托吡酯片降解产物的HPLC法测定研究

孙 伟，丛晓丽，李一鸣，张坚杯

（杭州民生滨江制药有限公司 质量部，浙江 杭州 310000）

托吡酯片含活性成分托吡酯，其化学名称为2，3：4，5－双－0－（1－甲基亚乙基）－β－D 吡喃果糖氨基磺酸酯，分子式为C12H21NO8S，分子量为339.36。托吡酯为广谱抗癫痫新药，对各类癫痫发作均有效，对肌阵挛、婴儿痉挛也有效。如今，制剂成品中存在的杂质的控制越来越受到大家的重视，本文对托吡酯片生产或存放过程中新产生或增加的降解产物进行分析研究，从而能更有效地控制药品的质量。

1 材料与溶液制备

1.1 药品与试剂

托吡酯标准品，托吡酯杂质2标准品，托吡酯片，乙腈。

1.2 仪器

Waters2695高效液相色谱仪；Waters2414示差折光检测器；电子天平：XS105DU。

1.3 溶液制备

1.3.1 流动相

量取乙腈和超纯水各500mL（50∶50），混匀，超声脱气。

1.3.2 标准贮备液

称取25mgTop－imp－2和10mg的托吡酯RS到50mL的容量瓶中，加入流动相适量，超声使溶解，再用流动相稀释至刻度。

1.3.3 标准溶液

移取5.0mL上述贮备液到25mL的量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

1.3.4 分离度（SS）溶液

称取托吡酯API200mg置于10mL的量瓶中，吸取标准贮备液5.0mL、流动相2.0mL，超声溶解，再用流动相稀释至刻度，摇匀。

1.3.5 样品溶液

取不少于20片样品，称重，磨成细粉。精密称定适量样品粉末（相当于500mg托吡酯）至25mL量瓶中，加入20mL流动相，超声10min，随后振摇30min。再用流动相稀释至刻度并混匀，用0.45μm尼龙滤膜过滤，弃去初滤液3mL，收集续滤液。

1.4 色谱条件及系统适用性

流速：1.2mL／min ；柱温：35℃ ；进样量20μL。取 SS溶液进样，Top－imp－2的相对于托吡酯的保留时间为0.90，与托吡酯的分离度不小于1.0。连续6次标准溶液进样，Top－imp－2和托吡酯的峰面积相应的RSD不大于5.0%。

2 方法与结果

2.1 系统适用性实验

分离度（SS）溶液进样所得图谱中Top－imp－2的保留时间为7.443，相对保留时间为0.90，Top－imp－2与托吡酯的分离度（R）为2.2＞1.0。连续进6针的标准溶液中Topimp－2的峰响应的RSD为0.9%＜5.0%，托吡酯峰响应的RSD为1.1%＜5.0%，符合规定。SS溶液色谱见图1。

图1 SS溶液进样色谱

2.2 Top－imp－2的线性范围

分别配制Top－imp－2的浓度为10、20、30、50、100、150μg／mL的溶液，进样测试，相关系数为0.999 9。故线性范围为10～150μg／mL。线性表见图2。

图2 托吡酯杂质2定量线性范围

2.3 Top－imp－2的测定定量限

配制托吡酯杂质2浓度为10μg／mL的溶液，重复6次进样所得Top－imp－2的峰面积的RSD为2.9%。

2.4 精密度试验

配制三个浓度水平（10%，100%，150%）每个水平3份的掺有托吡酯杂质2的托吡酯片样品溶液，测试得到托吡酯杂质2的平均回收率为101.1%。见表1。

2.5 专属性考察

考察药品在各种强化条件下如加热、加热／高湿、光照、酸、碱、氧化剂破坏下的降解情况，评估分析方法对可能产生的降解产物的分析能力以及药片空白辅料对降解产物测试的影响。结果发现：空白辅料对测试没有干扰，该药品在加热、加热／高湿、光照、碱、氧化剂强化条件下均比较稳定，未产生新的降解产物；而在酸破坏下托吡酯杂质2没有显著的增加趋势，却出现了两个未知杂质，保留时间分别为4.983min和5.869min，与 Top－imp－2及主峰能够有较好的分离。见图3。

表1 托吡酯杂质2（Top－imp－2）测试的回收率

图3 酸破坏样品降解产物色谱

2.6 耐用性

耐用性主要是考察该方法是否能够承受某些参数轻微的变动，如HPLC系统参数以及样品溶液制备时参数改变。本试验按表2设计进行试验。

表2 耐用性试验条件

HPLC系统的参数的轻微改变对系统适用性没有影响，Top－imp－2的相对保留时间为0.90，Top－imp－2与托吡酯的分离度（R）均＞1.0。样品溶液制备时的参数的改变对降解产物的测定没有影响，没有杂质的峰的出现或消失，各种条件下杂质概况一致。

3 结论

通过对药片进行系统适用性、线性、定量限、精密度、专属性、耐用性项目的研究分析，认为该方法稳定可靠，具有良好的准确度、专属性和耐用性，方法灵敏度高，能够用于降解产物的定量检测。