电项针干预对老年性痴呆大鼠5－HT及CHATmRNA的影响

霍 金，韩 数

(黑龙江中医药大学附属第二医院，黑龙江哈尔滨150001)

老年性痴呆(Senile Dementia)，即阿尔茨海默病(Alzheimer＇s disease，AD)是一种发生于老年前期或老年期，以进行性认知障碍和记忆能力损害为主的中枢神经系统退行性疾病。主要临床表现为进行性认知功能障碍和记忆力减退、性格和行为改变、社交障碍、生活自理能力丧失，最终死亡。目前我国正逐渐步入老龄化社会，因而研究老年性痴呆的防治方法已成为社会迫切需要[1]。本实验应用免疫组化及原位杂交法观察电项针干预对AD大鼠海马区5－hydroxytryptamine(5－HT)及乙酰胆碱转移酶(CHATmRNA)的影响，探讨电项针治疗AD的作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康雄性Sprague－Dawley(SD)大鼠40只，体重(350±50)g，由黑龙江中医药大学动物实验中心提供。按组编号分笼，自由饮水进食。

1.2 药品及试剂

无水氯化铝(天津市永大化学试剂开发中心)，D－半乳糖(上海源聚生物科技有限公司)，兔抗多克隆抗体(武汉博士德生物工程有限公司)。

1.3 主要实验仪器

德国菜卡2135型切片机，美国moticam3000显微摄影成像系统，上海一恒电热恒温箱，针灸针用华佗牌直径0.40 mm、长25 mm无菌针灸针，电针采用DJ－6805型脉冲电针仪。

1.4 实验方法

1.4.1 动物分组及造模方法

将40只大鼠随机分为空白组、假损伤组、模型对照组、电项针治疗组，每组10只。空白组给予常规饮水饲食;假损伤组给予常规饮食饲料，并胃饲及腹腔注射与模型对照组等容量之生理盐水;模型对照组每只大鼠每日胃饲 20 mg·ml－1的 AlCl3水溶液 2 ml，腹腔注射D－半乳糖(48 mg·kg－1)，连续8周;电项针治疗组造模处理同模型对照组。

1.4.2 治疗方法

穴位与针具常规消毒，按照中国针灸学会学术部提供的大鼠穴位图谱及比较解剖学取穴[2]，取大鼠项部双侧的“风池穴”、“供血穴”(颈4夹脊，深层布有椎动脉);使用0.40 mm×25 mm毫针直刺3 mm，后接DJ－6805型脉冲电针仪，导线分别上下连接针柄，正极连“风池穴”，负极连“供血穴”。采用疏密波，频率为5～30 Hz，疏密周期6 s，强度以项部肌肉出现轻微抽动为度，持续刺激20 min，每日1次，每针刺6天，休息1天，连续治疗4周。

空白组、假损伤组、模型对照组不进行针刺治疗，4组同步饲养。

1.4.3 阳性表达分析

使用美国motica3000显微摄影成像，于400倍镜下选取海马CA1－CA3区摄影，每组选取10例照片，在Motic image 3.2图像分析软件下进行分析，计算阳性表达的灰度平均值和平均光密度进行数据分析。

1.4.4 统计学处理

2 结果

2.1 电项针对AD大鼠5－HT活性的影响

模型对照组较空白组、假损伤组5－HT灰度平均值增高，平均光密度值下降(P＜0.05)，表明造模后5－HT阳性表达降低;电项针治疗后较模型对照组5－HT灰度平均值降低，平均光密度值增高(P＜0.05)，说明5－HT阳性表达有所恢复。见表1、图1。

表1 电项针对AD大鼠5－HT阳性表达的影响

图1 各组大鼠海马区5－HT的阳性表达

图2 各组大鼠海马区CHATmRNA的阳性表达

2.2 电项针对AD大鼠CHATmRNA的影响

模型对照组较空白组、假损伤组CHATmRNA灰度平均值增高，平均光密度值下降(P＜0.05)，表明造模后CHATmRNA阳性表达降低;电项针治疗后较模型对照组CHATmRNA灰度平均值降低，平均光密度值增高(P＜0.05)，说明CHATmRNA阳性表达增强。见表2、图2。

表2 电项针对AD大鼠CHATmRNA阳性表达的影响

3 讨论

老年性痴呆常见的病因病机为年老体衰、肾精不足、痰瘀阻络、髓海空虚，而其病性特点则以“本虚标实，督脉不通，瘀血阻脉”为要。督脉“起于下极之俞”，为元气之源，“入络脑”将脏腑精微输注入脑，充溢脑髓，奉养元神，督脉不通则脏腑精微输布受阻，髓海失养，元神失调，引起“善忘”、“失智”等痴呆病的典型表现。针对于此本实验采用针刺双侧“风池穴”及“供血穴”，辅以电针仪的电项针疗法治疗本病。“风池穴”属于足少阳胆经，其经筋在额角与阳跷脉并行进行左右交叉，而阳跷脉又从风府入脑，因此选取风池穴可使清阳得升，脑髓得补，其神自明[3]。“供血穴”为“新穴”，从其定位(风池穴下1.5寸，平下口唇处)上来说，足太阳、足少阳、督脉，三阳经皆纵贯与旁，而头为“诸阳之会”，阳经皆上参入脑，因而供血穴对“脉络瘀滞，髓海失养”所致的痴呆具有很好的治疗效果。“风池穴”及“供血穴”位于督脉两侧，针刺两穴符合“近部选穴”和“对症选穴”的选穴原则，通过电针可促使督脉输布顺畅，精微上达髓海奉养元神，元神得养，则痴呆对脑造成的损害均可得到改善。

5－HT作为单胺类神经递质，在脑内参与多种生理功能和病理状态调节，并与情绪智能密切相关。有研究证实，大部分AD患者脑内伴有5－HT系统损害，在额叶5－HT含量仅为原有的39%[4]。CHAT为胆碱能神经元的标志酶，在中枢神经系统内参与合成Ach，也可作为Ach含量的间接指标及胆碱能标志[5]。大量实验发现，AD患者常伴有胆碱能神经元缺失和变性，ChAT、AChE和Ach多功能在AD的发病中均有不同程度的损害[6]。在本实验模型对照组中，5－HT及ChATmRNA在复合损伤造模后均出现阳性表达减弱，与空白组及假损伤组差异显著(P＜0.05)。经过治疗后，5－HT及ChATmRNA的阳性表达均有不同程度的增强，与模型对照组有明显差异(P＜0.05)。

综上所述，本实验证明电项针治疗能够提高中枢单胺类神经递质代谢，并通过增强CHAT的阳性表达改善AD大鼠海马内胆碱能系统功能，从而发挥防治老年性痴呆的作用。

[1]陈可冀.老年性痴呆基础和临床研究进展思考[J].中国中西医结合杂志，1998，18(6):324 －326

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[4]马涤辉，刘晓亮，张昱，等.实验性Alzheimer模型鼠脑组织5－羟色胺含量改变的研究[J].中风与神经疾病杂志，1996，13(3):150

[5]Bisaglia M，Venezia V，Piccioli P，et al.Acetaminophen protects hipp－ocampal neurons and PC12 cultures from amyloid beta－peptides induced oxidative stress and reduces ChAT activation[J].Neurochem Int，2002，41(1):43 －54

[6]望庐山，周丽莎.电针治疗对阿尔茨海默病大鼠Ach、ChAT、AchE的影响[J].针灸临床杂志，2009，25(6):40－42