大蒜素对肉鸡免疫器官发育及T淋巴细胞阳性率的影响

吕全云 陈仕强 刘照雷 赵祥伟 李云龙 （山东省沂水县畜牧局 276400）



大蒜素对肉鸡免疫器官发育及T淋巴细胞阳性率的影响

吕全云 陈仕强 刘照雷 赵祥伟 李云龙 （山东省沂水县畜牧局 276400）

试验共选用72只1日龄AA肉鸡，随机分成4组。I组饲喂基础日粮为对照组，II、III、IV组分别在基础日粮中添加12.5、37.5、62.5mg/kg的大蒜素。将肉鸡饲养至21、28、35、42日龄进行相应处理，测定了21、35日龄肉鸡免疫器官的相对重量及28、42日龄肉鸡T淋巴细胞阳性率。测定结果表明，大蒜素处理的II、III、IV组的肉鸡，35日龄法氏囊重量均比对照组显著增加(P<0.05)，III、IV组21日龄胸腺和IV组35日龄脾脏重量均比对照组显著增加(P<0.05)。T淋巴细胞阳性率相比，III、IV组28和42日龄T淋巴细胞阳性率明显高于对照组(P<0.05)。所以，在日粮中添加大蒜素，可促进21、35日龄肉鸡免疫器官发育和28、42日龄肉鸡血液T淋巴细胞增殖和成熟。

肉鸡 大蒜素 免疫器官 T淋巴细胞阳性

大蒜为百合科二年生草本植物的鳞茎，其性温而味辛酸，归肺、脾、胃、大肠、肝、肾经。具有健胃消食，杀虫解毒、祛痰止咳，疗疮治癣等功效。大蒜素是用大蒜提取得到的大蒜油或人工合成的大蒜油为原料，将其吸附于一定的载体，制成固态的添加剂大蒜素。

大蒜素能够刺激食欲，提高营养物质的利用率，增强新陈代谢；可预防疾病，增强机体免疫功能；降低食品胆固醇；不在食用畜禽产品中形成有害残留，无耐药性和公害；资源丰富，且价格便宜，使用方便，因此，大蒜素对于畜牧业生产有广阔的应用前景。

大蒜及大蒜素对心血管和免疫系统有有益影响[1]。大蒜素能提高体细胞的免疫功能，可能是一种较好的免疫激发性中草药。黄霞[2]等在大蒜油对小鼠免疫功能影响的试验中发现，服药组的脾脏、胸腺的重量均有增加，提高细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫功能。西山信好[3]等对绵羊红细胞PFC抗体试验表明，大蒜提取液几乎能完全抑制胸腺摘除引起的免疫功能低下。大蒜素还能明显提高淋巴细胞转化率及T淋巴细胞酸性α-醋酸萘酯(ANAB)阳性率的作用，使中枢淋巴器官和外周淋巴器官增殖，增强细胞免疫功能[4,5]。大蒜素作为一种免疫调节剂，在抗CMV感染模型中，能增强小鼠巨噬细胞功能，通过上调IFN-γ水平而发挥抗CMV感染效应[6]。Ghazaanfari(2000)报道，大蒜新素可增强Th1细胞分化并发挥免疫效应[7]，Lamm等(2001)报道，大蒜新素能够刺激淋巴细胞增殖及增强巨噬细胞吞噬功能，刺激释放IL-2，IFN-γ和Th1类细胞因子[8]；在人医临床抗肿瘤研究中，大蒜提取物能促进IL-2和IFN-γ的分泌，增强NK细胞和淋巴细胞活性[9]。

本试验在肉鸡日粮中添加不同水平的大蒜素，通过生长发育期主要免疫器官重量和T淋巴细胞阳性率指标的测定，对大蒜素影响肉鸡免疫系统进行了初步探讨，从而为大蒜素对肉鸡生产中的应用提供一定的理论依据。

1 材料和方法

1.1 试验动物及分组 将72只1日龄AA肉鸡随机分成4个组，每组设3个重复，每个重复6只鸡。试验期采用网上平养，免疫与饲养管理按肉仔鸡饲养管理的常规程序进行，饲养6周。

1.2 大蒜素 大蒜素(纯品)由山东省饲料监察所提供。

1.3 试验日粮 按NRC(1994)肉鸡饲养标准，配制玉米-豆粕型基础日粮，其配方组成及营养水平见表1。I组饲喂基础日粮为对照组，II、III、IV组分别在基础日粮中添加12.5mg/kg、37.5mg/kg及62.5mg/kg的大蒜素。

表1 基础日粮组成及营养水平 (%)

1.4 免疫程序与饲养管理 免疫程序：7日龄新城疫Lasota系冻干苗点眼滴鼻，12日龄法氏囊疫苗点眼滴鼻，21日龄法氏囊疫苗点眼滴鼻，28日龄新城疫Lasota系冻干苗肌肉注射。网上平养，自由采食和饮水，试验期6周。

1.5 样品采集与处理 于21、35日龄，每个重复随机取2只(公母各1只)处死后剖开腹腔剥离法氏囊、脾脏和胸腺并称重；于28、42日龄，每个重复随机取2只(公母各1只)翅静脉采血，将采集的血液加肝素抗凝。

1.6 测定指标和方法 （1）测定指标：①免疫器官相对重量＝免疫器官重(mg)/活重(100g)。②血液中T淋巴细胞阳性率的测定，将28、42日龄抗凝血1ml，当日用酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)染色法[10]测定。（2）测定方法：①主要试剂：淋巴细胞分离液(由上海试剂二厂提供)。2.5%的戊二醛(固定液)，在0.01mol/L pH值7.4磷酸盐缓冲液9ml中加入25%戊二醛1ml，混合，置4℃冰箱中保存备用。副品红液：将副品红4g加入2 mol/L盐酸100ml，37℃溶解过滤，4℃冰箱中保存。4%亚硝酸钠溶液：取亚硝酸钠400mg溶于蒸馏水10ml中，临用前配制。六偶氮副品红溶液：取所配制的亚硝酸钠溶液3ml，慢慢滴入副品红溶液3ml中，边滴边搅拌，此时有刺激性气体产生。充分混合1min后备用。α-醋酸萘酯溶液：2g溶于丙酮100ml。1/15mol/L pH7.6磷酸盐液(甲液：KH2PO49.08g加蒸馏水至1000ml。乙液：Na2HPO49.74g加蒸馏水至1000ml)。取甲液13ml，加入乙液87ml，即为1/15mol/LpH7.6磷酸盐液。反应液：1/15mol/LpH7.6磷酸盐液89ml，缓慢加入六偶氮副品红溶液6ml，缓慢加入α-醋酸萘酯溶液2.5ml，充分混匀，调pH5.8~6.0，临用前配制。甲基绿染色液：甲基绿1g置37℃溶解于100ml蒸馏水中，4℃冰箱中保存备用。②方法：分离淋巴细胞：取抗凝血1ml，加入1ml Hank’s 液稀释，然后将其加到含有2ml淋巴细胞分离液的离心管中，1500rpm离心10min，将悬浮的淋巴细胞取出，用Hank’s液洗涤后，加少量Hank’s液摇匀。制片：取上述细胞悬液1滴，加到洁净玻片上，涂片，自然干燥。固定染色：将制备的细胞涂片用2.5%戊二醛4℃固定10min，流水冲洗，待干。将玻片置于盛有反应液的染色缸内，37℃孵育1h，取出用水冲洗，待干。复染：用甲基绿染色液染30S，水洗，吹干。油镜下观察计数。

1.7 数据统计分析 用SPASS统计软件进行方差分析，用邓肯氏法进行多重比较。

2 结果与分析

2.1 免疫器官重量 肉鸡21、35日龄法氏囊、脾脏和胸腺的相对重量。测定结果见表2。

表2 肉鸡21、35日龄法氏囊、脾脏和胸腺的相对重量(mg/100g)

注：同列数据肩标不同者表示差异显著(P<0.05)；无肩标者表示差异不显著(P>0.05)。

表2中，21日龄法氏囊、脾脏的相对重量各组间相比无显著差异(P>0.05)，但有随大蒜素添加水平升高而增加的趋势；胸腺相对重量III、IV组比对照组显著增加(P<0.05)。35日龄法氏囊相对重量组间相比，II、III、IV组比对照组显著增加(P<0.05)；脾脏相对重量，IV组显著高于其余各组(P<0.05)；胸腺相对重量虽组间差异不显著(P>0.05)，但随大蒜素添加量升高有增加的趋势。

试验结果显示，日粮中添加大蒜素对肉鸡法氏囊、脾脏和胸腺发育有促进作用。生长前期对胸腺发育影响最明显，生长后期对法氏囊和脾脏的发育影响最明显。35日龄上述免疫器官相对重量值与21日龄比较，法氏囊和脾脏明显降低，胸腺有所提高。

2.2 T淋巴细胞阳性率 测定结果见表3。

表3 肉鸡28、42日龄的T淋巴细胞阳性率 (%)

注：同行数据肩标不同字母表示差异显著(P<0.05)；相同字母表示差异不显著(P>0.05)。

由表3分析：28和42日龄，肉鸡的T淋巴细胞阳性率组间相比，III、IV组比对照组显著升高(P<0.05)。IV组T淋巴细胞阳性率最高。42日龄肉鸡T淋巴细胞阳性率与28日龄相比有降低的趋势，这与后期免疫器官相对重量降低的趋势一致。

3 讨论

3.1 大蒜素对肉鸡法氏囊发育的影响 本试验添加大蒜素对肉鸡免疫器官发育的影响表明，21日龄肉鸡试验组法氏囊的相对重量比对照组高，35日龄肉鸡法氏囊相对重量显著高于对照组，由于法氏囊是禽类B淋巴细胞发育成熟的地方，大蒜素通过影响法氏囊的发育，促进B淋巴细胞的生长，从而提高肉鸡的免疫功能。肉鸡生长后期法氏囊相对重量较前期降低，B淋巴细胞生长受阻，免疫机能降低。

3.2 大蒜素对肉鸡脾脏发育的影响 大蒜素对脾脏发育的影响表明，在免疫后14d，大蒜素3个处理组脾脏相对重量都高于对照组，免疫后28d，大蒜素3个处理组脾脏相对重量也都高于对照组，而且IV组脾脏相对重量显著高于对照组。说明大蒜素有延缓脾脏萎缩的作用。

3.3 大蒜素对肉鸡胸腺发育的影响 大蒜素对胸腺的影响表明，在免疫后14d，大蒜素3个处理组鸡的胸腺相对重量都高于对照组，而且III、IV组显著高于对照组；免疫后28d，大蒜素3个处理组鸡的胸腺相对重量也都高于对照组。由于胸腺是机体T淋巴细胞发育的地方，因此，与对照组相比，大蒜素3个水平都有不同程度的促进胸腺发育的功能，促进T淋巴细胞增殖和成熟，延缓胸腺的萎缩，维持机体的正常免疫功能。

3.4 大蒜素对肉鸡T淋巴细胞阳性率的影响 T淋巴细胞是细胞免疫中不断再循环的主要成分，在衰老过程中，循环T细胞等发生质和量的变化引起免疫潜能的降低[11]，许多资料证明T淋巴细胞功能下降是机体老化的主要免疫学变化，老年人的T淋巴细胞数量、单核细胞反应和T淋巴细胞对最适宜的丝裂原刺激作用，均由于反应细胞的数目下降和细胞的倍增能力下降而降低[12]。因此，T淋巴细胞的数量、质量是否正常，关系到机体细胞的免疫功能。酸性α—醋酸萘酯酶(ANAE)是成熟T细胞含有的酶，用它识别外周血液中成熟T淋巴细胞。在一定条件下，T淋巴细胞阳性率(ANAE+%)反映T淋巴细胞数量的变化，很好反映机体细胞免疫机能的高低和评价抗病力的强弱。本试验在肉鸡日粮中添加12.5~62.5mg/kg的大蒜素，明显提高了肉鸡血液T淋巴细胞阳性率。Ghazaanfari(2000)报道，大蒜新素可增强Th1细胞分化并发挥免疫效应[7]，Lamm等(2001)报道，大蒜新素能够刺激淋巴细胞增殖及增强巨噬细胞吞噬功能，刺激释放IL-2，IFN-γ和Th1类细胞因子[8]。IL-2，IFN-γ和Th1类细胞因子介导T淋巴细胞的大部分效应发挥免疫作用。可见，大蒜素能够促进T淋巴细胞增殖和成熟，进一步调节和提高肉鸡细胞免疫功能。

4 结论

该试验中，12.5mg/kg的大蒜素添加量对21日龄脾脏和35日龄胸腺促进发育作用最明显；37.5mg/kg的大蒜素添加量对35日龄法氏囊促进发育作用最明显；62.5mg/kg的大蒜素添加量对21日龄法氏囊和胸腺、35日龄脾脏发育及28、42日龄T淋巴细胞增殖促进作用最明显，且除35日龄脾脏外，37.5mg/kg的大蒜素添加量与62.5mg/kg的大蒜素添加量对21日龄法氏囊和28、42日龄T淋巴细胞增殖差异不大。综上，不同添加量的大蒜素可不同程度地促进21、35日龄肉鸡免疫器官发育和28、42日龄肉鸡血液T淋巴细胞增殖和成熟。

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（2011–12–12）

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1007-1733(2012)03-0007-03