HPLC法测定肝脂消胶囊中大黄素的含量

郑 佳

（岳阳职业技术学院 生物医药系，湖南 岳阳414000）

近年来，随着人们生活水平提高，脂肪肝在我国的发病率呈上升趋势。脂肪肝可发展成脂肪性肝炎、肝纤维化、肝硬化，严重者可发展成肝癌。目前，临床尚无治疗脂肪肝的特效药物。从天然产物中研究新的药物制剂防治本病，已成为研究课题之一。肝脂消胶囊主要由虎杖、大黄、山楂、柴胡等中药组成，具有降脂、利胆、消炎的作用，特别是对脂肪肝有较好的治疗作用，其中虎杖为君药，大黄为臣药，而虎杖和大黄主要药效成分为蒽醌类物质（其中大黄素含量较高），具有保肝利胆降脂的功效。为便于临床应用，笔者拟对其质量标准进行研究，采用HPLC法测定了肝脂消胶囊中大黄素的含量，现报道如下。

1 试药与仪器

肝脂消胶囊（同济医院药学部提供）；虎杖、大黄、山楂、柴胡等药材（武汉国药集团提供）；大黄素（批号：110756－200110，中国药品生物制品检定所）。甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。美国Agilent 1100型高效液相色谱仪，包括7725i进样阀；UV－265FW型可见紫外分光光度计（日本岛津）；SCQ－250型超声波提取仪（上海申波超声公司）；AUW 220D型双量程分析天平（日本岛津）。

2 大黄素含量测定［1－2］

2.1 色谱条件

色谱柱为 Hypersil－ODS 4.6mm×200mm（5μm）；流动相：甲醇－0.1%磷酸（80：20）；流速：0.8mL／min，检测波长：254nm，柱温：40℃，进样量10μL。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取大黄素对照品0.04122g于100mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，精密吸取10mL于50mL量瓶，加甲醇至刻度，制成每1mL含大黄素82.44μg的溶液。

2.3 供试品溶液的制备

精密称取肝脂消胶囊粉末1g，加入25mL氯仿和2.5mol／mL硫酸20mL，80℃水浴回流2h，冷却称定，氯仿补重，精密量取三氯甲烷10mL，蒸干，加甲醇溶解，移至10mL容量瓶中，定容，摇匀，即得。

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，结果见图1。

图1 大黄素对照品和肝脂消胶囊高效液相色谱

2.4 阴性样品溶液的制备

取缺虎杖、大黄药材的其它药材，按供试品制备方法得到阴性样品溶液。

2.5 线性范围

精密量取大黄素对照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、5.0mL分别置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度。分别精密吸取上述对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定峰面积积分值。以大黄素峰面积的积分值A为纵坐标，对照品溶液浓度C为横坐标，作线性回归分析，得大黄素回归方程：A＝64.41C＋218.85，r＝0.9997，说明大黄素在4.122～41.22μg／mL浓度范围内呈良好线性关系。

2.6 精密度试验

准确吸取对照品溶液10μL，重复进样6次，测定峰面积，大黄素RSD为1.07%。

2.7 稳定性试验

精密吸取新制备的供试品溶液，每隔2h进样测定1次，共测定6次。结果供试品中的大黄素的RSD为0.86%，表明供试品溶液在12h内稳定。

2.8 回收率试验

精密称取已知含量的供试品粉末（批号070101），分别加入质量浓度为37.64μg／mL的大黄素对照品溶液3、4、5mL，同“2.3”项下方法，制成供试品溶液，吸取10μL，进样分析2次，记录色谱图，计算回收率，结果见表1。

表1 回收率试验

2.9 样品含量测定

参照“2.3”项下方法操作，制备供试品溶液，精密吸取样品溶液，注入液相色谱仪，依法测定，结果见表2。

表2 样品含量测定结果

本品每粒以大黄素计算，暂定为：不得少于0.0383mg。

3 讨论

大黄素是分布最广泛的一种蒽醌类物质，具有保肝利胆、降脂消炎等多种生物活性，是虎杖和大黄主要有效成分之一［3］。HPLC测定肝脂消胶囊中大黄素含量的方法学考察结果表明，在254nm检测波长下，以甲醇－0.1%磷酸（80：20）为流动相，该方法在4.122μg／mL～41.22μg／mL间线性关系良好，重复性和稳定性良好，加样回收试验回收率达99.47%，RSD值为0.37%。该方法准确，稳定可靠，可作为大黄素的定量控制方法。

本研究参照《中华人民共和国药典》2010版一部虎杖项下大黄素含量测定方法制订肝脂消胶囊的含量测定方法，通过5个批次大黄素的含量测定，得到足够数据表明各批样品大黄素含量均处于0.0383mg／粒以上，且各批样品含量均高于这一数据，据此确定本品含大黄素不少于0.0383mg／粒。经过上述HPLC试验，为肝脂消胶囊的质量标准的提高提供了大量实验数据，在生产中能更好地控制本制剂的质量。

［1］王娟，袁绍莉.HPLC法测定护肝宁胶囊中大黄素的含量［J］.亚太传统医药，2010，6（10）：25－26.

［2］金鑫，曲佳，李时放.HPLC法测定麻仁胶囊中大黄素及大黄酚的含量［J］.天津药学，2011，23（4）：17－19.

［3］裴莲花，吴学，金光洙.虎杖化学成分及药理作用研究现状［J］.延边大学医学学报，2006，29（2）：147－149.