反相高效液相色谱法测定生力雄丸中淫羊藿苷含量

姜建伟

(三明市药品检验所，福建 三明365000)

生力雄丸是由人参、鹿茸、淫羊藿、韭菜子、蛇床子、蜻蜓、蚕蛾、咖啡因、马钱子(烫)、蟾蜍10味药材制成的复方制剂，具有补肾壮阳、益髓填精等功效，主要用于肾精亏损、性欲减退、阳痿早泄等症。其质量标准收载于《卫生部药品标准中药成方制剂第二十册》，但无含量测定方法。淫羊藿具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的功能［1］，是方中主要药味，其有效成分是淫羊藿苷［2］。为有效控制其药品质量，本研究采用反相高效液相色谱法测定淫羊藿苷的含量，不需要复杂的前处理，方法快速、准确、简单，可很好地控制制剂的内在质量。

1 仪器与试药

安捷伦1100高效液相色谱仪，BP一211D型电子天平，KQ3200DE型数控超声波清洗器。淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110737－200312);生力雄丸(太极集团重庆桐君阁药厂有限公司，批号为10050006，10120012、11060007，规格为0.32 g，素丸);甲醇、乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:岛津 Inertsil ODS－SP色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相:乙腈 － 水 － 磷酸(28∶72∶1)［3］;流速:1.0 mL·min－1;检测波长:270 nm;柱温:40 ℃;进样量:20 μL;理论板数按淫羊藿苷计应不得低于4 000。

2.2 溶液制备 精密称取淫羊藿苷对照品10.75 mg，置25 mL量瓶中，用70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液1 mL，置10 mL量瓶中，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

取本品20粒，研细混匀，精密称取约0.5 g，置锥形瓶中，精密加70%甲醇25 mL，称定重量，超声处理30 min，放置至室温，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

另按处方组成制备缺淫羊藿的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。

2 3 方法学考察 阴性干扰试验:精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各20 μL，分别注入高效液相色谱仪测定。阴性对照溶液色谱图中，在淫羊藿苷相应的保留时间附近无干扰峰(图1)。

线性关系考察:精密量取对照品贮备液(0.430 0 mg·mL－1)0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0 mL，分别置 10 mL 量瓶中，用70% 甲醇稀释至刻度，摇匀，各进样20 μL测定。以峰面积对进样量进行线性回归，回归方程为Y=2.117×103X+28.903，r=0.999 9(n=6)。结果淫羊藿苷进样量的线性范围为 0.172 0 ～1.720 μg。

图1 高效液相色谱图

精密度考察:依法取同一对照品溶液(43.00 μg·mL－1)连续进样，峰面积的RSD为0.08%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，在 0、1、4、12、24、48、72 h时分别进样测定。结果淫羊藿苷峰面积的RSD为1.5%(n=7)，表明供试品溶液至少在72 h内基本稳定。

重复性试验:取同批号样品6份，按上述方法制备供试品溶液，进样测定，结果淫羊藿苷平均含量是2.86 mg·g－1，RSD为0.85%(n=6)，表明方法重复性较好。

加样回收试验:取已知含量的样品适量，精密称定，分别精密加入淫羊藿苷贮备液 1.0 mL、1.2 mL、1.4 mL，按供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定，计算回收率，结果见表1。

表1 淫羊藿苷加样回收试验结果

2.4 样品含量测定 依法对3批样品测定含量。结果批号分别为10050006，10120012、11060007的样品含量分别为2.921 4 mg·g－1，2.861 8 mg·g－1，2.893 6 mg·g－1。

3 讨论

用高效液相色谱法测定淫羊藿苷含量时，比较了多种比例的流动相，结果以本试验用流动相较为理想。用70%甲醇超声处理30 min后的样品，过滤后残渣继续用70%甲醇超声10 min提取，同法测定，结果几乎不含淫羊藿苷。用反相高效液相色谱法测定含量简便可靠，淫羊藿苷峰形对称，基线分离，阴性无干扰，加样回收率符合规定。因此，该法可以用于生力雄丸的含量控制。

［1］肖培根.新编中药志［M］.北京:化学工业出版社，2001.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(一部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010.

［3］黄璐敏.HPLC法测定补肾强身胶囊中淫羊藿苷的含量［J］.中国药事，2005，19(7):429－430.