新生儿溶血病意外抗体检测分析

马宏伟 刘旭华

1.河南省红十字血液中心血型研究室，河南郑州 450012；2.郑州人民医院检验科，河南郑州 450003

新生儿溶血病意外抗体检测分析

马宏伟1刘旭华2

1.河南省红十字血液中心血型研究室，河南郑州 450012；2.郑州人民医院检验科，河南郑州 450003

目的 调查研究导致新生儿溶血病的意外抗体分布情况，为诊断和治疗提供支持。 方法 按照《全国临床检验操作规程》对573例病理性黄疸患儿标本进行溶血三项试验和血清胆红素测定，同时进行意外抗体筛选，阳性标本采用经典抗球蛋白法鉴定抗体特异性。 结果 共检出意外抗体阳性标本38例 （6.63%），其中Rh系统35例（92.1%）、MNS系统2例（5.3%）、Duffy系统1例（2.6%）。 结论 意外抗体的筛查和鉴定有助于新生儿溶血病的及时诊断和治疗，对提高生育质量具有重要意义。

新生儿溶血病；血型；意外抗体；检测分析

新生儿溶血病（hemolytic disease of newborn，HDN）是母婴血型不合引起的免疫溶血性疾病，来自母体的IgG抗体通过胎盘屏障进入患儿血循环与其红细胞上的相应抗原结合，导致红细胞在单核巨噬细胞系统内破坏，胆红素生成增多，可引起患儿贫血，水肿，严重时可导致核黄疸甚至死亡[1]。为研究ABO系统以外导致HDN的意外抗体分布情况，及时为诊断和治疗提供支持，减少新生儿的损伤，笔者对573例病理性黄疸患儿进行了意外抗体的调查研究，现将结果报道如下：

1 材料与方法

1.1 研究对象

2009年1月～2011年12月本室检测的疑似HDN的黄疸患儿共573例，年龄4 h～11 d。

1.2 试剂和仪器

抗-A、抗-B标准血清、ABO标准细胞、红细胞血型抗体筛选细胞、抗人球蛋白试剂（上海血液生物医药有限责任公司）；抗-D、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e、抗-M、抗-Fya、试剂谱细胞（美国Immucor公司）；微柱凝胶检测系统（长春博迅生物技术有限责任公司）；KA-2200型离心机（日本Kubota公司）。

1.3 方法

1.3.1 采用《全国临床检验操作规程》的方法[2]，对患儿标本进行溶血三项试验，包括红细胞直接抗球蛋白试验、血清中游离抗体测定以及红细胞抗体放散试验，同时进行血清胆红素定量检测。

1.3.2 使用微柱凝胶反应卡和红细胞血型抗体筛选细胞进行意外抗体筛选，检测ABO系统以外的血型抗体，将筛选细胞加入标记好的微柱中各1滴，然后加入被检者血清1滴，置37℃孵育15 min后用专用离心机离心5 min观察结果，红细胞凝集位于凝胶表面或凝胶中为阳性结果，红细胞完全沉降到管底为阴性结果，检测的同时设立阳性和阴性对照。

1.3.3 抗体特异性鉴定。直接抗球蛋白试验阳性和（或）意外抗体筛选阳性的患儿标本，应用经典抗球蛋白法对患儿及其母亲的血清进行抗体鉴定，根据试剂谱细胞反应格局确定抗体的特异性，同时使用抗体试剂检测母体对应的红细胞抗原，确认检出抗体的准确性。

2 结果

在573例疑似HDN的黄疸患儿中共检出意外抗体阳性标本38例，百分比为6.63%。经特异性鉴定，抗体包括3个血型系统，Rh系统 35例 （92.1%）、MNS系统2例 （5.3%）、Duffy系统1例（2.6%），血清胆红素含量超过342 μmol/L的患儿共10例（26.3%）。

抗体特异性鉴定及临床资料见表1。

3 讨论

新生儿溶血病是新生儿高胆红素血症的主要原因之一，对患儿的危害较为严重，如不能正确诊断，往往延误治疗的最佳时机，在国际输血协会（ISBT）命名的30个血型系统中，能够引起 HDN 的有 ABO、Rh、MNS、Kell、Duffy 等血型系统。在我国以ABO血型不合导致的HDN最为常见，但溶血程度通常不严重，大多数受累患儿病情较轻，及时采取蓝光照射、免疫球蛋白滴注即可治愈，极少发展为威胁生命的溶血，通常不需要换血治疗。笔者对病理性黄疸患儿ABO系统以外的血型抗体进行了检测分析，了解其他血型系统导致HDN的比例和严重程度。研究结果表明，有临床意义的意外抗体38例，比例为6.63%，与文献[3]报道的相似。血型抗体包括3个系统，以Rh系统最多，高达92.1%，MNS系统和Duffy系统较少。Rh系统抗体中又以抗-D最多，抗-E+c次之，频率依次为抗-D＞抗-E+c＞抗-E＞抗-D+C＞抗-Hro。

表1 抗体特异性鉴定结果及临床资料

高效价抗-D能够引起严重的HDN，如不及时治疗，可发展成胆红素脑病，造成婴儿早期死亡，或使存活者留下不可逆的神经系统后遗症。目前欧美发达国家已经广泛使用Rh免疫球蛋白（RhIG）来进行免疫预防，RhIG是人源IgG抗-D的浓缩物，在初次免疫的诱导阶段可以用于干扰抗原的识别，从而达到预防作用。一个剂量（1 500 IU）的抗-D可以中和15 mL的D阳性红细胞的免疫作用，Rh阴性孕妇分别在妊娠的28周和产后72 h内使用RhIG，能将产生抗D的风险降至0.1%，从而极大地减少抗D导致HDN的发生[1，4]。目前国内还没有常规使用RhIG进行HDN的预防，我国应积极研发国产RhIG制剂用于Rh阴性女性的免疫预防。

意外抗体主要是由输血或妊娠等免疫刺激产生，本研究检测出意外抗体的38例患儿母亲均有妊娠史和（或）输血史。因此要加强对育龄女性的宣传，尽量减少流产、刮宫等引起经胎盘出血而导致的同种免疫，积极开展围生期保健，孕期除了ABO血型系统的检测外，也要进行意外抗体的筛查，阳性者应进一步明确抗体的特异性和效价并定期监测，发现孕妇意外抗体效价持续升高，提示患HDN的可能性增大，孕妇可考虑进行血浆置换术和静脉注射免疫球蛋白，胎儿可采取宫内输血、计划分娩等治疗措施[5-6]。分娩后应及时监控患儿胆红素水平和胆红素累积的速率，结合临床表现采取蓝光照射、静脉滴注免疫球蛋白等手段进行治疗，严重者应采取换血疗法。本文检测的38例意外抗体阳性患儿中，达到换血标准的有10例，比例达到26.3%，根据抗体特异性及时选择对应抗原阴性的相容性血液进行换血，起到了满意的治疗效果。本文的研究表明，将意外抗体筛查纳入到围生期保健的常规检查内容，有利于HDN的及时诊断和治疗，对减少患儿损伤，提高生育质量具有重要意义。

[1]Basu S，Kaur R，Kaur G.Hemolytic disease of the fetus and newborn:Current trends and perspectives[J].Asian J Transfus Sci，2011，5（1）：3-7.

[2]叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].3版.南京：东南大学出版社，2006：266-271.

[3]Florea DP.The importance of laboratory diagnosis in allo-immunization through pregnancy and hemolytic disease of the newborn[J].Rev Med Chir Soc Med Nat Iasi，2010，114（1）：211-213.

[4]Jones ML，Wray J，Wight J，et al.A review of the clinical effectiveness of routine antenatal anti-D prophylaxis for rhesus-negative women who are pregnant[J].BJOG，2004，111（9）：892-902.

[5]Lindenburg IT，Smits-Wintjens VE，van Klink JM，et al.Long-term neurodevelopmental outcome after intrauterine transfusion for hemolytic disease of the fetus/newborn：the LOTUS study[J].Am J Obstet Gynecol，2012，206（2）：141-148.

[6]Lakhwani S，Machado P，Pecos P，et al.Kell hemolytic disease of the fetus.Combination treatment with plasmapheresis and intrauterine blood transfusion[J].Transfus Apher Sci，2011，45（1）：9-11.

Investigation of unexpected antibodies among hemolytic disease of newborn

MA Hongwei1LIU Xuhua2
1.He'nan Red Cross Blood Center,Zhengzhou 450012,China;2.Zhengzhou People's Hospital of He'nan Province,Zhengzhou 450003,China

Objective To investigate unexpected antibodies distribution in hemolytic disease of newborn.Methods Five hundred and seventy-three blood samples of newborn were detected.Hemolysis and bilirubin were tested according to National Guide to Clinical Laboratory Procedures.The unexpected antibodies were identified by classic indirect antiglobulin test.Results Thirty-eight(6.63%)samples were positive by antibody screen test.The unexpected antibodies included 35 cases(92.1%)Rh system antibodies,2 cases(5.3%)MNS system antibodies and 1 case (2.6%)Duffy system antibody.Conclusion Unexpected antibodies detection is helpful for clinical diagnosis and treatment of hemolytic disease of newborn.

Hemolytic disease of newborn;Blood group;Unexpected antibodies;Investigation

R446.62

A

1674-4721（2012）11（c）-0078-02

2012-08-29 本文编辑：郭静娟）