刘 悦
(南京中医药大学研究生院,江苏 南京 210046)
双氯芬酸钠滴眼液为《中华人民共和国国家药品标准新药转正标准》第30册收载的品种,主要成分为双氯芬酸钠。临床上主要用于治疗葡萄膜炎、角膜炎、巩膜炎等感染,其疗效确切、副作用小。滴眼液中含活性成分玻璃酸钠(Sodium hyaluronate,SH)又称透明质酸钠,是透明质酸(Hyaluronic acid,HA)的钠盐形式,是葡糖醛酸-N-乙酰氨基葡糖为双糖单位组成的直链高分子酸性黏多糖,广泛分布于动物和人体结缔组织细胞外基质中,具有非常好的生物相容性,用于治疗关节炎、干眼症、皮肤溃疡等。玻璃酸钠在眼科的应用最早始于治疗干眼症,因其具有粘弹性流变学特性被提议用作人工泪液成分之一,可延长泪膜破裂时间,促进浅表角膜溃疡的愈合,并且具有良好的舒适性和保水性[1]。但含玻璃酸钠的双氯芬酸钠滴眼液标准中未对玻璃酸钠进行质量控制[2],笔者采用凝胶渗透色谱法测定双氯芬酸钠滴眼液中玻璃酸钠的含量,方法简便,结果准确,专属性强,可有效控制产品的质量,报道如下。
色谱仪:美国Agilent公司Agilent1120高效液相色谱仪;检测器:示差折光检测器(RI);对照品:玻璃酸钠原料(山东正大福瑞达制药有限公司,纯度:99.0%);双氯芬酸钠滴眼液(含玻璃酸钠):自制样品(批号: 111001, 111002, 111003);水为Milli-Q超纯水;其它试剂均为分析纯。
色谱柱:Shodex SB 805HQ(300mm×8mm)(多糖用凝胶色谱柱);流动相:0.2mol/L 硝酸钠水溶液(含0.02%叠氮钠);流速:0.3mL/min;柱温40℃。
供试品溶液的配制:以样品溶液作为供试品溶液,采用0.45μm为空滤膜过滤后进行测定;对照品溶液的配制:精密玻璃酸钠原料适量,加水溶解并制成每lmL中约含0.1 mg的玻璃酸钠溶液,摇匀,即得;空白溶液的配制:按处方量制备成不含玻璃酸钠的阴性样品适量,作为空白溶液。精密吸取上述溶液20μL,注入液相色谱仪,使主成分峰与其它杂质峰分离度符合要求。
结果:对照样品与供试品溶液出现了相同的色谱峰,主峰与其它色谱峰分离度良好,空白样品在相同的保留时间没有出现色谱峰,说明双氯芬酸钠原料及其它辅料不干扰测定,本方法专属性较好,如图1所示。
图1 专属性试验
取玻璃酸钠原料10mg,精密稳定,置100mL容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀;分另精密吸取3、4、5、6、7mL置10mL量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,浓度分别为30、40、50、60、70μg/mL。分别取上述溶液20μL注入液相色谱仪,记录色谱图,以浓度C为横坐标,以峰面积Y为纵坐标,得回归方程:Y=2000.4C-19615,r=0.996。表明玻璃酸钠在30~70μg/mL浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。
按处方量的80%、100%、120%称取玻璃酸钠原料各3份,按处方量加入其它原辅料制成供试品进样测定,以外标法,按照当日标准曲线计算玻璃酸钠的回收率。回收率为98.5%、98.6%和98.3%,平均回收率为:98.5%,RSD%为0.59%,说明本法的准确度良好,见表1。
取上述供试品溶液,分别于第0、2、4、6、8h精密量取供试品溶液20μL注入液相色谱仪,记录色谱图,计算峰面积的平均值为78 921,RSD为1.07%,说明本品的水溶液在8h内稳定性良好。
精密吸取样品溶液20μL,连续进样6次,峰面积分别为77596、78123、76899、77254、77028、77444,RSD%为0.57%,说明此方法的精密度良好。
按上述方法对自制的3批样品进行测定,测得玻璃酸钠含量相当于标示量的99.2%,RSD%为0.78%。结果见表2。
表1 回收率试验结果 (n=3)
表2 三批样品含量测定结果
双氯芬酸钠滴眼液(含玻璃酸钠)为眼科临床常用药,其主要成分双氯芬酸钠具有较好的抗感染效果,活性成分玻璃酸钠作为其辅料,因其具有非牛顿流体的特性和极好的生物相容性、耐受性,粘度随切变力的增大而明显减小,使药液的粘度很高,眼脸仍可眨动自如,没有粘糊的感觉。因为这些优点,使其成为滴眼液的良好载体,多用于干眼症、眼角膜损伤等眼科疾病治疗。目前文献报道玻璃酸钠的含量测定多采用咔唑比色法[3],笔者在研究该方法时发现重复测定误差较大,且样品处理较为复杂。为选用更为简便准确的测定方法,考虑玻璃酸钠为大分子酸性粘多糖,没有紫外吸收,本研究选择凝胶渗透色谱法,采用示差折光检测器对双氯芬酸钠滴眼液(含玻璃酸钠)进行测定。结果显示,本研究所建立的方法准确度良好,适用于本品中玻璃酸钠的含量测定。
[1] 高启合,邹志红.滴眼液中玻璃酸钠含量测定方法研究[J].亚太传统医药,2007,21(09):38-39.
[2] 国家药典委员会.双氯芬酸钠滴眼液国家药品标准(WS1-X-059-2002Z)[M].北京:人民卫生出版社,2002.
[3] 郭桂芬.玻璃酸钠在滴眼液和干眼治疗中的应用[J].亚太传统医药,2009,5(10):125.