傣药“雅解沙把”抗变态反应的实验研究*

张 婷，叶建州，唐浩然，骆始华，张 超，淤泽溥

(云南中医学院，云南昆明 650500)

“雅解”为傣语，意译为解药，是在傣族地区广为使用的民族药物。傣医“雅解”理论和“雅解” (解药)是傣医药最具特色的理论和方药之一。傣医“雅解”理论强调疾病的发生与体内各种毒有关。其核心内容是“未病先解、先解后治”防治疾病思想和治疗原则及方法。认为在疾病尚未发生之前，通过采取“雅解”(解药)的预防及治疗措施，调节人体生理功能、解除人体的各种毒素，以保持体内四塔、五蕴功能的平衡和协调，防止疾病的发生;或当人体发病后应先服用“雅解”(解药)，以解除导致人体发病的各种毒素;或患病日久或久治不愈者，可服用“雅解”(解药)以解除失治、误治或用药不当所造成的毒副作用，以解除人体的各种毒素，调节人体生理功能，保持体内“四塔五蕴”和脏腑功能的平衡和协调［1］。

“雅解沙把”是云南西双版纳傣族自治州傣医医院创制的院内制剂，由百样解、傣百解、定心藤、奶子藤、白花臭牡丹根等药物组成，是傣医解药的代表方药。全方具有调平四塔的功能，能解热毒及其多种毒。根据其临床常用于解湿疹、动物叮咬及多种药物、食物等引起躯体不适之毒的经验，笔者认为“雅解沙把”的解毒作用可能与其具有抗变态反应的作用有关。

本实验通过建立Ⅰ、Ⅳ型变态反应动物模型来研究傣药“雅解沙把”的抗变态反应作用，为阐明傣医的“雅解”理论的科学内涵及“雅解沙把”的“解毒”本质提供实验依据，以期进一步丰富、深化和完善傣医“雅解”理论，指导傣医解药的临床合理应用。

1 实验材料

1.1 动物

昆明种小白鼠，清洁级，雌雄各半，体重18-22g。购自四川省医学科学院实验动物研究所，许可证号:SCXK(川)2008-24;合格证号:0013106。Wistar大鼠，体重180～200g，雌雄各半，健康豚鼠，雌雄各半，由昆明医学院动物室提供，许可证号:SCXK(滇)2005-0008;合格证号:0021861。

1.2 药品与试剂

“雅解沙把” (百解胶囊)，滇药制字 (Z)20082252K，0.2g×60粒/瓶，5粒/次，每日3次;云南省西双版纳州傣医院院内制剂，由云南省西双版纳州傣医院提供。将胶囊内容物用水煎煮、浓缩成稠浸膏。置于-18℃冰箱冷藏备用，给药前配制所需浓度;低剂量为临床用量的等效量，即0.39g生药/kg体重，高剂量为临床等效量的9倍，即3.51g生药/kg体重。氢化可的松注射液:规格:5mL∶25mg天津金耀氨基酸有限公司，批号:H12020886。2，4-二硝基氟苯 (DNFB):瑞士(adamas-beta)，批号:CAS号:97-00-7。磷酸组胺:上海生物试剂厂生产，批号:909035。马来酸氯苯那敏片 (扑尔敏片):江苏鹏鹞药业有限公司，批号:H32023645。卵白蛋白:Sigma，批号:A-5378。百白破疫苗，成都生物制品研究所，批号:S10970013。

1.3 仪器

XS125A电子分析天平:瑞士 Precisa公司;Infinite M200 PRO酶标仪:瑞士Tecan公司。

2 方法与结果

2.1 “雅解沙把”对小鼠耳异种被动皮肤过敏反应 (PCA)的影响

参照文献［2-3］制备大鼠抗卵白蛋白血清:取大鼠6只，雌雄各半，肌肉注射卵白蛋白25mg∕kg，同时腹腔注射免疫佐剂百日咳疫苗2×1 010∕只，12d后处死动物采血，血液低速离心，分离血清并混合置低温冰箱备用，用时按1∶10(抗血清:生理盐水)稀释。

另取小鼠40只，雌雄各半，随机分为4组，各组小鼠按表1剂量连续灌胃给药或蒸馏水4d后，小鼠两只耳廓各注射大鼠抗血清20μl，48h后抗原攻击，尾静脉注射0.5%伊文思蓝溶液0.25mL内含卵白蛋白0.25mg，30min后，将小鼠颈椎脱臼处死，剪下耳廓 (蓝染部位均剪下)。两只耳廓置于试管中，加入0.75mL、1mol/L的氢氧化钾溶液浸泡，37℃恒温过夜消化，次日加 3.5mL(0.6mol/L)的磷酸与丙酮混合液 (5∶13，v/v)，经漩涡振荡混匀，再以2 500r/min离心15min，取上清液在Infinite M200 PRO酶标仪610nm处测定光密度 (OD)［4］。结果见表1。

表1 “雅解沙把”小鼠异种被动皮肤过敏反应的影响 (±s)

表1 “雅解沙把”小鼠异种被动皮肤过敏反应的影响 (±s)

注:与模型组对比＊＊P＜0.01.

组别 剂量(g/kg) 例数 OD值 抑制率(%)模型组 —— 14 0.0998±0.0074——扑尔敏组 0.004 14 0.0244 ±0.0029＊＊ 75.60高剂量组 3.51 13 0.0313 ±0.0267＊＊ 68.60低剂量组 0.39 14 0.0537 ±0.0045＊＊46.20

从表1可看出:扑尔敏组、“雅解沙把”高、低剂量组对小鼠异种被动皮肤过敏反应均有显著抑制作用。

2.2 “雅解沙把”对磷酸组织胺致痒作用的影响

参照文献［5］，取豚鼠40只，雌雄各半，随机分组同前。每天灌胃一次，连续5d;第4天，给各组豚鼠右后足背剃毛;第5天，末次给药1h后，用砂纸擦伤右后足背剃毛处，面积约1cm2，并在创面处滴0.01%磷酸组织胺0.05mL/只，此后每隔3min依0.02%，0.03%，0.04%……，递增浓度，每次均为0.05mL/只，直至出现豚鼠回头舔右后足，以最后出现豚鼠回头舔右后足时所给予的磷酸组织胺总量微克 (μg)为致痒阈，结果见表2。

表2 “雅解沙把”磷酸组织胺累计用量 (致痒阈)±s)

表2 “雅解沙把”磷酸组织胺累计用量 (致痒阈)±s)

注:与模型组对比，＊＊P＜0.01.

组别 剂量(g/kg)给药途径 例数 痒阈值(μg)模型组 ——Ig 10 6.15±2.53扑尔敏组 0.004 Ig 10 58.30±25.21＊＊高剂量组 2.097 Ig 10 54.00±34.28＊＊低剂量组 0.232 Ig 10 35.61±23.49＊＊

从表2可看出，扑尔敏组、“雅解沙把”高、低剂量组均能够增加组织胺涂抹次数及组织胺累计用量。

2.3 “雅解沙把”对DNFB诱发小鼠迟发型超敏反应的影响

参照文献［6］方法，健康昆明种小鼠50只，雌雄各半，随机分成5组，见表3。致敏期灌药自第一次涂药前2h开始，连续用药5d(第0，1，2，3，4天)。诱发期灌药时间为诱发前2h及诱发后6h。实验前一天在腹部固定部位3cm×3cm用剪刀及剃须刀去毛。实验第1、2天致敏期于去毛部位涂0.5%DNFB，每天1次，每次25μl，第3，4，5天不涂药。第6天 (诱发期)在小鼠左耳背涂0.2%DNFB20μl，诱发皮炎，右耳背涂4:1丙酮橄榄油20μl作对照。于诱发后24h，用直径0.9cm的金属打孔器在耳中部打孔，取下相同大小的耳片，称取其重量。用分析天平称得每个耳片的重量。计算诱发后左右耳肿胀度。结果见表3。

表3 雅解沙把DNFB所致小鼠迟发型超敏反应的影响 ?±s)

表3 雅解沙把DNFB所致小鼠迟发型超敏反应的影响 ?±s)

注:与正常组比较，*P＜0.05，与模型组比较，△P＜0.05.

组别 剂量 (g/kg) 例数 耳片重量差值 (g)正常组 ——10 0.0013±0.0009模型组 —— 10 0.0050±0.0043*氢化可的松 0.024 10 0.0008±0.0005△高剂量组 3.51 10 0.0012±0.0014△低剂量组0.39 10 0.0025±0.0019

从表3可看出:模型组与正常组比较，两组耳片重量差异有统计学意义 (P＜0.05);雅解沙把高剂量组、阳性药组耳片重量与模型组比较差异有统计学意义 (P＜0.05)。

2.4 统计方法

计量资料数据以均数x±标准差 (s)表示，数据符合正态分布、方差齐的数据进行方差分析;计量资料不符合正态分布，则用秩和检验。

3 讨论

傣医学认为，疾病的发生与体内各种毒素有关。机体内的脏腑功能代谢失调而内生毒素，导致体内“四塔五蕴”功能失调，风塔、火塔过剩，水塔不足，不能制火滋润肌肤，风热湿邪藴积于肌肤、皮下而发病［7］。傣医“解药”产生的理论基础是“毒”害人体论［8］。傣药“雅解沙把”是以傣医“雅解”理论为指导，以解药为主配伍，方中百样解，傣百解，定心藤，具有调平四塔，除风止痒，消疔疮之功，用于各种皮肤瘙痒、疔疖疮痈。白花臭牡丹根，奶子藤，性凉具有清火解毒，补气活血，养容颜之功，助主药增强疗效［9］。

小鼠异种被动皮肤过敏 (PCA)是由IgE类抗体介导引起的I型变态反应。IgE类抗体与肥大细胞表面特异受体结合形成IgE复合物，当受同种或异种抗原攻击时，引起肥大细胞脱颗粒，释放过敏介质 (组胺、慢反应物质等)，使局部皮肤血管通透性增加［10］。表明“雅解沙把”对I型变态反应有抑制作用，其作用主要与抗I型变态反应介质有关，其对IgE生成的影响值得进一步探索。

组胺为一种重要的炎症介质，并参与I型变态反应等引起皮肤瘙痒［11］。可能抑制抗原与IgE结合，抑制肥大细胞释放组胺等炎症介质，减少机体瘙痒，具有抗瘙痒、抗过敏的作用。迟发型超敏反应为Ⅳ型变态反应，由T淋巴细胞介导。本实验结果表明“雅解沙把”对DNFB诱发的小鼠迟发型超敏反应引起的耳肿胀具有抑制作用，提示“雅解沙把”能抑制细胞免疫功能，具有抗IV型变态反应的作用。

综上所述，本实验结果表明“雅解沙把”具有抗I、Ⅳ型变态反应及止痒的作用，为傣医解药治疗过敏性疾病提供了实验依据。

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