高效液相色谱法测定伤科筋骨水中盐酸小檗碱含量

冯建峰，彭宗玢

（常熟市中医院 药剂科，江苏 常熟215500）

外用伤科伤科筋骨水是以黄柏、黄连、紫草、山栀子等药经醇提水沉后制成的外用水剂，我院临床应用多年，具有清热解毒、活血化於、消炎止痛、祛腐生肌之功效。黄柏、黄连在处方中是主药，小檗碱是其主要成分［1］。本文采用高效液相色谱法对其主要成分进行了含量测定，为该药的质量控制提供了可行的手段。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

安捷伦1100高效液相色谱仪，Zorbax Eclipse XDBC18色谱柱（46mm×150mm，5μm），KQ250B型超声清洗器（昆山超声仪器有限公司），JA2003N电子天平（上海精密科学仪器有限公司）。

1.2 试剂

盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号0713－200107，供含量测定用），伤科筋骨水由常熟市中医院制剂室提供（批号：100122，101018，111111），甲醇、乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适应性

色谱柱为Zorbax Eclipse XDB C18柱（46mm 150mm，5μm）；流动相：乙腈－水（55：45）（每1L水中含5.4g磷酸二氢钾和3.4g十二烷基硫酸钠）；检测波长345nm；柱温为室温；流速为10mL·min－1。理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3 000。

2.2 对照品溶液制备

称取经105℃干燥2h的盐酸小檗碱对照品约24mg，精密称定，置25mL容量瓶内，加甲醇溶解并稀释至刻度得盐酸小檗碱溶液（0.96mg·mL－1），精密吸取该溶液1.0mL至50mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度即得（含有盐酸小檗碱19.2μg·mL－1）。

2.3 供试品溶液制备

精密移取伤科筋骨水5.0mL，置25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，超声处理10min，静置1h左右，取上清液过膜（以0.45μm微孔滤膜减压过滤），精密移取续滤液2.0mL，置10mL容量瓶中，加流动相至刻度即得。

2.4 阴性对照液的制备

按伤科筋骨水处方制备不含黄柏、黄连药材的阴性样品，按“2.3”项下制备方法制成阴性对照溶液。

2.5 系统适用性试验

按上述色谱条件精密吸取对照品溶液和供试品溶液阴性对照溶液各10μL，分别注入HPLC仪，记录色谱图。盐酸小檗碱保留时间约为12.6min，阴性对照液在与盐酸小檗碱对照品相同保留时间处未显示明显的色谱峰，故认为无干扰。结果见图1。

图1 样品HPLC色谱

2.6 线性关系考察

精密吸取盐酸小檗碱对照溶液（19.2μg·mL－1）2，4，6，8，10，20μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定。以对照品质量为横坐标，对照品峰面积为纵坐标，进行线性回归。得线性回归方程为 Y＝101772X－301713（r＝0.9999）。盐酸小檗碱进样量在0.0384～0.0.384μg·mL－1范围内相应峰面积和进样量呈良好线性关系。

2.7 重复性实验

精密量取10μL的对照品溶液，重复进样6次，按上述色谱条件测盐酸小檗碱峰面积，得峰面积RSD＝0.96%（n＝6），结果表明实验精密度良好。

2.8 稳定性实验

取10μL的对照品溶液在放置0，0.5，1，2，4，8h后注入色谱柱，按上述色谱条件进样，RSD＝1.19%（n＝6），结果表明8h内测得结果较稳定。

2.9 回收率实验

采用加样回收法。精密量取已知含量的样品（批号100122）5mL，分别加入不同体积的盐酸小檗碱溶液（0.96mg·mL－1）1.5，1.8，2.2mL，按样品含量测定方法操作，测定并计算回收率，结果见表1。

表1 加样回收试验结果

2.10 样品测定

取3批样品，按上述供试品溶液制备方法制备供试品溶液，依上述色谱条件测定含量，分别进样10μL，记录色谱图，按外标法计算样品中盐酸小檗碱的含量。结果见表2。

表2 盐酸小檗碱的含量

3 讨论

（1）本品为中药提取的外用合剂，用甲醇来处理样品：①所测成分小檗碱在甲醇中溶解较好［2］，②可以使样品中的多糖物质得到沉淀，从而避免多糖类对色谱柱的堵塞。

（2）对盐酸小檗碱含量测定，经过方法筛选［3］，以乙腈－水（55：45）（每1L水中含5.4g磷酸二氢钾和3.4g十二烷基硫酸钠）为流动相，基线分离好，以HPLC法测定，操作简便，结果准确，可作为伤科筋骨水质量控制的测定方法。

［1］国家药典委员会.中国药典［S］.一部.北京：化学工业出版社，2005.

［2］傅秀娟.HPLC法测定复方岗松洗液中盐酸小檗碱含量［J］.泸州医学院学报，2008，31（55）：513.

［3］沈炜.HPLC测定妇洗康洗剂中盐酸小檗碱含量［J］.海峡药学，2010，22（9）：56.