AMI患者ALOX5AP基因SG13S114位点SNP与ARPs的关系

孙晓盈，谢 风，金 玲，王 海

（吉林大学中日联谊医院，吉林 长春130033）

目前已有研究表明5脂氧合酶激活蛋白（ALOX5AP）基因SG13Sll4A／T的遗传变异性与中国人群缺血性卒中有显著相关性，但与心肌梗死（AMI）和急性冠脉综合征（ACS）的易感性尚不明确。

1 对象与方法

1.1 实验对象

2006年10月－2007年8月吉林大学中日联谊医院住院的AMI患者72例，男39例，平均年龄58岁；女33例，平均年龄62岁。诊断符合WHO心肌梗死的诊断标准。同时对照组冠心病78例，男43例，平均年龄61岁，女35例，平均年龄63岁。诊断符合WHO冠心病的诊断标准，部分经冠状动脉造影证实。

1.2 方法

1.2.1 EDTA抗凝血提取白细胞进行基因检测；另取枸橼酸钠抗凝血检测血浆Fbg，并对血清进行其它相关指标检测。

1.2.2 外周血基因组DNA提取，PCR扩增DNA引物设计：

上游：F：5′－GTGTTCAGGAAGGGAGTTTC TGT－3′；

下游：R：5′－GTCTATGGTTGCAACATTGAGATTA－3′。

1.2.3 Ase I限制性内切酶酶切PCR一RFLP内切酶在线软件分析，并行1%琼脂糖凝胶电泳。

1.3 统计学分析

采用统计软件SPSS11.5分析，其中两组（心肌梗死组与对照组）Fbgβ455G／A基因频率及等位基因频率分布进行χ2检验。

2 结果

2.1 ALOX5AP基因SG13S114位点SNP分布图

图1中显示从左向右第一条带是maker带；第二和第四条带为正常基因T／T型；第三条带为异常突变杂合子T／A型；第四条带为未经酶切的ALOX5AP基因SG13S114位点，SNP为限制性内切酶Hse I公司为验证是否酶切有效而固定设置的酶切位点位于分子量989处。

2.2 心肌梗死组与冠心病组患者外周血基因组ALOX5AP基因SG13S114位点SNP分布 见表1。

2.3 心肌梗死组与冠心病组ALOX5AP基因SG13S114位点SNP分布与血浆纤维蛋白原浓度的关系 心肌梗死组与冠心病组A／A、T／A基因型血浆纤维蛋白原浓度均明显高于T／T基因型，而且存在明显正相关（P＜0.005），且心肌梗死组血浆纤维蛋白原浓度明显高于冠心病组。见表2。

图1 ALOX5AP基因SG13S114位点SNP分布

表1 心肌梗死组与冠心病组患者外周血基因组ALOX5AP基因SG13S114位点SNP分布［n，%］

表2 心肌梗死组与冠心病组Fbgβ455多态性分布与血浆纤维蛋白原浓度的关系

2.4 心肌梗死组与冠心病组ALOX5AP基因SG13S114位点SNP分布与血浆高敏CRP浓度的关系

心肌梗死组与冠心病组中血浆高敏CRP与ALOX5AP基因SG13S114位点SNP分布有显著相关性（P＜0.05），且心肌梗死患者血浆高敏CRP浓度明显高于对照组（P＜0.005）。见表3。

3 讨论

ALOXSAP是LTs合成及5LO催化作用所必须的蛋白质，也是通过5LO通路促进AS的发生、发展的重要激活蛋白［1］。有种假说认为：各种刺激诱导动脉血管壁中泡沫细胞，巨噬细胞、树突状细胞，并使细胞内cPLA2活性激活，经5LO途径生成LTs。现知LTs受体可由平滑肌细胞、内皮细胞，巨噬细胞、T细胞及肥大细胞表达［2－3］。所以始动于动脉血管壁炎症的5LO蛋白形成通路是动脉硬化形成的主要发病机制之一。LTs分别以分旁泌或自分泌方式与这些促进炎症发展的细胞中LTs受体结合并发挥作用，例如促进白血胞参与内皮细胞的黏附、白细胞的趋化作用、促进平滑肌增生及血栓形成等，进而促进冠脉粥样硬化的发生和发展。本研究结果显示心肌梗死组与冠心病组患者外周血基因组ALOX5AP基因SG13S114位点多态性分布T／T，T／A，A／A 具有显著性差异（P＜0.05），而且SG13S114A／A频率与心肌梗死的发生有显著正相关。本研究中在ALOX5AP基因SG13S114A／A的AMI患者中，血浆FBg及hs－CRP水平显著高于对照组，而ALOX5AP基因SG13S114A／A多态位点与中国人群MI有显著相关性。这可能表明ALOX5AP基因的异常遗传表型参与了心肌梗死的发生和发展以及梗死后心室重构的整个过程。

表3 心肌梗死组与冠心病组Fbgβ455多态性分布与血浆高敏CRP浓度的关系

［1］Lotzera K，Fullk CD，Habenicht AJR.The liP oxygenase Pathway inarterial wall Biology and atheroselerosis［J］.Biochimieaet Bio Psiea Aeta，2005，1736：30.

［2］HanssonGK.I unemee hanismsin atheroselerosis［J］.Arterioseler Thromb Vase Biol，2001，21：187.

［3］StoenRA，JaeobsonBS.Modulation of cell substrate adhesion by a raehidonie acid liPoxygenase regulates cells Preading and ERKI／inducible cyclo oxygenase regulate seemigrationin N3T3fibroblasts［J］.Mol Biol Cell，2001，12：1937.