6种栽培品种南瓜提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究

李昌勤，卢 引，顾雪竹，顾海鹏，康文艺，*

(1.河南大学中药研究所，河南开封 475004;

2.中国中医研究院中药研究所，北京 100700)

6种栽培品种南瓜提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究

李昌勤1，卢 引1，顾雪竹2，顾海鹏1，康文艺1，*

(1.河南大学中药研究所，河南开封 475004;

2.中国中医研究院中药研究所，北京 100700)

目的:对6种不同栽培品种南瓜(金钩、甜面、日本、辽宁新民金钩、超甜蜜本、蜜本)提取物α－葡萄糖苷酶抑制活性进行研究。方法:通过建立体外α－葡萄糖苷酶抑制模型，对南瓜提取物进行活性筛选，并对提取物浓度与抑制活性关系进行研究。结果:6种栽培品种南瓜不同溶剂提取物均有一定的α－葡萄糖苷酶抑制活性，其中，金钩南瓜石油醚提取物的抑制活性最好(IC50=143.91μg/mL)，活性远大于阳性对照阿卡波糖(IC50=1103.01μg/mL)。不同溶剂提取物显示石油醚提取物抑制活性均高于乙酸乙酯提取物和甲醇提取物。结论:6种栽培品种南瓜提取物均有一定的α－葡萄糖苷酶抑制活性，但不同品种其抑制活性具有一定的差别。

南瓜，α－葡萄糖苷酶，抑制活性

葫芦科南瓜属植物南瓜(Cucurbita moschataDuch.)，又名麦瓜、番南瓜、倭瓜等，为一年生蔓生草本。世界各地均有栽培，尤以亚洲栽培面积最多。味甘，性平，归肺、脾、胃经［1］。其果实含有糖类，醇类，酸类，苷类，脂类，碱类等化合物［2－3］。南瓜的药用价值高，能解毒，保护肝肾功能，具有抗氧化，降血糖，降血脂，预防动脉粥样硬化和冠心病，防治癌症，保护视力，能控制体重起到减肥作用，促进胃肠蠕动防治便秘，还具有辅助治疗前列腺炎等功能［4－9］。α－葡萄糖苷酶抑制剂可竞争性抑制小肠内α－葡萄糖苷酶的活性，延缓或抑制葡萄糖在肠道的吸收，从而有效降低餐后高血糖。由于此类降糖药的特点主要是降低餐后血糖而对降低空腹血糖无作用、安全和不增加胰岛素的分泌，且在禁食状态下服用该类药不会降低血糖，主要用于单用磺脲类或双胍类餐后血糖控制不理想的患者，或单独用于较轻的餐后血糖高者，目前已被广泛用于糖尿病及其并发症的防治，临床上主要使用阿卡波糖和伏格列波糖等。对于南瓜降血糖作用的研究国内外早有报道，研究表明南瓜具有很好的降糖作用，且其起到降糖作用的主要为南瓜多糖，并且具有剂量依赖性，但是在治疗糖尿病时并不能作为主要药物，而是起到一个辅助治疗作用［10－12］。金晖等［13］对南瓜降血糖作用机制进行了研究，结果表明南瓜多糖的降血糖作用不是通过抑制α－葡萄糖苷酶的活性实现的，而是通过其它途径实现的。但是南瓜体内降糖作用与其体外抑制α－葡萄糖苷酶究竟有没有相关性还需要进一步研究。且不同品种南瓜的α－葡萄糖苷酶抑制活性还未见报道。本文利用体外抑制α－葡萄糖苷酶模型对6种不同栽培品种南瓜:金钩南瓜、甜面大南瓜、日本南瓜、超甜蜜本南瓜、蜜本南瓜、辽宁新民金钩南瓜的α－葡萄糖苷酶抑制活性进行评价，为南瓜的研究开发提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

金钩南瓜种子 青县现代农业科技推广中心生产;甜面大南瓜种子 山西省太谷县艺农种子有限公司生产;日本南瓜种子 济南绿禾农业科技开发有限公司生产;超甜蜜本南瓜种子 山西科达丰种业有限公司生产;蜜本南瓜种子 辽宁省新民市财源菜籽店生产;辽宁新民金钩南瓜种子 中国辽宁新民市北方蔬菜种子行生产，于2011年5月播种于河南大学中药研究所药用植物园，2011年9月收获南瓜果实，经河南大学中药研究所李昌勤副教授鉴定为葫芦科南瓜属植物南瓜(Cucurbita moschataDuch.)的果实，标本存在于河南大学中药研究所; α－葡萄糖苷酶(α－glucosidase，EC3.2.1.20)、4－硝基苯－α－D－吡喃葡萄糖苷(4－N－trophenyl－α－D－glucopyranoside，PNPG，026K1516)、阿 卡 波 糖(Acarbose，Lot16869)、二甲亚砜(DMSO) 美国Sigma公司;其他试剂均为分析纯。

Multiskan MK3酶标仪 美国Thermo Electron公司;LRH－150恒温培养箱 上海一恒科技有限公司; DELTA 320型 pH计、电子天平 美国 Mettler－Toledo公司;旋转蒸发仪 德国 Heidolph公司; TGL－16高速离心机 江苏金坛市中大仪器厂。

1.2 实验方法

1.2.1 活性成分的提取 南瓜果实切片阴干粉碎，各称取100g，依次用两倍量石油醚，乙酸乙酯，甲醇索氏回流提取2次，分别为4h和3h，合并提取液，减压回收提取溶剂，浓缩得南瓜石油醚提取物(CMPE)、乙酸乙酯提取物(CMEA)和甲醇提取物(CMME)。

1.2.2 α－葡萄糖苷酶抑制活性的筛选方法 将南瓜各提取物以DMSO溶解，并存储于4℃冰箱中。用张丽［14］等建立的96微孔板筛选方法，405nm处检测其OD值，每个样品平行测定3次。同时做相同体系下的样品空白组，不加样品、酶与底物的空白对照组、不加样品的阴性对照组和以阿卡波糖为抑制剂的阳性对照组。并用Origin软件求出相应的IC50值。酶活性抑制率公式为:酶活性抑制率(%)=(OD样品阴性－OD样品空白)/(OD阴性－OD空白)×100。

2 结果与分析

2.1 各南瓜提取物得率

由表1结果可得，各品种南瓜提取得到的浸膏中石油醚和乙酸乙酯提取部位得率较少，相对而言甲醇提取部位得率较高，这跟南瓜果实中含有成分的脂溶性有关。

表1 各品种南瓜提取物得率Table 1 The yield of extracts from six varieties of C.moschata

2.2 南瓜提取物α-葡萄糖苷酶抑制活性

6种南瓜提取物不同部位的α－葡萄糖苷酶抑制活性见表2。

表2显示，6种南瓜提取物在初筛浓度均为1500μg/mL时，金钩南瓜石油醚提取部分的α－葡萄糖苷酶抑制活性最好(IC50=143.91μg/mL)，远远高于阳性对照阿卡波糖(IC50=1103.01μg/mL)。6种南瓜不同溶剂提取物中，除甜面大南瓜活性均较低外，其余品种南瓜石油醚提取物抑制活性均大于乙酸乙酯和甲醇提取物。

表2 南瓜提取物α－葡萄糖苷酶抑制活性Table 2 α－glucosidase inhibitory activity of the different extracts of C.moschata

2.3 提取物浓度对α-糖苷酶活性的影响

对活性高于阳性对照的不同品种不同溶剂提取物的浓度与抑制率关系进行研究(图1)，图中显示6种南瓜不同溶剂提取物的抑制率均与其浓度呈正量效关系。

图1中显示，金钩南瓜石油醚提取物，日本南瓜石油醚提取物，超甜蜜本石油醚提取物的α－糖苷酶抑制活性较高，在抑制率达到90%之前，抑制率几乎是随浓度的增大而呈线性增加，且此三种提取物的IC50相差不大。但金钩南瓜和日本南瓜石油醚提取物最大抑制率仅能达到90%左右，而超甜蜜本石油醚提取物却能达到100%。

比较其他6种提取物，金钩乙酸乙酯提取物，辽宁新民石油醚提取物，辽宁新民乙酸乙酯提取物，蜜本石油醚提取物，蜜本乙酸乙酯提取物，超甜蜜本乙酸乙酯提取物可发现其抑制率随浓度变化的趋势较一致，均随浓度的增加其抑制率缓慢增加。

图1 提取物浓度对α－葡萄糖苷酶抑制活性的影响Fig.1 The concentration of the different extracts of C.moschata effect on α－glucosidase inhibitory activity

3 结论

本文采用体外α－葡萄糖苷酶抑制模型对6种南瓜不同溶剂提取物的α－葡萄糖苷酶抑制活性进行研究，发现6种南瓜不同溶剂提取物均具有一定的α－葡萄糖苷酶抑制活性，在不同溶剂提取物中石油醚提取物的活性均高于乙酸乙酯和甲醇提取物。其中金钩南瓜石油醚提取物的活性最好(IC50= 143.91μg/mL)，活性远大于阳性对照阿卡波糖(IC50=1103.01μg/mL)。提取物的抑制活性在一定范围内均与浓度呈正相关性，说明其抑制活性具有剂量依赖性。

［1］国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草［M］.上海:科学技术出版社，1999.

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［9］李连春，杨忠羽.南瓜子治疗良性前列腺增生疗效观察暨药理作用探讨［J］.北方药学，2006，3(1):19－21.

［10］夏丽丽，杨志坤.南瓜中降血糖活性成分的药理研究［J］.黑龙江医药，2003，4(16):256－257.

［11］韩涛，李丽萍，孔维佳.复方南瓜粉对实验动物的降血糖作用［J］.食品工业科技，2002(增刊):51－54.

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［13］金晖，张拥军，朱丽云.南瓜多糖对α－葡萄糖苷酶抑制作用的研究［J］.中国食品添加剂，2011(2):111－114.

［14］Kang WY，Song SL，Zhang L.a－Glucosidase inhibitory and antioxidant properties and antidiabetic activity of Hypericum ascyron L［J］.Med Chem Res，2011，20:809－816.

Study on α－glucosidase inhibitory activity of extracts from six varieties ofCucurbita moschataDuch.

LI Chang－qin1，LU Yin1，GU Xue－zhu2，GU Hai－peng1，KANG Wen－yi1，*
(1.Institution of Natural Products，Henan University，Kaifeng 475004，China;
2.Institute of Chinese Materia Medica，Traditional Chinese Medical Research Institute，Beijing 100700，China)

Objective:To study the α－glucosidase inhibitory activity of extracts from six varieties ofCucurbita moschataDuch.(Jingou，Tianmian，Riben，Chaotianmiben，Miben and Liaoningxinminjingou).Methods:By established α－glucosidase inhibitory model in vitro，the activity of extracts fromC.moschatawas screened.The relationship of inhibitory ratio and the extract concentration were also studied.Results:Different extracts from six varieties ofC.moschataall had inhibitory activity of α－glucosidase，among which petroleum ether extract of C.moschata(Jingou)had the highest inhibitor activity of α－glucosidase(IC50=143.91μg/mL)，which was lower than that of Acarbose(IC50=1103.01μg/mL).Among different extracts inhibitor activity of petroleum ether extract was higher than that of ethyl acetate extract and methanol extract.Conclusion:The extracts from six varieties ofC.moschataall had inhibitory activity of α－glucosidase，but different varieties of the inhibition rate had certain difference.

Cucurbita moschataDuch.;α－glucosidase;inhibitory activity

TS255.7

A

1002－0306(2012)21－0093－03

2012－04－06 *通讯联系人

李昌勤(1971－)，女，副教授，本科，研究方向:生药研究和中药质量控制研究。

河南省科技厅重点攻关项目(112102310310);河南大学大学生创新性实验计划(11NB021)。