不同类型幽门螺杆菌致病力和耐药性差异的研究

白 玉，金 涌

（通化市人民医院 检验科，吉林 通化134001）

大量的流行病学调查证实，自然人群中幽门螺杆菌（HP）感染率相当高，HP在全球人群的感染率超过50%，而且随着年龄的增加有递增趋势［1］，而且感染情况与致病性因地域不同有很大差异，不同国家和地区分离的HP菌株基因结构呈现人群或地区性差异，因此HP致病差异性已引起人们重视，较多的研究表明HP的致病性主要与菌型差异、感染的年龄及机体的反应性、地域性、饮食习惯等有关［2］。Ⅱ型为不产细胞毒素的HP（CagA和VacA均不表达），其毒性较弱，感染后一般无临床症状［3］。本课题对不同HP菌型分组实施根治疗法，比较不同类型HP用不同的治疗方案治疗效果和耐药性差异，筛选出对不同类型HP更合理的根治方法。

1 资料与方法

1.1 对象 内镜活检胃黏膜组织切片病理诊断为HP感染的胃病患者516例，年龄15－76岁，平均40.2岁，其中慢性胃炎（CG）246例；消化性溃疡（PU）184例，胃癌（GC）86例。

1.2 试剂 幽门螺杆菌抗体分型检测试剂盒（免疫印迹法）购自深圳市伯劳特生物制品有限公司

1.3 方法 抽取待检者静脉血2ml，分离血清，按照试剂盒说明书操作，其检测原理：将提取的HP全菌体抗原（含有CagA、VacA和尿素酶A、B亚单位等）用聚丙烯酰胺凝胶电泳按分子量大小不同依次分开，电转印至印迹膜上，与待检者血清反应，如果被检血清中含有HP抗体，会与印迹膜上相应HP

抗原结合，加入酶联第二抗体和显色剂，HP抗原位置即出现显色带，与HP抗体标准区带比较，即可判断出何种HP感染：CagA和（或）VacA抗体阳性为Ⅰ型HP，仅出现尿素酶抗体为Ⅱ型HP，CagA、VacA和尿素酶抗体均不出现为HP阴性。对HP抗体阳性者随机分两组进行治疗，第一组方案（三联疗法）：奥美拉唑20mg，克拉霉素500mg，呋喃唑酮100mg口服，均为2次／天，连续七天，一个疗程。第二组方案（四联疗法）：奥美拉唑20mg，克拉霉素500mg，阿莫西林750mg，果胶铋200mg口服，均为2次／天，连续七天。5－6个月后进行HP抗体复检，观察两组治疗效果。

1.4 统计学处理 用SPSS13.0软件包，以病理诊断结果为金标准，计算免疫印迹检测HP的阳性符合率。不同类型胃病HP阳性率差异采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同胃病患者两型HP阳性率差异 在516例确诊为HP感染者中，免疫印迹检测Ⅰ型HP阳性408例，Ⅱ型HP阳性102例，HP抗体总阳性数为510例，阳性符合率为98.84%（510／516），其中Ⅰ型 HP阳性率为79.06%，Ⅱ型 HP阳性率为19.76%，Ⅰ型 HP阳性率明显高于Ⅱ型（P＜0.01），其在CG，PU和GC中阳性率分别为63.41%、93.47%和93.02%。CG组与PU、GC组均有显著异差（P＜0.01），PU和GC组无明显差异（P＞0.05），见表1。

表1 516例HP感染者免疫印迹分型结果

2.2 不同类型 HP对三联疗法耐药性差异：本文对156例感染Ⅰ型HP和84例感染Ⅱ型HP患者分别实施三联疗法，5个月后有101个Ⅰ型HP患者抗体转为阴性，HP根除率为64.74%；71个Ⅱ型HP患者抗体转为阴性，HP根除率为84.82%。Ⅱ型HP根除率明显高于Ⅰ型HP（P＜0.05），说明Ⅰ型HP对三联疗法比Ⅱ型HP耐药性高，见表2。

2.3 不同类型 HP对四联疗法耐药性差异：本文对252例感染Ⅰ型HP和18例感染Ⅱ型HP患者分别实施四联疗法，5个月后有206个Ⅰ型HP患者抗体转为阴性，HP根除率为81.74%；16个Ⅱ型HP患者抗体转为阴性，HP根除率为88.88%。Ⅱ型HP根除率与Ⅰ型HP无明显差异（P＞0.05），说明Ⅰ型HP和Ⅱ型HP对四联疗法均有较高的敏感性，见表3。

表2 不同类型HP对三联疗法耐药性差异比较

表3 不同类型HP对四联疗法耐药性差异比较

3 讨论

因为不同的HP菌株其生物学特性、致病性和耐药性有明显的差异，各国学者不断寻找HP分型的方法，目前通常采用免疫分型，细胞毒性试验或RT－PCR等方法。免疫分型是指采用免疫学方法检测HP感染者血中针对HP特异抗原的抗体，利用抗体的差异区分HP菌株的类型常用有血清凝集反应、酶联免疫吸附反应和免疫印迹法［3］。本文采用免疫印迹法检测能较全面反映人体对所感染HP菌株的体液免疫反应状况，对研究不同HP菌型在不同疾病发生发展中的作用和HP分型诊断均有重要的意义。Xiang Z等对43个HP临床株分析发现表达CagA和VacA的Ⅰ型HP占56%［4］。李鑫检测1462例腹痛患儿HP抗体，其中Ⅰ型HP占57.96%，Ⅱ型 HP占42.03%［5］。张永顶等报道在115例HP抗体阳性的胃病患者中，Ⅰ型HP占81.03%，Ⅱ型HP占18.10%，Ⅰ型 HP在慢性胃炎，消化性溃疡和胃癌的阳性率分别为58.69%、95.45%和96.15%，表明Ⅰ型HP感染更易致严重的消化道疾病［6］。本文用免疫印迹检测516例确诊为HP感染的胃病患者，Ⅰ型HP阳性率为79.06%，Ⅱ型HP阳性率为19.76%，Ⅰ型 HP阳性率明显高于Ⅱ型（P＜0.01），其在CG，PU和GC中阳性率分别为63.41%、93.47%和93.02%。可见Ⅰ型HP比Ⅱ型HP具有更强的致病力，易引起较严重的胃病。所以临床上不能仅限于检出HP，还要进一步对HP分型，这对胃十二指肠疾病的病因学诊断和针对性治疗有着重要的意义。

明确HP在消化性溃疡发病上的重要作用后，人们对HP感染的治疗进行过许多研究和尝试，并从不断的研究和尝试中寻找到了一些治疗HP感染的有效方案，有人认为随着HP根除治疗进展，胃溃疡和十二指肠溃疡很快将成为一个历史性疾病。但目前要彻底根除HP仍然是比较困难的。因为还没有一个单一的抗生素对HP感染的治疗是有效的，必须采用多种抗生素联合治疗才能有效。二联疗法HP的根除率很低，三联或四联疗法才能达到比较理想的治疗效果，但联合的抗生素越多，副作用发生的频率越高，经费开支也更大，且随着HP耐药菌株的不断增加，使药物根除HP的难度越来越大。HP的耐药率在不同国家或地区不尽相同，国外报道的Hp对甲硝唑耐药率为20%－80%（平均30%－40%），对克拉霉素耐药率为1%－20%，Hp对甲硝唑和克拉霉素的耐药率正呈世界范围上升趋势［7－9］。治疗方案的不规范、病人依从性差、滥用抗生素，导致Hp的耐药现象比较严重。史彤等报道，我国上海地区自1995年至1999年Hp菌株对甲硝唑的耐药率已从42%上升至70%，对克拉霉素的耐药率从0%升至10%。成虹等对北京地区幽门螺杆菌耐药的发生率研究发现，甲硝唑耐药率最高达到37%，克拉霉素的耐药率也达到13%，并已经出现阿莫西林的耐药菌株［10］。目前常用的Hp根除方案为质子泵抑制剂（PPI）或铋剂加2种抗生素，后者在世界范围内较常用的包括克拉霉素、甲硝唑、呋喃唑酮、阿莫西林等。本文对HP抗体阳性者分两组进行治疗，第一组方案（三联疗法）：奥美拉唑20mg克拉霉素500mg，呋喃唑酮100mg口服，均为2次／天，连续七天，一个疗程。第二组方案（四联疗法）：奥美拉唑20mg，果胶铋200mg，克拉霉素500 mg，阿莫西林750mg口服，均为2次／天，连续七天。三联疗法对Ⅰ型HP根除率为64.74%；Ⅱ型HP根除率为84.82%。Ⅱ型HP根除率明显高于Ⅰ型HP（P＜0.05），说明Ⅰ型HP对三联疗法比Ⅱ型HP耐药性高。四联疗法对Ⅰ型和Ⅱ型HP根除率分别为81.74%和88.88%。两者无明显差异（P＞0.05），说明Ⅰ型HP和Ⅱ型HP对四联疗法均有较高的敏感性。可见Ⅰ型HP比Ⅱ型HP更易产生耐药性，而四联疗法比三联疗法更有效的减少HP耐药株。

本文研究结果提示：①不同类型HP致病力和耐药性有明显差异，Ⅰ型HP比Ⅱ型HP有更强的致病力和耐药性，更易致消化性溃疡和胃癌等严重的消化道疾病，临床上不能仅限于检出HP，还要进一步对HP分型，针对致病性强的Ⅰ型HP根除治疗，减少抗生素的滥用。②对HP根除建议联合用药，本文采用的四联疗法比三联疗法更有效的减少HP耐药株，提高HP根除率。

［1］胡茯莲.幽门螺杆菌感染的流行病学［J］.中国医刊，2007，42（2）：17.

［2］张万岱，徐智民.幽门螺杆菌免疫分型的研究［J］.世界华人消化杂志，2002，10（5）：509.

［3］余悠悠，沈 霞.免疫印迹法检测幽门螺杆菌及其分型的临床应用［J］.现代免疫学，2004，24（6）：511.

［4］Ziang Z，Censini S，Bayeli PF，et al.Analysis of expression of CagA and VacA virulence factors in 43strains of Helicobacter pylori reveals that clinical isolates can be divided into two major types and that CagA is not necessary for expression of the vacuolating cytotoxin［J］.Infect Immun，1995，63：94.

［5］李 鑫.1462例幽门螺杆菌抗体检测的临床价值探讨［J］.安徽卫生职业技术学院学报，2004，3（3）：15.

［6］张永顶，王启之.不同类型幽门螺杆菌与胃十二指肠疾病关系的研究［J］.实用全科医学，2006，4（4）：441.

［7］Cameron EA.Powell KE，Baldwin L et al.Helicobacter pylori antibiotic resistance and eradication rate in Suffolk，UK.1991－2001［J］.J Med Microbiol.2004，53（Pt6）：17.

［8］Masuda H，Hiyama T，Yashihara M，et al.Characteristics and trends of clarithromycin－resistant Helicobacter pylori isolates in Japan over a decade［J］.Pathobiology.2004，71（3）：159.

［9］Megraud F.H pylori antibiotic resistance：prevalence，importance and advances in testing［J］.Gut.2004，53（9）：1374.

［10］帅晓玮，谢鹏雁.幽门螺杆菌的耐药［J］.中国医刊，2005，40（1）：27.