂被开发利用，但存在或轻或重的副作用[3-4]，中药防晒剂来自天然不仅符合化妆品“回归自然”的潮流，且因其独特的广谱、高效、安全防晒效果，是未来的发展趋势，亦会倍受消费者青睐[3]。我们结合中医理论参照近年文献组方，并制成本草防晒霜剂外用，通过动物实验观察其防晒作用。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 动物 普通级昆明种雌性小鼠60只，体质量17～20 g，由南华大学实验动物学部提供，合格证号：scxk（湘）2010-0004。

1.1.2 材料 总超氧化物歧化酶（superoxide dismu－tase,SOD）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）活性测定试剂盒：南京建成生物工程研究所（批号20110705，20110629）；本草防晒霜（组成：金银花、白芷、黄芩、石膏、槐米、当归、川芎、丹参、甘草、白芨、珍珠粉、硬脂酸、白凡士林、液状石蜡和羟苯乙酯等，其中中药饮片购自韶关乡亲大药房；硬脂酸、白凡士林、液状石蜡和羟苯乙酯等由韶关金华化学有限公司提供）由我院药学系制剂教研室制成35%、55%、70%的低、中、高浓度；SPF20（PA＋＋）丁家宜美白防晒霜购自韶关市大润发超市。

1.1.3 仪器 BF-X5-320低速医用离心机：白洋离心机厂；VIS-722可见光分光光度计：上海绿宇生物科技有限公司；恒温水温箱：上海浦东荣丰科学仪器有限公司；OLYMPUS BX41光学纤维镜。

1.2 方法

1.2.1 动物选择及分组 造模前将60只小鼠随机分成 6组：空白对照组（A）、模型组（B）、中药低浓度组（C）、中药中浓度组（D）、中药高浓度组（E），对照组（F），每组 10只。

1.2.2 动物模型制作及给药方法

1.2.2.1 脱毛 先用剪刀剪去鼠背上的粗毛，再用一次性医用刮毛刀将剩余的绒毛剃除干净，使背部皮肤充分暴露，剃毛面积约2cm×1cm。每周脱毛1次，脱毛后用温清水洗净。

1.2.2.2 给药及紫外线照射 每天正常喂养，给以充足的水分及食物。中药低浓度组、中药中浓度组、中药高浓度组在晒前30min于剃毛小鼠背部按1g/cm2涂抹相应浓度本草防晒霜，对照组在晒前30 min于剃毛小鼠背部按0.5 g/cm2涂抹SPF20（PA＋＋）丁家宜美白防晒霜，模型组不涂任何防晒霜，以上5组在7～8月份11点到3点钟日光照射1 h（分段完成每次照射至小鼠面部出汗约30 min，即将小鼠移自室内休息30 min，然后按上法再照射30 min，累计照射量达1 h）连续照射4周。空白对照组不予日光照射，也不涂任何防晒霜。

1.2.3 取材及指标测定

1.2.3.1 取材 实验第4周末，小鼠背部再次脱毛，面积为2 cm×1 cm。断颈处死全部小鼠后，立即取下背部脱毛处全层皮肤。

1.2.3.2 皮肤组织匀浆的制备 每个小鼠皮肤组织标本取0.1～0.2 g，在冰生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，用眼科小剪剪碎组织块，倒入玻璃匀浆管中；用量筒量取9倍冷生理盐水，倒入匀浆器中进行匀浆；以3 000 r/min的速度离心10 min；取上清液严格按照SOD和MDA试剂盒要求进行指标测定。

1.2.3.3 病理切片的制备 每个小鼠皮肤组织标本取0.2 g，福尔马林液固定，石蜡包埋，HE染色观察各组小鼠皮肤组织形态变化。

1.3 统计学方法 采用SPSS 16.0统计软件进行分析，实验数据以均数±标准差（±s）表示，进行方差分析。

2 结果

2.1 各组实验动物皮肤中SOD活性及MDA含量变化 见表1。模型组与空白对照组比较，小鼠皮肤组织中SOD活性下降，MDA含量升高，且两者差异均有统计学意义（P=4.087、3.517，<0.01）。与模型组比较，中药各组小鼠皮肤组织中SOD活性逐渐上升，中、高浓度组与模型组差异均有统计学意义（P中<0.01，P高<0.01）；而各组小鼠皮肤组织中MDA含量逐渐下降，且与模型组差异均有统计学意义（P低<0.01，P中<0.01，P高<0.01）。与对照组比较，中药高浓度组小鼠皮肤组织中SOD活性差异有统计学意义（P高<0.01）；而中药中浓度及中药高浓度组小鼠皮肤组织中MDA含量差异均有统计学意义（P中<0.01，P高<0.01）。中药高浓度组与中药中浓度组比较小鼠皮肤组织中SOD活性差异有统计学意义（P<0.01），而中药低浓度组与中药中浓度组之间差异无统计学意义；小鼠皮肤组织中MDA含量中药中浓度组与中药低浓度组差异有统计学意义（P<0.01），但中药中、高浓度组之间差异无统计学意义。

表1 各组实验动物皮肤中SOD活性及MDA 含量的比较（±s）

表1 各组实验动物皮肤中SOD活性及MDA 含量的比较（±s）

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01；与对照组比较，△P<0.01；与中药中浓度组比较，#P<0.01。

组别空白对照组（A）模型组（B）中药低浓度组（C）中药中浓度组（D）中药高浓度组（E）对照组（F）n 10 9 10 10 8 8 SOD（U/mgprot）159.67±76.25**54.40±11.66 71.79±11.52 94.56±17.96*172.63±62.98**△#84.13±14.81 MDA（nmol/mgprot）15.93±3.15**21.88±4.20 15.62±2.68**#7.71±2.70**△5.07±2.36**△15.01±5.90**

2.2 各组小鼠皮肤组织形态的变化 空白对照组小鼠表皮组织结构完整，细胞分层清晰。真皮层未见毛细血管扩张充血，腺体和毛囊排列有序，分布均匀，未见明显炎性细胞浸润，见图1。模型组小鼠的表皮角化过度明显，毛囊角栓增多，棘细胞组织增厚，棘细胞及基底细胞内色素颗粒增多，结构不甚完整。真皮组织毛囊、腺体排列紊乱，分布不均，毛细血管扩张充血，管周可见炎性细胞浸润及噬色素细胞，见图2、图3。中药低浓度组、中药中浓度组小鼠的表皮角化过度较明显，较多毛囊角栓形成，棘层肥厚，棘细胞和基底细胞内较多色素颗粒，真皮内毛囊、腺体排列欠规则，毛细血管扩张充血较明显，管周较多炎性细胞及噬色素细胞，见图4、图5。中药高浓度组小鼠表皮未见明显角化过度及毛囊角栓，细胞分层较清晰，棘细胞及基底细胞内无明显色素颗粒，真皮内毛囊、腺体排列规则，分布均匀，毛细血管未见明显扩张充血，管周极少量炎性细胞，见图6、图7。对照组小鼠的表皮轻度角化过度，表皮组织结构基本完整，分层较清晰，真皮层血管未见明显充血，腺体及毛囊周围组织间隙少量炎性细胞及噬色素细胞浸润，见图8。

3 讨论

本草防晒霜属参照大量文献后筛选出的方剂，由金银花、白芷、黄芩、石膏、槐米、当归、川芎、丹参、甘草、白芨、珍珠粉组成。我们认为阳光温暖其性属火，火热之邪为阳邪易致肿疡、火邪易生风动血可引起皮肤损伤，常以皮肤红斑、肿胀瘙痒、久则色素沉着为主，紫外线对人体的损伤病因归为外来火热之邪。方中黄芩为君药清肺经之热，肺主皮毛，清肺经热即可清皮肤热；金银花、白芷为臣清外来风热之邪，又槐米为臣清大肠之热而凉血；石膏为佐以防移热于胃，当归、川芎、丹参活血药为佐可消斑，防止日晒引起黑斑，白芨、珍珠粉色白可消斑；甘草为使调节诸药。全方共奏清热解毒，凉血消斑之效，可用来防止紫外线对小鼠皮肤的损伤。

实验结果显示用阳光直接照射剃毛小鼠造成光损伤的造模方法是可行的。中药低、中、高浓度组都有效，但以中药高浓度组防晒疗效最佳，这与有关书籍记载中药外用的浓度应选择50%～70%是一致的，在以后的实践中进一步摸索最佳防晒浓度。中药低、中、高浓度组与对照组SPF20（PA＋＋）丁家宜美白防晒霜防晒效果比较提示丁家宜美白防晒霜的防晒指数应在中药低、中浓度组之间，即中药高浓度组的防晒指数及防晒效果均在SPF20（PA＋＋）丁家宜美白防晒霜以上。中药各组比较以高浓度组的防晒效果最佳。实验结果中小鼠皮肤组织病理显示空白对照组与模型组小鼠皮肤组织病理形态明显不同，模型组存在明显的老化、炎症及色素。中药低、中、高浓度组及对照组与模型组相比小鼠皮肤组织老化、炎症及色素均有减轻，其中以中药高浓度组最为明显。中药低、中、高浓度组与对照组相比，对照组小鼠皮肤组织改变间于中药低中浓度与高浓度之间，说明中药高浓度组的防晒效果与防晒指数高于对照组SPF20（PA＋＋）丁家宜美白防晒霜。这与小鼠皮肤组织中SOD活力和MDA含量影响的结论相一致。通过本实验初步认为中药高浓度本草防晒霜对日光所致小鼠剃毛背部皮肤有防晒作用，防晒效果优于SPF20（PA＋＋）丁家宜美白防晒，防晒指数高于SPF20（PA＋＋），其作用机制及临床疗效如何期待下一步的研究。

[1]顾恒，鞠梅.皮肤老化和光老化[J].实用老年医学，2004，18（6）:286-287.

[2]赵辨.临床皮肤病学[M].第3版.南京：江苏科学技术出版社，2001：576-585，654.

[3]王海平，谢铭璋，杜喜平，等.植物防晒霜的初步研究[J].北京日化，2008，（2）:16-19.

[4]韦公远.具有防晒作用的中草药物[J].中国民族民间医药杂志，2007，16（84）：52-54.