附子和硫磺及其配伍对腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠肾功能影响分析

易英豪，史会杰，杜晟楠，吴 琪，王友群

（中国药科大学 药理研究室，江苏 南京210009）

腺嘌呤诱发小鼠慢性肾衰（CRF），表现为血中BUN和Cr升高，电解质紊乱，营养不良，肾实质损害、肾小管结晶沉积等，与临床CRF患者极为相似。中医认为CRF发病机理内因主要是脾肾阳虚［1，2］。附子有回阳救逆、补火助阳之功效，主治阳虚阴盛之证；硫磺内服补火助阳通便，张锡纯善用生硫磺治阳虚，认为其效捷而无附子之升发之弊［3］。干姜具有温中散寒、回阳通脉等功效。本实验考察附子和硫磺及其配伍干姜对CRF小鼠肾功能的保护作用，详述如下。

1 材料

1.1 药品与试剂

腺嘌呤（批号9905078，上海博蕴有限公司）；硫磺（批号20101101，南京晚晴有限公司）；川附子，干姜购自南京先声大药房。Cr等试剂盒购于南京建成生物工程研究所。

1.2 动物与仪器

雄性清洁级小鼠100只，体重（25±2）g，购自南京青龙山动物繁殖厂，合格证号SCXK（苏）2007－0001。

721型分光光度计（上海第三分析仪器厂）；0412－1型低速离心机（上海医疗器械集团）；BS－110－S型电子天平（北京赛多利斯公司）。

2 方法

2.1 实验药物

取附子100g，加1 000mL水，煮沸60min，过滤，滤渣再加800mL水以相同方法煮沸、过滤，合并两次滤液，浓缩至200mL，即附子水煎剂（0.5g／mL）；取附子和干姜各100g，以同法得到附子干姜水煎液。将1g硫磺溶于100mL 0.5%羧甲基纤维素钠中，即0.01g／mL硫磺悬浊液。

2.2 动物分组及给药方案

将小鼠随机分为五组：对照组、模型组、硫磺附子组、附子干姜组和硫磺附子干姜组。按照Yokozawa T等［4］曾报道的方法，后四组小鼠灌胃给予腺嘌呤（第1周和第2～4周剂量分别为250和130mg／kg，每2天给药1次）。从第2周起SF、FG和SFG组小鼠再对应给予“2.1”项下制备的附子水煎剂（5g／kg），附子干姜水煎剂和硫磺悬浊液（0.1g／kg），每10g体重0.1mL，共4周。

2.3 考察指标

（1）动物一般情况：观察小鼠活动情况，每2天记录1次体重、摄食量、饮水量。

（2）生化指标：第4周末，眼球取血，测定血清Cr、BUN；取右侧肾脏和睾丸称重，计算肾系数（肾质量／体重）和睾丸系数（睾丸质量／体重）；测定肾组织GSH、MDA和γ－GT含量。

2.4 统计学处理

采用t检验分析数据，结果以方差表示。

3 结果

3.1 动物一般情况

与C组相比，M组小鼠体重下降，摄食量减少，饮水量升高，反应迟钝；各治疗组小鼠状态较模型组有好转，饮食稍增，但与模型组体重及摄食变化均无显著性差异。

3.2 肾系数、睾丸系数、血清肌酐和尿素氮变化

在第4周末，从每组随机抽取8只小鼠进行指标测定。与C组相比，M组小鼠肾系数显著升高。与M组相比，SF、FG和SFG组小鼠肾系数显著降低（P＜0.05）。各组睾丸系数无显著性差异。M组小鼠血清Cr、BUN均显著高于对照组；FG组Cr显著低于M组；三个给药组BUN均显著低于模型组，见表1。

表1 肾系数、睾丸系数、血清肌酐和尿素氮测定结果（s，n＝8）

表1 肾系数、睾丸系数、血清肌酐和尿素氮测定结果（s，n＝8）

注：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001，与 C组比较；＃P＜0.05，＃＃P＜0.01，＃＃＃P＜0.001，与 M 组比较。

?

3.3 肾组织生化指标变化

肉眼观察C组小鼠肾脏呈蚕豆样，质地柔软表面光滑；而M组小鼠肾脏肥大苍白，表面凹凸不平。肾组织生化指标结果显示，M组小鼠肾组织GSH显著高于C组，而γ－GT和MDA显著低于C组（P＜0.001）。SF和SFG组GSH显著低于M组，γ－GT显著高于M组；MDA三个给药组均显著高于模型组，见表2。

表2 谷胱甘肽、γ－谷氨酰转肽酶、丙二醛测定结果（s，n＝8）

表2 谷胱甘肽、γ－谷氨酰转肽酶、丙二醛测定结果（s，n＝8）

注：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001，与 C组比较；＃P＜0.05，＃＃P＜0.01，＃＃＃P＜0.001，与 M 组比较。

?

4 讨论

本实验结果表明，M组小鼠血清Cr和BUN均显著升高约为C组3倍，肾脏肿大苍白，典型的“大白肾”，肾脏系数显著增加，表明肾功能严重受损，使内生肌酐清除率下降，肌酐排出减少，同时蛋白质分解代谢增强使尿素氮升高，表明此模型已造成肾损伤。FG组小鼠Cr显著低于M组。三个给药组BUN均显著低于M组，表明可能通过促进毒素排泄缓解肾脏水肿。M组小鼠肾脏MDA显著低于C组，而GSH含量显著高于C组，说明模型组小鼠肾脏中与氧化还原相关的酶处于低活性状态，这可能是腺嘌呤引起肾阳虚的机制之一。SF和SFG组小鼠肾组织GSH显著低于M组，三个给药组MDA均显著高于M组，SF和SFG组γ－GT均显著高于M组，提示硫磺和附子可能通过改善肾脏的能量供应，促进GSH利用。此外，M组肾脏γ－GT显著降低，说明模型组肾脏催化谷胱甘肽等物质能力受到限制，能量供应不足。这可能是由于肾脏功能受到严重伤害，肾小球滤过率增加，肾小管重吸收功能下降，导致该酶部分随着尿液丢失。

对综合实验结果分析表明，附子和硫磺配伍干姜后对腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠肾功能有显著改善作用，附子和硫磺可能通过激活相关黄嘌呤氧化还原酶的Fe－S中心，而产生肾脏保护作用，其机制还有待进一步研究。

［1］邵命海，肖静，王毅兴，等.从"肾主生殖"角度评价腺嘌呤与氢化可的松诱导的肾阳虚模型［J］.上海中医药杂志，2008，42（2）：57－59.

［2］郑平东，朱燕俐，丁名城，等.腺嘌呤诱发"肾阳虚"动物模型的研制［J］.中国医药学报，1990，5（3）：68－73.

［3］姜敏.王琦老师用硫磺温阳一则［J］.世界中西医结合杂志，2010，05（9）：800.

［4］YOKOZAWA T，ZHENG P D，OURA H，et al.Animal model of adenine－induced chronic renal failure in rats［J］.Nephron，1986，44（3）：230－234.