5-Fu与三种抗癌药对大肠实体瘤的联合用药体外药敏试验

王海燕

通常情况下的体外药敏试验采用单药进行研究，因此得到的结果仅为单药的体外敏感性，这与临床上采用的联合化疗结果可能存在差异，不能够真实反映出联合化疗过程中各个药物间的拮抗、相加或协同作用［1］。因此，本研究采用甲基噻唑基四唑方法对114例大肠癌细胞开展不同化疗药物的体外敏感性测定，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 我院自2009年12月至2011年12月期间共收治114例大肠癌患者，其中男50例，女64例;年龄33～82岁，平均为(65.1±11.7)岁;其中50例为直肠癌，64例为结肠癌;病理检查结果显示均为腺癌，其中中分化腺癌90例、中-低分化腺癌18例，低分化腺癌6例。

1.2 抗癌药物工作液 抗癌药物均使用生理盐水进行配制，并于-20℃保存备用。其中氟尿嘧啶(5-Fu)的质量终浓度为100 mg/L;丝裂霉素(MMC)终浓度10 mg/L;顺氯氨铂(DDP)为20 mg/L;卡铂(CBDCA)为50 mg/L。综合分析药敏试验结果进行筛选，最终确定化疗方法包括:5-Fu+MMC;5-Fu+DDP;5-Fu+CBDCA。上述药物的终质量浓度同单药使用浓度相同。

1.3 方法 应用手术剪刀将大肠癌标本剪碎，对于较小且较硬的瘤体，可采用0.2 mg/ml的胶原酶以及脱氧核糖核酸酶进行消化，通过筛网过滤，用RPMI 1640培养液制成1×106～5×106个细胞/ml的癌细胞悬液，置于96孔培养板中［2］。分别设置给药组、对照组以及空白组，给药组给予抗癌药，保证单药与联合用药均达到终质量浓度;对照组未给予抗癌药;空白组仅给予培养液，且无大肠癌细胞。温度为37℃时CO2(5%)培养72 h。每孔内加入20 μl以生理盐水配置而成的MTT(5 mg/ml)溶液，待4～8 h后每孔再加入浓度为10%的十二烷基硫酸钠100 μl，于第2天通过微量盘读数仪在570 nm波长下记录各孔光密度(D)值。抗癌药抑制率(%)=(1-D给药组/D对照组)×100%。评价两种药物联用的拮抗、协同或相加效应根据金氏公式观察q值［2］。公式为q=EA+B/EA+EB-EA×E B。其中的EA+B表示两药联用抑制率;EA与EB表示单用时抑制率;q大于1.15代表两药联用发挥协同作用;q小于0.85代表两药联用发挥拮抗作用;0.85≤q≤1.15代表两药联用发挥相加作用［3］。

1.4 数据统计学分析 采用SPSS 16.0软件进行统计分析，计量资料采用均数±标准差(±s)表示，组间比较进行t检验，组间率的比较进行χ2检验，对于P＜0.05代表差异具有统计学意义。

2 结果

在全部大肠癌细胞中，对照组D值小于0.1者14例。联用抗癌药物对100例大肠癌细胞的抑制率高于单独用药，其中DDP组与5-Fu+DDP组，CBDCA组与5-Fu+CBDCA组相比，差异显著(P＜0.01)，具有统计学意义。见表1。按照3组联用方案得到对100例大肠癌细胞发挥作用的体外抑制率，得到其q值，并根据金氏公式得到5-Fu+MMC联合给药后q=1.002±0.253，出现拮抗者为22例、相加者为52例、协同者为26例;5-Fu+DDP组的q=1.042±0.283，出现拮抗者为20例、相加者为38例、协同者为42例;5-Fu+CBDCA组的q=1.194±0.259，出现拮抗者为14例、相加者为46例、协同者为40例。

表1 三种药物单用以及同5-Fu联用后对大肠癌细胞的抑制率［n=100，(±s)，%］

表1 三种药物单用以及同5-Fu联用后对大肠癌细胞的抑制率［n=100，(±s)，%］

注:同单药组相比，＊＊P＜0.01

?

3 讨论

目前治疗大肠癌的主要方法是以5-Fu为基础用药的联合化疗过程。联合用药能够产生协同作用，其临床疗效比各单药之和要好得多。但是，必须考虑到的是联合用药也可能出现疗效下降，即发生拮抗的可能性，倘若不合理的联合用药将给患者带来不堪设想的后果。5-Fu能够阻碍DNA的合成，造成癌细胞因DNA合成受阻而死亡;DDP、MMC以及CBDCA能够破坏DNA结构，进而将癌细胞杀灭［4］。所以将5-Fu与上述三种药物联合用药能够发挥互补性作用，从理论上分析应当具有协同作用，联合给药后其临床疗效应该好于单用5-Fu。本研究的体外药敏试验测定结果也的确证实了上述观点。据此，我们推测大肠癌细胞体外联合药敏试验可能与临床化疗效果存在一定的相关性，能够有助于临床选择具有协同作用、摒弃具有拮抗作用的化疗药物组合。总之，体外抗癌药物合用药敏试验是切实可行的，但其与临床疗效是否具有相关性尚不能确定，随着将来对联合用药各药物之间作用机理研究全面开展，必将建立起更为科学的体外联合药敏试验方法。

［1］翟晓波，李炳生，张毅，等.MTT法和双琼脂MTT法测肿瘤药敏及其临床应用.中国临床药学杂志，1996，5(3):102.

［2］侯华新，黎丹戎，秦菁，等.黄芩黄酮A对人肝癌细胞7402的抑制能力及体外增效作用.中国临床药学杂志，2000，9(3):166.

［3］潘启超，胥彬.肿瘤药理学与化学治疗学.第2版.郑州:河南医科大学出版社，2000:626-637.

［4］任建林，田林，梁建芳.大肠癌细胞原代培养及5-氟脲嘧啶药敏检测的研究.山西医药杂志，2010，17(9):824-826.